水生实验动物质量监测.ppt

实验动物质量标准和监测,张 钰 广东省实验动物监测所,实验动物是指经人工培育、遗传背景清楚、对其质量实行控制、用于科学试验及产品生产的动物。 区别于实验用动物。,与实验动物相关标准,实 验 动 物 遗 传 （3）,实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制 GB14923,实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法 GB/T14927.1,实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法 GB/T14927.2,近交系、封闭群、杂交群 近交系：至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可以追溯到起源20代或以后代数的一对祖先。近交系数应大于99%。 封闭群：以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从外界引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上。 杂交群：由不同品系或种群之间杂交产生的后代。,遗传监测重要性 保障品系的遗传特性 防止发生遗传突变和遗传污染,实验动物寄生虫学等级及检测 GB14922.1,实验动物寄生虫学检测方法GB/T18448.1-18448.10,实验动物微生物学等级及检测 GB14922.2,实验动物微生物学检测方法（1）GB/T14926.42-14926.43,实验动物微生物学检测方法（2）GB/T14926.1-14926.6 ；GB/T14926.8-14926.17 ；GB/T14926.41；GB/T14926.44-14926.49,实验动物微生物学检测方法（3）GB/T14926.50-14926.55,实 验 动 物 质 量 （8）,实验动物检测方法（4）GB/T14926.18-14926.32 GB/T14926.56-14926.64,SPF鸡微生物学监测总则 GB/T17998,普通级动物 （Conventional Animal, CV） （基础级动物）,清洁级动物 （Clean Animal, CL）,无特定病原体级动物（Specific Pathogen Free Animal, SPF）,无菌级动物 （Germ Free Animal, GF）,GB14922.1 GB14922.2,实验动物,SPF级动物监测项目,我国实验动物质量要求的最低标准，其它行业、地方标准不能低于国家标准要求。,保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。 确保实验数据的准确性和可重复性。,质量监测意义,实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测,实 验 动 物 环 境 设 施 （2）,实验动物环境与设施 GB14925,实验动物设施建筑技术规范 GB50447,日常性监督指标 温度、日温差、相对湿度、压差； 监督性检测指标 沉降菌、氨气浓度、噪声、照度； 必要时检测指标 空气洁净度、换气次数、气流速度、昼夜明暗交替时间。,实 验 动 物 营 养 和 饲 料 （12）,实验动物配合饲料通用质量标准 GB14924.1 实验动物配合饲料卫生标准 GB14924.2 实验动物小鼠、大鼠配合饲料 GB14924.3 实验动物兔配合饲料 GB14924.4 实验动物豚鼠配合饲料 GB14924.5 实验动物地鼠配合饲料 GB14924.6 实验动物犬配合饲料 GB14924.7 实验动物猴配合饲料 GB14924.8,实验动物配合饲料常规营养成分的测定GB/T14924.9 实验动物配合饲料氨基酸的测定GB/T14924.10 实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定GB/T 14924.12 实验动物配合饲料维生素的测定 GB/T 14924.11,笼具 （地方标准）,塑料笼箱；隔离器； 代谢笼；笼架； 层流架；饮水瓶；IVC,动物,编号,外观检查,麻醉,皮肤取样,取血,无菌解剖,检测,检测报告,真菌检查,分离血清，检查病毒抗体或其他病原抗体,气管分泌物、肠内容物、脏器分离细菌,采用抽样检测。 检测程序包括监测项目的选定、采样、检测。,采样,要求,方法,成年动物,哨兵动物法（CD1小鼠）,繁殖单元,随机抽样法（例如四角和中央）,检测频率,普通级动物：每三个月至少检测 动物一次。,清洁级动物：每三个月至少检测动物一次。,无特定病原体动物：每三个月至少检测动物一次。,无菌动物：每年检测动物一次。每2-4周检查一次动物的生活环境标本和粪便标本。,监测方法,GB/T 14926.1-14926.64 GB/T 18448.1- 18448.10,水生实验动物的质量控制,水生生物终生生活在水中，绝大部分体外受精、体外发育，在许多领域得到广泛应用，是毒性试验、环境监测、发育生物学、生理学、生态学、遗传学等研究常用的实验材料。 目前还没有质量监测标准，来保障实验用水生生物的质量。,国际斑马鱼研究中心提供974种斑马鱼，主要包括野生型和转基因和基因突变动物。,检测类别,水体质量问题 一般检查和剖检 细菌疾病 寄生虫疾病（原生虫疾病、多细胞寄生虫） 非感染性和先天性疾病 肿瘤疾病,国内外斑马鱼环境控制指标一览表,水体质量问题（Water Quality Problems）,铜毒性 氯毒性 氨毒性 亚硝酸盐毒性 气泡病（Gas Bubble Disease）,铜毒性 表现：咳嗽反射、换气次数和氧消耗增加、部分鱼嗜睡或不协调；发育迟缓、畸胎。 显微观察：鳃和侧线损伤，肝细胞可能出现空泡。 氯毒性 鱼对氯很敏感，引起急慢性死亡。 表现：鱼鳃严重急性坏死，呼吸困难，头周围出现斑点。 显微观察：鱼鳃严重坏死。,氨毒性 表现：行为异常（兴奋过度、厌食、生长迟缓，对病原敏感），换气减少。 显微观察：鱼鳃上皮增生。 亚硝酸盐毒性 表现：组织缺氧。,气泡病 气体饱和度超过当时温度、盐度和压力条件下的最大值。 表现：皮肤、鱼鳍或鳃出现肉眼可见泡沫，眼球后组织也可见明显泡沫，眼球突出。 显微观察：组织切片可见泡沫。,一般检查和剖检（General Diagnostics and Necropsy Protocols ）,行为 体表检查 鱼腮 剖检 触片（imprints） 组织学,行为,摩擦,寄生虫,反常的 呼吸模式,腮损伤,旋转或 盘旋游泳,神经损伤,另一些疾病迹象 （绝食、精神萎靡、待在不正常部位）,体表检查 ：立体解剖显微镜 异常：鱼鳍磨损、眼球混浊、溃疡、褪色、体表寄生虫和肿瘤等 制作湿片（Prepare wet mounts ） ：观察寄生虫和其它病原体,鱼腮 颜色 解剖镜下检查 ：寄生虫、囊肿、粘液过多和出血等 制作湿片：寄生虫、真菌和细菌,剖检： 体腔：腹水、出血或其它异常 肾脏：肿大、褪色 心脏：是否正常 内脏器官：白色的囊肿可能感染分支杆菌 组织压片：寄生虫、真菌或肉芽肿 触片：常用Giemsa或Diff-Quik染色 对肾脏或其它感染脏器检查原虫和细菌,组织诊断 鱼的整体（通常纵切）或有代表性的脏器进行固定，固定液Dietrichs或Davidson，进行切片，染色镜检。,细菌疾病（Bacterial Diseases）,分支杆菌病（Mycobacteriosis ） 滑动细菌（Gliding Bacteria） 细菌性喉囊炎（Bacterial aerocystitis）鱼鳔细菌感染,分支杆菌病 病原：海分支杆菌、脓肿分支杆菌、龟分支杆菌、偶发分支杆菌、草分支杆菌和嗜血分支杆菌等。 临床症状和病变：溃疡、出血、头部周围充血、鱼鳞凸起、鱼鳍磨损、皮肤或鳃苍白等。内脏器官白色结节。 显微观察：肉芽肿 诊断：抗酸染色、PCR确诊。,滑动细菌（细菌性鳃病、环境性鳃病） 病原：黄杆菌属、屈桡杆菌等菌属；淡水鱼主要感染柱状黄杆菌和嗜鳃黄杆菌。 临床症状和病变：呼吸困难，鱼鳍和鱼尾表现特征性鱼鳍腐蚀，白色。 显微观察：上皮增生，次级鳃瓣融合，有的坏色，病变部位可见大量细菌。 诊断：观察到细菌。,细菌性喉囊炎 病原：不能确定具体的细菌类型，免疫抑制鱼内脏细菌移植到鱼漂引起疾病。 临床症状和病变：嗜睡，聚集鱼池底部。鱼鳍基部出现红斑。 显微观察：鱼漂出现大范围损伤和严重慢性炎症。组织切片可见明显坏死，革兰氏染色可见大量细菌群落。 诊断：组织切片观察到特征性损伤，多种染色证实细菌的存在。,寄生虫病,天鹅绒疾病（Velvet Disease） 微孢子虫病（Microsporidiosis） Ich（白点病）,原生动物疾病（Protozoan Diseases）,原生动物疾病,天鹅绒疾病 病原：淡水天鹅绒（Piscinoodinium pillulare ）鞭毛虫纲，腰鞭毛虫目 生活史：腰孢子虫阶段 滋养体 分裂前体 腰孢子虫 临床症状：精神萎靡，浮于水体表面，呼吸困难 显微观察：皮肤或鱼鳃湿片见滋养体 组织切片 ：鳃感染上皮增生，皮肤感染上皮增生和坏死 诊断：切片中见滋养体(卵形的、不透明、无运动能力 ),微孢子虫病 病原：微孢子虫（Microsporidium）（微孢子门、微孢子目 ），特定种属名：Paeudoloma neurophilia； 生活史：专性细胞内寄生，复杂生命周期，产生具有传染性和抵抗性的孢子，通过摄入具有传染性的孢子感染。 临床症状：衰弱和脊柱弯曲症状 显微观察：中枢神经系统（脊索和后脑）可见孢子 诊断：观察到孢子（湿片或切片）,A：衰弱；B：脊柱弯曲,Ich（白点病） 病原：多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis) （纤毛虫纲、膜口目、凹口科） 临床症状和病变：粘液过多、呼吸困难和精神萎靡，皮肤凸起的白色节结 白点 显微观察：皮肤和鳃的湿片可见纤毛虫 湿片，组织切片可见上皮增生、滋养体。 诊断：湿片见纤毛虫，确诊见到滋养体，寄生部位发现虫体。,体表白点（红大马哈鱼Sockeye salmon ）,腮的湿片（箭头为纤毛虫）,多细胞寄生虫（Metazoan Parasites）,毛细线虫病（Capillariasis） 肾粘孢子虫病（Renal Myxosporidiosis）,毛细线虫病 病原：毛细线虫（蠕虫），Pseudocapillaria tomentosa是第一个鉴别的感染斑马鱼的毛细线虫，具有广泛的宿主。 临床症状和病变：发黑、衰弱、嗜睡、剖检肝肿大和贫血。 显微观察：雌虫肠道湿片充满特殊虫卵湿片，组织切片见蠕虫位于肠壁，感染组织严重蜂窝织炎 切片。 诊断：椭圆形、具双极囊的卵存在；确诊还需观察到虫体。,肠道湿片,肠道切片,肾粘孢子虫病 病原：粘原虫（粘原虫门，粘孢子虫纲），两极虫属（Myxidium）或楚克拉虫属（Zschokkella） 生活史：滋养体阶段和多细胞的孢子阶段。鱼吞食孢子或粘附鳃和皮肤感染。 临床症状和病变：一般无明显临床症状，可在多个器官中形成包囊。 显微观察：病变组织切片见虫体；粘孢子具有特殊极囊 （亚甲基兰和吉姆萨等特殊方法染色）。 诊断：组织切片观察到虫体。,位于肾小管中滋养体,粘孢子具两个极囊 Giemsa 染色 返回,非感染性和先天性疾病（Non-infectious or Idiopathic Diseases）,肾钙质沉着症（Nephrocalcinosis） 心脏病：心包积液和扩张性心肌病 卵相关炎症（Egg-Associated Inflammation） 肝红细胞症（Hepatic Megalocytosis）,肾钙质沉着症 钙在肾小管和集合管中沉积而成。水中较高CO2浓度（12mg/L）；食物中钙镁较高等。 临床症状和病变：一般无明显临床症状。 显微观察：组织切片见肾小管和集合管中有嗜碱性、水晶状的沉积物。 诊断：肾组织切片中钙的沉积。,钙沉积,心脏病 临床症状和病变：心脏区域非常肿胀，切开出现严重出血或大块的血栓 显微观察：心包腔中充满血液或蛋白样渗出物；组织切片见心室扩张，充满液体。 诊断：剖检心脏出血，组织学确定。,心脏区域凸出,卵相关炎症 临床症状和病变：腹部扩张，卵巢成实心、瘤状物，甚至从内到外体表出现白色的溃疡 显微观察：严重慢性炎症，纤维素增生，纤维素瘤。 诊断：组织学变化。,体侧形成溃疡,肝红细胞症 肝细胞的细胞质和细胞核极度扩大。 临床症状和病变：无明显临床症状 显微观察：组织切片见个别肝细胞的核过度肥大。 诊断：发现扩张的肝细胞极度增大的细胞核。,部分肝细胞肿大,肿瘤疾病,精原细胞瘤（Seminoma） 肠癌（Intestinal Carcinoma） 后腮瘤（Ultimobranchial Neoplasia） 甲状腺瘤（Thyroid Neoplasia） 肝脏肿瘤（Hepatic Neoplasia） 梭形细胞肉瘤（Spindle Cell Sarcomas） 血管瘤（Hemangiomas）,精原细胞瘤 肉眼变化：常见的自发性肿瘤；腹部肿胀，柔软、白色多室性的肿块。 显微改变：精母细胞的精原细胞瘤；生殖细胞可分化成不同的发育阶段，甚至有精子形成切片,精原细胞瘤,精原细胞瘤（精母细胞和精子细胞都存在）,2. 肠癌 肉眼变化：无明显的眼观变化；一些极端病例中，可见内脏团柔软到坚硬，呈棕褐色；大多数发生肠道的前端。 显微改变：不同的形态，腺泡肿瘤，小细胞癌等。,3. 后鳃瘤 肉眼变化：超过1.5岁的雄鱼比较普遍，无明显的眼观变化。 显微改变：后鳃腺体积增大50倍；