仙鹤复方水提物抗肿瘤及辐射增敏研究.doc

仙鹤复方水提物抗肿瘤及辐射增敏研究 张小燕：惠州市惠城区河南岸街道办事处社区卫生服务中心广东惠州516027 袁学文陈毓杰： 惠州市第三人民医院广东惠州516008 【摘要】目的 探讨仙鹤复方水提物对子宫颈癌Hela细胞的抗肿瘤和辐射增敏性能。方法建立细胞实验模型，将药物作用于Hela细胞。采用MTT法测定不同浓度仙鹤复方提取物对Hela细胞增值的抑制；并以克隆形成率法分析研究仙鹤复方对Hela细胞的放射增敏作用。结果仙鹤复方对Hela细胞的生长有显著的抑制性，且随药物浓度和用药时间的增大逐渐增加；仙鹤复方能有效提升Hela细胞的放射增敏性。结论仙鹤复方能有效的抑制子宫颈癌Hela的增殖，并能有效提升其放射增敏性。 【关键词】仙鹤复方抗肿瘤辐射增敏Hela细胞? 【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheanti-tumorandradiosensitizingresearchofXianhepound. MethodsEstablishcellsexperimentalmodels,andXianhepoundwasgiventoHelacells.HelacellsproliferationinhibitionbyXianhepoundwastestedwithMTTassayandradiosensitizingwastestedwithcolonyformationratemethod. ResultsXianhepoundcouldeffectivelyinhibittheproliferationofHelacells,andtheinhibitoryincreasedwiththeincreaseofXianhepoundconcentrationandtheadministrationtime.XianhepoundcouldeffectivelyenhancetheHelacellradiosensitization. ConclusionXianhepoundcaneffectivelyinhibittheproliferationofcervicalcancerHela,enhanceradiosensitizingproperties. 【Keywords】Xianhepound，Anti-tumor，Radiationsensitizer，Helacells 【Authorsaddress】Huichengdistricthenananstreetmunityhealthcenter，Huizhoucity,Guangdongprovince，516027PRC? doi:10.3969/j.issn.1671-332X.xx.06.01 恶性肿瘤严重威胁着人类的生命健康，统计数据显示全球每年因恶性肿瘤死亡的病例超过600万，而且还有?1000?万例处于死亡的边缘?1?。恶性肿瘤临床治疗方式主要有3种，包括：手术、放射以及化学治疗。但这些治疗的结果并不显著，因此，提高肿瘤患者临床疗效以及预后生活质量受到了广泛关注?2?。中医辨证认为肿瘤是由患者正气内虚、脏器功能紊乱、外邪毒入侵机体造成，邪毒蕴及于经络脏腑，造成机体阴阳失调，气血功能障碍，导致气滞、血瘀、痰凝、毒聚相互结交的一系列病理变化，日久而形成肿瘤?3?。仙鹤复方为我国中药复方，具有良好的抗肿瘤治疗效果。该复方由仙鹤草、白花蛇舌草、白英及甘草组成，临床有清热解毒、攻坚散结、祛瘀止痛的作用，对气滞、痰凝以及毒聚诱发的实体瘤，特别是肝癌、胃癌及宫颈癌的疗效显著?4?。本研究探讨了仙鹤复方对子宫颈癌Hela的抗肿瘤和辐射增敏性能。现报道如下。 1资料与方法? 1.1材料? 仙鹤复方中药材(仙鹤草、白花蛇舌草、白英及甘草)购自广州同仁堂中药店，由我院中药师鉴别确认。噻唑蓝(MTT)购自Sigma；TUNEL试剂盒购自中杉生物技术有限公司；优级新生小牛血清购自四季青生物工程公司；0?02%EDTA；0?04mol/L盐酸异丙醇；RPMI-1640培养基；(AO)/(EB)染液；Hela细胞株由中国科学院上海细胞生物研究所提供。? 1.2仙鹤复方提取物制备? 以水煮法对仙鹤复方进行提取，取50g药物仙鹤草、白花蛇舌草、白英、甘草经化裁而成，组分中各药物质量比为（?11?），粉碎后加入至10倍质量的水中，100度回流提取4h。冷却后用旋转蒸发仪浓缩，真空干燥的仙鹤复方水提物。JP? 1.3细胞培养及给药方式? 取一定质量的小牛血清、青霉素、链霉素加入到RPMI-1640培养液中，使其浓度分别为：10%、100U/ml、50mg/ml。取Hela细胞接种于自配的培养液中，放入二氧化碳培养箱中培养(培养箱环境：湿度为37%、CO?2浓度为5%)。细胞生长后进行传代，选对数生长期的Hela细胞进行实验。Hela细胞接种在96孔板中，浓度为110?5个/ml,继续培养24h后用药物进行干预。取配置的仙鹤药液，给予0?2、0?4、0?8g/ml3个梯度浓度药物。实验用PBS组进行对照。给药后培养24h，对Hela细胞凋亡情况进行检测。? 1.4观察指标? 对Hela细胞的增殖抑制率和辐射增敏性能进行观察。其中增殖抑制率以MTT法测定：按照上述的分组和给药浓度进行细胞培养。待培养24、48、72h后，将上清液倒掉；加入50lMTT后继续培养4h；将上清液吸弃后，加入100l盐酸异丙醇进行振荡；在570nm波长下，对其吸光度值进行测定。抑制率(%)=(1-OD实验组)/OD对照组100%。辐射增敏性能：以6、4、2、1、0的放射剂量对各组细胞进行照射，继续培养10d，吸弃清液，75%的乙醇固定后以Gemisa进行染色，观察计算克隆数。接种效率(PE)=(对照组克隆数/细胞接种数)100%；存活分数(SF)=实验组克隆数/(细胞接种数PE)100%。? 2结果? 2.1仙鹤复方对Hela细胞的抑制率? 以MTT法对仙鹤复方对Hela细胞的抑制作用进行了研究，结果见表1，可以看出：仙鹤复方对Hela细胞的增殖有明显的抑制作用，而且随着药物浓度的增大以及作用时间的延长，抑制效果显著增加。 2.2仙鹤复方对Hela细胞的辐射增敏实验? 以克隆形成率对辐射增敏进行了研究，结果见图1。随着辐射剂量的逐渐增大，Hela细胞的克隆数显著减少。尤其是在辐射剂量为6Gy时，Hela细胞基本上没有克隆形成。? 接着，在Hela细胞辐射照射前加入仙鹤复方，其克隆数比例结果见图2，可以看出不同药物作用时间，克隆率明显不同，本研究结果表明照射前16h给药的克隆形成率最小。 KH+1mmD 3讨论? 中医临床 * 主要包括扶正和祛邪两部分，扶正主要是指对患者进行补气、补血治疗，同时给予滋阴温阳的调理；祛邪是指对患者进行清热解毒、化瘀软坚的治疗。仙鹤复方是当前临床抗肿瘤的经验组方，由仙鹤草、白花蛇舌草、白英、甘草经化裁而成，组分中各药物质量比为（11）。组方中仙鹤草临床可以收敛止血、截疟、止痢以及解毒?5?；白花蛇舌草临床可以清热、利湿、解毒?6?；白英临床可以清热利湿、祛风、解毒?6?；甘草临床具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛的作用?5?。仙鹤复方调和诸药功能，临床具有清热解毒、攻坚散结的作用，同时还能有效对患者进行祛瘀止痛治疗。临床对气滞、痰凝和毒聚等诱发的实体瘤有较好的治疗作用。高静?7?在其研究中对仙鹤复方多糖的抗肿瘤活性进行了研究，高浓度药物对Hep-G2、JTC-26、S180、A549肿瘤细胞都有较高的抑制作用，抑制率分别为80?2%、88.3%、83?9%、89?3%。袁学文?8?在其研究中对仙鹤复方水提物在S180肉瘤及H22肝癌细胞中的增殖抑制率进行了研究，发现抑制率在20%40%左右。? 本研究就仙鹤复方水提物对子宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率和辐射增敏性进行了研究。首先是以MTT法对Hela细胞的增殖抑制率进行了测定，结果表明仙鹤复方水提物对Hela细胞的增殖有明显的抑制作用，而且随着药物浓度的增大以及作用时间的延长，抑制效果显著增加。从本研究的结果中可以发现0?8g/ml药物对细胞的抑制性达到了(89?758?24)，可以认定为临床使用剂量的上限。我们进一步的分析研究了仙鹤复方水提物对Hela细胞辐射增敏性，结果发现仙鹤复方对Hela细胞具有较强的辐射增敏性，而且照射前16h给药的克隆形成率最小。? 综上所述，仙鹤复方水提物能有效的抑制Hela细胞增殖，并对Hela细胞有较强的辐射增敏性。? 参考文献? 魏永燕，沈秀，刘培勋，等.中药仙鹤复方提取物急性毒性试验及对小鼠移植性肿瘤H22的抗肿瘤作用研究J.海峡药学，xx，19(2):27-29.? 2简晓顺,陈健清.近三年来我院抗肿瘤中成药用药分析J.现代医院,xx,13(4):67-68.? 3高凯民，周玲，陈金英,等.仙鹤草煎剂对HL-60细胞的体外诱导凋亡作用J.中药材，2000，23(9):561-562.? 4马丽萍，赵培荣，王留兴,等.仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用J.郑州大学学报:医学版，xx，42(1):149-151.? 5国家药典