中药配伍的实验研究思路.doc

中药配伍的实验研究思路 姓名: 杨玲 学号：2012115 题材：综述类前言： 长期以来, 对复方中药味之间的作用关系一直是凭经验来理解的, 诚然传统的中药配伍理论包含着人们对物质世界的经验认识, 但现代科学要求我们不仅要观察和描述现象,更要解释和说明本质。时代的进步, 技术的发展使通过实验研究来认识配伍理论, 并从实证意义上理解复方配伍的合理性提供了可能【1】。因此复方配伍的实验研究在中医药现代研中占有重要位置, 自本世纪60 年代以来, 对中药复方配伍的实验研究越来越引起人们的重视。1. 中药配伍的历史沿革 历史上出现中药配伍的文字记载，最早见于左传“鞠芎、麦曲，治河鱼腹疾”。东汉神农本草经序例中就有“药有阴阳配合，子母兄弟，根茎花实、草石骨肉。有单行者，有相须者，有相使者，有相畏者，有相恶者，有相反者，有相杀者。凡此七情，合和视之。当用相须、相使者良，勿用相恶、相反者。若有毒制，可用相畏、相杀者，不尔，勿合用也”的论述。神农本草经将中药配伍分为三个方面，即根据药性的阴阳属性，进行配合使用；根据药物的不同性质、部位进行配合使用；根据临床用药的实际需要，进行“七情”配伍应用。金元以来，历代医家主要对中药七情配伍进行了阐发，尤以明代李时珍本草纲目阐述最为简明，影响最大。时珍曰“药有七情，独行者，单方不用辅也；相须者，同类不可离也，如人参甘草、黄柏知母之类；相使者，我之佐使也；相恶者，夺我之能也；相畏者，受彼之制也；相反者，两不相合也；相杀者，制彼之毒也”。从此，古今各家论著多宗于此。 西方医药传入我国以后，我国医药学家尝试中药与西药配伍合用。如张锡纯医学衷中参西录创立“石膏阿司匹林汤”，开创中西药联合使用的先河。随着中西医结合工作的深入开展，中西药同用防治疾病日益广泛。中西药配伍应用的实例越来越多。主要表现为三个方面，一是中西药合用，协同增效。二是中西药合用，减轻或消除西药的毒副作用。三是中西药合用，毒性增加。2. 中药配伍的概念与层次【2】2.1 中药配伍的概念 中药配伍是指根据病情的需要和药物的特点，将两味或两味以上功用不同的药物进行合理的组合，调其偏性，制其毒性，增强或改变原有功效，消除或缓解对人体的不良因素，发挥其相辅相成或相反相成的过程。简言之，主要指中药与中药之间，有目的、有规律、有依据的配合应用。2.2 中药配伍的层次中药传统意义的配伍，主要包括药队配伍和饮片配伍。但随着现代技术方法的应用，中药药效物质基础和药物作用机制的研究，中药组分配伍和成分配伍又成为中药配伍研究的新领域。从配伍层次来看，中药配伍包括药队配伍、饮片配伍、组分配伍、成分配伍四个方面：药对配伍 药队作为临床上常用的、相对固定的药物配伍形式，其组成虽简单，却具备中药配伍的基本特点。因此，要进行中药配伍规律研究，药队配伍研究是必不可少的环节。但需说明的是，药队配伍并不是指两药配伍，而是指三药以上相对固定的药物配伍形式。六味地黄丸三补（熟地、山茱萸、山药）、三泻（泽泻、牡丹皮、茯苓）的配伍，组成六味地黄方，用于治疗多种疾病，尤其对于生殖内分泌相关疾病、物质代谢方面的疾病具有显著疗效 。饮片配伍 中药的配伍主要是以药材饮片配伍的形式应用于临床，因此，研究中药配伍，必须落实到药材饮片配伍。中药七情配伍的药效物质基础与作用机制是药材饮片配伍研究的主要内容。如附子配伍干姜，中医药古今临床应用频率高，二药配伍，一则相须为用，增强温中散寒、回阳救逆功效；一则相杀为用，干姜能够降低附子的毒性，抑制附子的峻烈之性，两者同煎，降低附子3种毒性生物碱(乌头碱、中乌头碱、次乌头碱)的含量，降低心脏毒性。组分配伍 随着中医药现代化的发展，组分配伍逐渐成为目前现代中药配伍研究的热点。中药组分配伍是指在基本搞清药队和药材饮片配伍药效物质和作用机理的基础上，以系统科学思想为指导，以药化、药理、药物信息学、计算科学和复杂性科学等多学科技术为手段，从临床出发，遵循传统配伍理论与原则，强化主效应，减轻或避免副效应，形成针对特定病证的组效关系明确的中药组分配伍形式。组分配伍研究主要包括组分的提取、分析、评价和作用机理研究几方面，其核心就是药效物质和作用原理研究。成分配伍 成分配伍是在饮片配伍、组分配伍研究的基础上，进一步揭示各组分中提取出来的化学成分之间的配伍配比关系，以期较清晰地说明其与组分配伍、药材配伍的内在、本质联系。成分配伍是中药配伍研究中容易与国际接轨的研究方法，也是最能体现质量可控、安全有效、机制清楚的研究目的和方法。3. 中药配伍实验研究研究的思路和方法中药配伍实验研究主要包括实验设计方法、药理学研究和药物化学研究3个方面，其中，实验设计方法是进行配伍研究所必须首先解决的问题。3.1 实验设计方法 中药的药味在方中地位上有君、臣、佐、使的差异，药物间存在相须、相使、相乘、相恶等关系。研究中药配伍的方法可分为传统模式和现代模式【3】。传统模式分为全方研究和拆方研究，主要是在饮片层次对整体效果进行研究及拆方后药物的配伍组合对复方的作用机制进行研究;现代模式的研究主要是中药有效成分的配伍研究，是在组分层次上的研究。3.1.1 传统模式3.1.1.1 全方研究 全方研究是指将一复方药物经一定方法制备成制剂后, 将此制剂视为一个整体用于研究, 即研究复方整体的药理作用或对复方整体进行药物化学分析, 是早期复方研究的方法之一。关于整方的药物化学分析的研究较少, 多为药理学研究。全方研究有助于复方药理学的阐述, 为复方的临床应用提供药理学依据。由于复方制剂在临床常常以一个整体形式出现, 因此将复方制剂视为一个整体药物进行药理学评价最能说明其药效与临床治疗作用的相关性。然而由于复方的成分复杂, 整方研究的方法难以揭示复方的配伍规律, 因此, 在探讨复方的配伍规律时还应进行拆方研究。3.1.1.2 拆方研究【4】拆方研究包括单味药研究法、药对研究法、药物组间关系研究法、撤药研究法、正交设计法、聚类分析法、均匀设计法、析因分析法等方法。这些研究从现代药理学、药物化学角度一定程度上阐明了复方配伍规律, 为新药研制提供了可靠的实验依据。A.单味药研究法 单味药研究是把复方拆为各单味药,研究其中每一味中药及全方的药理作用, 从中找出起主导作用的药物, 或各味药物在复方中的地位, 或各味药之间的最佳配伍比例。B.撤药分析法 撤药分析法是在全方药效评价的基础上, 分别从复方中撤出一味或一组药物后进行实验, 用以判断撤出的药味对原方功效影响的研究方法。 该方法使用时如果考察的药效指标比较全面, 即可分析出各味药在全方中的功能及作用机制, 从而起到揭示复方配伍规律的作用。但此方法工作量大, 不适合大型复方配伍规律的研究。C.分组研究法 不论是现代经方还是传统古方都是在中医药理论指导下遵循一定的配伍原则组成的, 因此, 运用传统中医理论指导分组研究是中药复方拆方研究是最常用的方法之一。 按君臣佐使的组方原则进行的分组研究法 赵冬梅等【5】 以吴茱萸汤为研究对象, 从吴茱萸汤的君臣佐使配伍关系出发, 以君药吴茱萸为核心, 进行拆方研究, 结果均证实了吴茱萸汤组方的合理性和全方配伍合煎的科学性。 根据中药性味关系的分组研究法 赵琰等【6】为研究半夏泻心汤的配伍规律, 按不同性味将此方拆成辛甘药组, 苦味药组, 甘味药组, 以血清中胃泌素含量为指标, 探讨其治疗消化性溃疡的作用机制, 证明了不同辛味药物之间的配伍, 直接影响其生物效应。 根据中药功效的分组研究法 甘贤兵等【7】使用戊四唑( PTZ) 点燃大鼠模型, 采用行为学方法, 观察草果知母汤加减方及其拆方对PTZ点燃大鼠的影响, 结果显示调理脾胃气机组、清肝敛肝合清心开窍组效果显著, 但仍以全方效果更佳。 根据药对的分组研究法 杨挺等【8】使用高效液相色谱法对不同拆方(即全方、山萸肉单药、含山萸肉的药对、含山萸肉的队药)中马钱素进行含量测定, 结果表明, 药对中马钱素含量最高; 队药和山萸肉单味药中马钱素含量其次,全方药材中马钱素含量最低。D. 根据有效部位或成分的分组研究法 丁晓刚等【9】对黄芩汤及其单味药有效部位组方治疗大鼠溃疡性结肠炎进行拆方研究, 结果表明黄芩汤单味药有效部位的各组方均有不同程度的抗炎、止泻、镇痛作用, 其中以黄芩苷+ 甘草酸+白芍总苷+ 大枣cAMP效果最佳。E. 应用数理原理指导拆方研究(1) 正交设计法 钟正贤等【10】采用正交试验设计对抗胃溃疡三七复方中组成药味进行三七与各药味用与不用的组合, 结果从8个处方中确定了最佳处方, 为探讨三七配伍抗胃溃疡的药效规律提供了一个可行的方法。该方法在一定程度上减轻了工作量, 但仍存在工作量较大的问题, 而且该方法多采取单味药分别处理, 然后再组合成复方进行研究, 这与复方整体处理仍有一定差异。虽然正交试验法应用较多, 但其不足之处是与中医理论相脱节。(2) 正交t值法 正交t值法将中药拆方分析过程分为3步, 即主药分析、辅药交互分析和剂量选择。该方法适用于4-11味药物的复方研究。李广清等【11】将痹痛灵中9味中药作为处理因素, 采用正交t值法对不同中药配伍组合对二甲苯诱发小鼠耳肿胀及醋酸所致小鼠扭体反应的结果进行分析, 从抗炎、镇痛两方面药理作用综合考虑, 进行了初步的处方筛选。(3)均匀设计法 均匀设计法是将中药复方的药物(因素)和剂量(水平)按一定的均匀设计表安排,适用于多因素多水平的方剂拆方研究。凤良元等【12】采用均匀设计法对肝纤康A进行拆方研究, 筛选出方中各药味的最佳配伍比例并确定优化组方(肝纤康F),通过拆方研究,确定优化组方为肝纤康F(90:75:24)。证明了经筛选优化的最佳配比在显著降低肝纤维化小鼠肝组织(Hyp)和血清(ALT)水平方面比原方更有效。(4)聚类分析法 聚类分析即按照相似性和差异性的分布,将数据对象按照不同的属性特征聚集为不同的类,然后结合领域知识对方剂的制方要素进行分析。苏薇薇【13】以中药的性味归经为特征,采用模糊聚类分析对万氏牛黄清心丸和小柴胡汤进行分析,将方中诸药分成几个药群(君、臣、佐、使),探讨了中药复方的组方规律,结果符合传统中医药理论。(5)析因分析法 该方法是以中医理论为指导,按不同治法或君臣佐使的配伍关系、药物性味的不同或按药对关系进行拆方。陈萌等【14】将半夏泻心汤拆为辛温、苦寒、甘补三组, 并将这三个单味组作为三个不同的因素, 采用23析因实验设计,根据实验结果分析了方中各单味组的药效及配伍特点,部分揭示了半夏泻心汤的消痞散结机制。(5)直接实验设计 这种方法是在正交试验的基础上提出的, 它吸收了序贯设计原理, 综合考虑了5种优良性准则,并运用多种回归分析的方法,揭示因素、水平的不同组合与“响应变量”的关系与规律, 可提高实验效率【15】。3.1.2 现代模式的研究【16】中药有效成分配伍是指利用中药中成分明确、药理作用清楚的生物活性物质，结合中医药理论进行有效成分组方配伍。对中药有效成分组方配伍研究方法的现代模式主要是中药有效成分的配伍研究，是在组分层次上的研究。以下简单介绍几种现代模式的研究方法：3.1.2.1 因果关系发现设计 因果关系发现设计是将复方分离获取若干组分，并研究各组分的化学有效成分组成;最后根据实验要求,将分离所得各有效成分组分重新配伍组合，并选择代表主要效应的药效作为指标开展药效学试验而得到数据集。3.1.2.1 基线等比增减设计 基线等比增减设计适用于效应明确，含有两种药物的中药较小复方。在总量恒定的前提下要以药典记载的配比为标准。3.1.2.3 极性分段筛选设计极性分段筛选设计是把全方与全方中的单味药或组分的进行指纹图谱，对每一中物质或组分按照照响应值进行分类，归纳物质的极性类别，按功能和效应组成不同配比的系列制剂进行分类，并对整体评价的一种筛选方法。3.1.2.4 实验设计非线性建模2 多目标优化的三联法三联法是在等比基线实验设计基础上，进行非线性造模和对模型的多目标优化方法，适宜处理多自变量、多因变量和非线性量效函数关系的复方。例如针对样品的近红外光谱与其物理化学性质之间存在的非线性关系,提出了一种结合等距映射和偏最小二乘的非线性建模新方法。Ison即是一种新的非线性降维方法,属于流形学习方法,能有效地发现高维数据中的本真低维结构。3.1.2.5 配伍计量分析法 配伍计量分析法最初是在分析毒扁豆碱和阿托品拮抗作用的等效曲线中体现出来，例如用RRS光谱和同原射线计量分析法同时测定D-和L-色氨酸对应异构体。中药穴位贴敷或三伏贴治疗小儿反复呼吸道感染的文献为研究对象,采用文献计量分析法,对中药穴位贴敷治疗小儿反复呼吸道感染进行评述。3.1.2.6复方效应模型评价法复方效应模型评价法是对多个组分一般在三个组分到六个组分的复方进行药效模型评价。此法先根据复方组分数量，选用适当的两水平正交设计，并应用双向单侧t检验进行分析,确定各组分对复方药物效应的影响，将各个组分进行排列按照影响程度的大小，区分协同与拮抗成分，对不同组合的复方进行药效模拟评价，并进行不同组合的效应预测。例如中药复方的核心是合理的配伍，效应可出现在中药用药的药动学环节、药效学环节。中药复方的研究体现了化学成分的有机配伍和多环节、多靶点的协同作用。3.2 药理效应研究【17】药理效应研究法从药效学角度对方中各药(或药组)的作用、地位及其相互关系进行了探讨，证明方剂中各药味间具有协同或拮抗的相互作用,各组成药物在方中具有君、臣、佐、使不同作用，在一定程度上验证了方剂组成的合理性及中药配伍应用的优越性，为方剂配伍研究提供了一定的药理学实验基础。现代中药药理研究要针对发病的多个环节，应用系统思维方法，结合数学优选方法，对组方进行优化研究，兼顾中西医两种理论的长处设计复方。量效关系是方剂配伍研究的关键，药物功效的大小受到药物绝对量的影响，方剂整体功效的发挥受到药物间相对剂量比例的影响，所以，可根据药理实验数据和药物分析数据建立中药定量组效关系辨析方法和模型，较准确地描述中药有效组分配伍变化与药效间的关系。3.3 药物化学研究【17】化学成分研究从中药配伍后化学成分的变化来探讨方剂配伍作用的实质，从微观层次上探析中药化学成分与中药配伍的相关性，对于阐明方剂配伍的科学内涵，为临床用药与新药研制提供科学依据。中药在配伍后煎煮制备过程中的变化过程是复杂的，会产生物理、化学的变化，由于多种成分的共存，可能产生pH的变化，使某些化学成分的含量发生变化，可能产生新的化合物。将中药配伍组成的复方看作一个整体，采用现代提取分离方法，将其分离成各个部位的成分，可影响有效成分的溶出率，甚至产生新物质或者沉淀。将单味药的化学成分与中药配伍以后的变化对比发现，中药复方的配伍不是药物数及量上的简单相加，也不是机械的毒副作用的抵消，而是通过药物之间的配伍作用使之发生质的改变。4.存在的问题与展望目前，中药配伍规律的实验研究大体呈现两种趋势。一是沿用西药量化的研究方法,对每味药物进行成分变化的分析测量和药理研究,以及制剂有效成分的血清浓度和临床药理学的比较研究, 试图找出有关定量的规律性。二是应用现代数学和计算机技术研究复方。目前还主要是从数学统计方法的角度,对中药复方配伍特征和类方方证内涵予以量化探索。这将有助于客观认识复方的配伍结构、方证症群的有关规律, 是加速方剂理论化程度的一种重要手段。但这种统计学方法整体上还缺乏与中医药基础理论本质上的结合, 还流于个方或类方、个案的表层逻辑关联性研究。中药复方属于复杂系统, 而对于复杂性问题我们应遵循“把复杂性当作复杂性来处理”的方法原则, 采用整体与还原相结合的方法, 如采用模式识别、多目标优化、模糊综合评判等方法,从生物学效应上探索方剂的最优组合, 寻找复方配伍规律。随着人们对复杂性问题的认识与研究的深入,必将更深入地揭示复方的配伍规律,促进复方的临床合理应用。参考文献【1】赵琰,屈会化 ,王庆国.复方配伍实验研究的问题与展望.中国实验方剂学杂志.2003(2):51-54.【2】彭成.试论中药配伍研究的方法与实践.中药与临床.2012;3(1):1-5. 【3】宋小莉, 高艳青,等.复方配伍实验设计方法评述.中西医结合学报.2003(9).177-179.【4】王丽静.等.中药复方拆方研究的思路与方法.中成药.2008(9):1343-1346.【5】赵冬梅,肖隽,毕开顺,等.吴茱萸汤配伍机制的研究J.科技前沿与学术评论, 1999,21(5):46-50.【6】赵琰,李宇航,王庆国,等.半夏泻心汤不同性味拆方对胃溃疡大鼠血清胃泌素的影响J.上海中医药杂志,2004,38(10):45-47.【7】甘贤兵,贺娟.草果知母汤加减方及其拆方对