体内药物分析测定前生物样品的预处理及定量分析方法.ppt

体内药物分析测定前生物样品的预处理及定量分析方法,一、体内药物分析的定义,体内药物分析是指通过采用不同的分析技术,对体内不同体液和组织的药物进行分离和分析,从分子、细胞水平来探索药物的体内动力学过程、药效学和毒理学机制。,二、体内药物分析的特点,干扰杂质多 样品量少，不易重新获得 药物浓度较低，对方法灵敏度和专属性要求高 检测分析方法，要求简便、快速、准确 实验室应拥有多种仪器设备 工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易,三、体内药物分析测定前生物样品的预处理,样品种类 常用的样品的种类包括血样,唾液和尿液 血样是指全血、血浆或血清,一般情况下血浆分离快、易得,故最常用 唾液是由腮腺、颌下腺、舌下腺及口腔黏膜内腺体分泌的 尿药浓度测定主要用于剂量回收、药物代谢和生物利用度等研究 脏器组织，除非特别需要，在临床治疗药物监测中很少使用,体内药物分析测定前样品的处理方法 蛋白质的去除 包括加入与水混溶的有机溶剂、加入沉淀剂、酶解法等。 有机破坏 当测定生物样品中的金属离子时, 多采用有机破坏的方法 分离、纯化与浓集 当药物浓度较低或分析方法的特异性或灵敏 度不够高时, 生物样品需进行分离、纯化与浓集处理，萃取法是应用最多的分离、纯化方法。,四、体内药物分析测定的基本程序,采样 样本贮存 样本制备 待测物的分离和鉴别 最后的定量分析,样品的采集 目前的采集样品多为血液和尿液 所用方法有室灌流法、灌流引流法、皮层造室灌流法等, 但是这些方法有一个共同的缺点, 就是对组织和器官有明显的损伤,并需在麻醉的状态下试验。 近年来,出现微透析法采集样品, 微透析可应用于任何组织和器官,对组织无明显的伤害,可以研究在非麻醉状态下动物体内各种微环境的变化。,样品的贮藏 血样、唾液取样后如不能立测定时,短期保存时可置冰箱(4)、长期保存时需在-20或-80冷藏。全血未经分离时, 不宜直接冷藏保存。 尿液若需收集2预处理4小时或更长时间的样品或不能立即测定的, 应加入防腐剂后置冰箱中冷藏保存。,样品的制备,即样品的预处理 样品通常在最后测定前要采取适当的样品制备,即进行分离、纯化、浓集三步,必要时尚需对待测组分进行化学改性,为测定创造良好条件。 样品的预处理是体内药物分析中最复杂最繁琐也是最重要的一步, 目的主要是排除干扰, 提高分析灵敏度,定量分析 荧光分析法 利用物质发射荧光的特性进行分析的光学分析法。其优点是灵敏度高、选择性好等。 高效液相色谱法 ( HP LC) 它是以经典液相色谱为基础,以微粒型填料作固定相,采用高压送液泵和各种高灵敏度检测器。具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高等特点。 免疫分析法 免疫分析法特别适用于色谱法难以分析的药物,五、展望,近年来体内药物分析发展迅速,各种新方法、新技术的联合使用使得从样品的采集、处理、分离到检测完全自动化成为了现实 , L c - MS / MS 、L c - N MR、LC - N MR / MS等的联合正深刻改变并推动着体内药物分析的发展 , 采集样品的无损化、微