课件：实验五新生儿溶血病.ppt

实验五 新生儿溶血病,（Hemolytic disease of the newborn， HDN ）,新生儿溶血病的定义,HDN是指因母、婴血型不合而引起的胎儿或新生儿同种免疫性溶血，出现黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大，甚至死胎、新生儿死亡等溶血病的症状和合并症。,HDN的分类,ABO-HDN Rh-HDN 其他血型系统-HDN,ABO-HDN和Rh-HDN的区别,ABO-HDN Rh-HDN 病因 ABO血型不和 Rh血型不和 母亲血型 O型多见 Rh阴性 婴儿血型 A、B、AB型 Rh阳性 发病率 3-5% 较低 免疫刺激 不需 孕产史、输血史 首发胎数 第一胎 第二胎（外祖母学说除外） 直抗 -1+ 1+以上 放散液制备 冷冻、热放散 乙醚放散 换血治疗 O型RBC Rh血型同母亲 AB型血浆 ABO血型同婴儿型或O型血,新生儿溶血病检测的方法及原理,新生儿ABO及Rh血型鉴定 “三项试验” ： 直抗试验 游离试验 释放试验,实验方法,1、准备：离心分离血清和RBC，生理盐水洗涤RBC3次，取少量RBC配成35的RBC悬液。血清和洗好的压积RBC备用。 2、新生儿ABO及Rh血型鉴定:试管法。 3、直接抗球蛋白试验:,35%RBC 1滴 抗球蛋白试剂2滴,3000rpm 离心15s,凝集：阳性,无凝集,加阳性对 照细胞,凝集：阴性,无凝集：抗球蛋白试剂失效,游离试验,原理 检测新生儿血清中是否存在针对 新生儿RBC血型抗原的IgG血型抗体。 检测出 A型抗A B型抗B AB型抗A、抗B或抗A、B Rh阳性抗D。,游离试验（抗球蛋白卡法）,ABO-HDN游离试验 A型RBC B型RBC O型RBC 婴儿血清 Ac管 50l 25l Bc管 50l 25l Oc管 50l 25l Rh-HDN游离试验 1号细胞 2号细胞 3号细胞 婴儿血清 1 50l 25l 2 50l 25l 3 50l 25l 37孵育15min，以1030rpm离心10min。观察结果。,2019/8/20,9,可编辑,ABO-HDN游离试验结果判断 Ac Bc Oc 意 义 + - - 存在游离的抗A抗体 - + - 存在游离的抗B抗体 + + - 存在游离的抗A、抗B抗体或抗A、B抗体 +/- +/- + 存在游离的ABO血型系统以外抗体 - - - 没有游离抗体 只有当血清中检出相应抗体，同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为游离试验是阳性。 Rh-HDN游离试验结果判断：任何一管出现凝集则血清中存在不规则抗体（抗D?进一步做抗体鉴定)。3管均不出现凝集则血清中不存在不规则抗体。,放散试验,原理 利用特殊的方法将致敏在新生儿红细胞上的抗体放散下来，然后再检测放散液中的抗体。,放散液制备,1.热放散 2.乙醚放散：,1份RBC 1份盐水 2份乙醚,振摇1min（排气） 离心3min,上层乙醚 中层RBC基质 下层放散液,吸管吸出放散液，置37水浴中 30min，除尽乙醚，然后鉴定抗体。,取洗涤压积RBC 1份（1ml左右）,生理盐水 1份,上清液即为 放散液,56水浴 轻摇7分钟 立即离心,+,放散液中抗体的检测（卡法）,ABO-HDN放散试验 酶处理AC 酶处理BC 酶处理OC 放散液 酶A管 50l 25l 酶B管 50l 25l 酶O管 50l 25l Rh-HDN放散试验 酶处理 1号细胞 2号细胞 3号细胞 放散液 1 50l 25l 2 50l 25l 3 50l 25l 37孵育15min，以1030rpm离心10min。观察结果。,释放试验结果判断,ABO-HDN放散试验结果判断 酶处理Ac 酶处理Bc 酶处理Oc 意 义 + - - 释放出IgG抗A抗体 - + - 释放出IgG抗B抗体 + + - 释放出IgG抗A、抗B 抗体或抗A，B抗体 +/- +/- + 释放出ABO血型系统 以外抗体（加做谱细胞） - - - 未释放出抗体 只有当放散液中检出相应抗体，同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为释放试验是阳性。 Rh-HDN放散试验结果判断：任何一孔出现凝集则放散出不规则抗体（抗D？抗体鉴定)。3孔均不出现凝集则没有放散出不规则抗体 。,新生儿溶血病检测的结果判断,直抗试验 游离试验 释放试验 结论 - - - 不能证实为由血型抗体引 起的新生儿溶血病 + - - 可疑为新生儿溶血病 - + - 可疑为新生儿溶血病 - - + 证实为ABO新生儿