次实验普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察.ppt

实验报告的写作规范 一、目的要求 二、实验原理 三、仪器与材料 四、操作步骤 五、实验结果 六、思考题 注：姓名、学号、按学号顺序整理后交上来。 微生物学实验的学习材料 /kech/wswx/cn/syzd/wmv/3_3.htm /kech/wswx/cn/syzd/wmv/1_1.htm /swxsyzx/ReadNews.asp?NewsID=341 实验二 普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察 一、目的要求 1、学习并掌握油镜的原理和使用方法。 2、复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方 法。 二、实验原理 D=/2NA NA=n sin 基础知识 显微镜概述： 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为 光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显 微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。 1.光学显微镜 普通生物显微镜由3部分构成： 照明系统：包括光源和聚光器。 光学放大系统：由物镜和目镜组成， 是显微镜的主体。 机械装置：用于固定材料和观察方便， 包括镜台(载物台) 、调节器和、 物镜转换器(旋转器)等。 尼康E-600显微镜 实验二 普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察 五、实验结果 分别绘出你在低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的细 菌的三种形态，包括在三种情况下视野中的变化，同时注 明物镜放大倍数和总放大率。 实验二 普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察 六、思考题 (1) 用油镜观察时应注意哪些问题?在载玻片和镜头之 间加滴什么油?起什么作用? (2) 试列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。 为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的 误操作? (3) 什么是物镜的同焦现象?它在显微镜观察中有什么意 义? (4) 影响显微镜分辨率的因素有哪些? (5) 根据你的实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的 大小，选择不同的物镜进行有效的观察。 实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 一、目的要求 1、明确培养基的配制原理。 2、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般 方法和步骤。 实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 二、实验原理 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下: 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0 g NaCl 5.0g 水 1000ml pH 7.4 7.6 四、操作步骤 1、称 量 2、溶 化 3、调pH 4、过 滤 5、分装 6、加塞 7、包扎 8、灭菌 9、搁置斜面 10、无菌检查 实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 5、分装 (1) 液体分装 分装高度以试管高度的I4左右为宜。分装三角瓶的虽则根 据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜， (2) 固体分装 分装试管，其装量不超过管高的15，灭菌后制成斜面。分 装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 (3) 半固体分装 试管一般以试管高度的13为宜，灭菌后垂直待凝。 8、灭菌 将上述培养基以0.103MPa，l21，20mln高压蒸气灭菌。 实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 棉塞制作方法： 五、思考题 (1) 培养基配好后，为什么必须立即灭菌? 如何检查灭菌后的 培养基是无菌的? (2) 在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题? 为什么? 实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 消毒与灭菌 加热法 干热法 湿热法 火焰烧灼 热空气灭菌 压力蒸汽灭菌 间歇灭菌 煮沸灭菌 巴斯德消毒 实验原理 干热灭菌 电烤箱 压力蒸汽灭菌 过滤除菌 许多材料，如血清、糖溶液等，用一般加热消毒 灭菌方法，均会被热破坏，应采用过滤除菌。 应用最广的过滤器有蔡氏(Seitz)过滤器和膜过滤 器。 实验原理 (continued) 蔡氏过滤器分上、下两节 ，过滤时，用螺旋把石棉 板紧紧地夹在上、下两节 滤器之间，然后将溶液置 于滤器中抽滤，每次过滤 必须用一张新滤板。 实验原理 (continued) 滤膜过滤器的结构与蔡氏过滤器相似，只 是滤膜是一种多孔纤维素，孔径一般为 0.45um，过滤时，液体和小分子物质通过， 细菌被截流在滤膜上。 实验原理 紫外线灭菌 紫外线波长在200-300 nm,具有杀菌作用， 其中以265-266 nm杀菌力最强。 无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭 菌。 实验原理 (continued) 干热灭菌 1、装入待灭菌物品 2、升温 接通电源，加热升温至160-170 。 3、恒温 保持160-170 2小时。 4、降温 切断电源，自然降温。 5、开箱取物 待烤箱温度降到70以下以后 ，方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于 70，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂 。 实验内容及实验步骤 (continued) 压力蒸汽灭菌 1、检查水位，放入物品。 2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气