NPN的鉴别方法.ppt

饲料原料中非蛋白氮(NPN)的鉴别 山东六和集团技术部 郭吉原 一.目前NPN的种类 A 铵盐 (NH4HCO3 、 (NH4)2SO4、NH4Cl)、尿素 B 尿素的衍生物:缩二脲、磷酸脲、淀粉糊化尿素、 脲醛聚合物(蛋白精)、 糠醛尿素、 糖基化尿素 C 叠氮化钙CaN6 D 三聚氰胺C3N6H6 脲醛聚合物和三聚氰胺是目前最常用的NPN 脲醛聚合物(蛋白精)(CP=10元),三聚氰胺(CP=20元 ) 二.NPN的鉴别(1)-尿素 n试剂: 1.生黄豆粉。将大豆磨成粉末（注意；切勿加热升温 ) 2.酚红：g/L。 称取酚红（苯酚红）0.1g溶于 100ml乙醇中。 n步骤：取约0.5-2g样品，于50ml比色管内，再 加约0.1-0.2g生黄豆粉，35滴酚红，40ml水 ，塞好塞子，摇动30秒，静止，如溶液变成红 色，则样品中掺入尿素 二.NPN的鉴别(1)-尿素 n定量分析: n称样1-3g于碘量瓶内,加生豆粉约1克,准 确加入100ml水,在30C摇动1h,过滤,取滤 液50ml于蛋白仪内,加NaOH(30%)10ml, 用硼酸吸收, 再用盐酸滴定,同时做样品和 生豆粉空白. nCP= (V-V0-V01)xCx0.014x6.25 mx50/100 x100 二.NPN的鉴别(2)-铵盐 试剂 n氢氧化钠溶液,g氢氧化钠加ml水 。 nPH 试纸 步骤：取样品3-5g于100ml 烧杯内，表皿内侧 沾一条湿的PH试纸，向烧杯内加约5-10ml 氢氧 化钠，将表皿迅速盖上，如试纸迅速变蓝，打开 表皿有很浓的氨味则含铵盐。 二. NPN的鉴别(3)-脲醛聚合物 ( 蛋白精 试剂 ：变色酸 2g/L硫酸溶液 称取0.2g变色酸于干燥的烧杯内，加入100 ml浓硫酸，电炉上加热到约70-80，待溶解后 ，降温，移入120 ml棕色的滴瓶内。 步骤：将可疑物从显微镜下夹出数粒于干燥 的小烧杯内，滴加约1 ml变色酸，电炉上加热 到刚刚产生微烟，取下，加入约30 ml水，若溶 液变成稳定的紫色，则样品中有蛋白精。 二. NPN的鉴别(3)-脲醛聚合物 ( 蛋白精 1. 鱼粉肉骨粉除去伪装方法： 任何掺假的鱼粉均要做一番伪装，如直 接将经伪装过鱼粉放在显微镜下看很难发 现真实情况，因此镜检前应首先要除去伪 装，最有效的方法就是脱脂，具体做法如 下： 鱼粉肉骨粉除去伪装方法(1) n(1) 将少许鱼粉（3-5 g ）用定性滤纸包好， 放入索氏脂肪抽提器内，以石油醚作提取剂 ，脱脂约30分钟，至石油醚中看不到黄色为 止，将纸包取出，水浴上烘干（70-80）。 n(2) 将少许鱼粉（3-5 g ）放入烧杯内，加入 50ml石油醚，搅拌2分钟，过滤，将滤渣放回 烧杯，加50ml石油醚，搅拌2分钟，过滤。将 滤渣烘干（70-80）。 鱼粉肉骨粉除去伪装方法(2) n(3) 将少许鱼粉（3-5 g ）放入烧杯内，加丙 酮50ml搅拌2分钟，静止5分钟，将上清液弃 去，再加50ml石油醚搅拌2分钟，静止5分钟 ，弃去上清液，将下部分的鱼粉烘干（70- 80）。 n(4) 将少许鱼粉（约3g ）放入烧杯内,加 3gKOH(NaOH),再150ml水搅拌后在放电炉煮沸 2分钟,静止5分钟,倒掉上清液,用水洗残渣3- 4次,再用丙酮50ml洗残渣2-3次,残渣用于蛋 白精和含大量粗纤维类物质(如锯末、稻草、 麦芽根)的检测 鱼粉肉骨粉除去伪装方法(3) n(5) 将少许鱼粉（约3-5g ）放入分液漏 斗中,加四氯化碳50-80ml,轻轻摇动后静 止5分钟,把分液漏斗活拴打开将沉淀物放 到一小烧杯内,之后将小烧杯内沉淀物过 滤出来,此残渣用于蛋白精的检测. n 请注意：乙醚、丙酮、石油醚均为易燃 品，请在通风的条件下操作，严禁烟火。 三.其它定性检查的方法 A . 掺入植物类物质（如小麦麸、稻谷壳、粉丝蛋白粉） 试剂： 碘-碘化钾溶液 称1g的碘及5g碘化钾于烧杯内，加100ml水搅 拌2分钟，待溶解后将其移入120ml棕色的滴瓶内。 步骤：取约5g样品放在烧杯内，加约70ml水，在 电炉上煮沸，取下静止2分钟，滴加碘碘化钾试 剂-2ml，如溶液变成蓝色则掺入植物性的物质 三.其它定性检查的方法 B.掺入植物性物质（含大量粗纤维类物质：如锯末、稻草、麦芽 根） 试剂：1.间苯三酚20g/L 称间苯三酚2g加100ml 95% 乙醇，溶解后放入棕色滴瓶 2.浓盐酸 36% 分析 纯 n步骤：称1-2g鱼粉于培养皿内，滴加间苯三酚使 样品湿润，放置5-10分钟后，滴加浓盐酸约0.5ml ，放置2-3分钟，如样品显现深红色，则样品中含 木质素，在显微镜下进一步确认为何物。 三.其它定性检查的方法 C.掺入皮革粉 试剂: 1 .稀硫酸2mol/L 将取10ml浓硫酸慢慢加入 到90ml水中。 2 .二苯基卡巴腙2g/L 称0.2g二苯基卡巴腙，加入100ml95%乙醇，溶 解后，移入棕色滴瓶内。 n步骤：取1-3 g鱼粉于坩埚内，在电炉上炭化， 再放在马弗炉内于550-600下灰化2小时，取出 ，降温后，加入稀硫酸10ml搅拌，加二苯基卡巴 腙5-10滴，如溶液显紫红色则样品中含皮革粉。 四.目前真蛋白测定中的问题 1.真蛋白的测定方法 水洗法 三氯乙酸法 碱性硫酸铜法 重金属盐沉淀法 四.目前真蛋白测定中的问题 2. 这类方法的特点 能查出水溶性的NPN 如:铵盐、尿素、磷酸脲 对水不溶性的NPN查不出。 如:脲醛聚合物(蛋白精)、糠醛尿素、淀粉糊化尿 素、缩二脲、糖基尿素、三聚氰胺 花生粕等本身就有3-7个CP是水溶的检测数 据汇总花生粕水溶性蛋白试验.xls 四.目前真蛋白测定中的问题 不论掺什么NPN都盲目的测真 蛋白将会错检、误检、漏检 四.目前真蛋白测定中的问题 3.赖氨酸复合饲料的真蛋白? 玉米用亚硫酸 浸12-48h 粗粉碎 胚芽 玉米皮分离 离心分离 膜过滤 淀粉 玉米胚芽 玉米皮 玉米蛋白粉葡萄糖 淀粉酶 赖氨酸 Lys渣 Lys高蛋白 Lys98%,65% Lys复合饲料 Lys蛋白 玉米皮稻谷壳含NH3废水 Lys菌种及杂菌 赖氨酸菌种 NH3 1#2#3#4#1#2#3#4#5# Lys 4.954.665.823.70 NH3 3.013.003.183.30 Met 0.360.320.320.27 CPNH3 15.515.416.417.0 Thr 0.470.480.410.45 CP 39.837.436.436.1 Cys 0.350.270.280.31 CF 8.4810.45 10.44 9.07 Glu 1.701.881.441.80 EE 2.43 Ile 0.490.440.330.40总能 Cal/g 382639423916 Leu 1.201.120.841.15AFB1 ppb 18.26 Ala 0.991.000.790.94DON ppm 4.10.93.0 His 0.180.350.280.36 F-2ppm 16271552 AA 16.415.414.614.5 赖氨酸复合饲料的质量情况汇总 赖氨酸复合饲料的质量特点 游离氨NH3高 3% CPNH3=15-17% ,AA=14-16%,CP=36-39% CPNH3 CP 组成:玉米皮+赖氨酸生产过程的含氨废水 霉菌毒素的残留高 F-2=1500-5000ppb DON=1-3ppm AFB1=15- 50ppb 40% 四.目前真蛋白测定中的问题 赖氨酸蛋白(外观: 褐色或黑色小球) 2种赖氨酸菌体 蛋白的对比 3.如何测真蛋白? 判断是否掺假(NPN)-镜检、定性分 析。 根据NPN的种类决定采用什么方法 AA总和最有效的方法 三氯乙酸法、碱性硫酸铜法、重金属盐沉 淀法、水洗法 四.目前真蛋白测定中的问题 3.如何测真蛋白? 掺微量的NPN(调蛋白15个百分点),氨 基酸分析也难查出,只有用其它方法检 测 如:镜检、过筛测定CP 、定性分析 测真蛋白要根据具体情况定方法,决不 能教条主义 四.目前真蛋白测定中的问题 n3.如何测真蛋白 nAA法-最有效 四.目前真蛋白的测定中的问题 五.鱼粉 (1) 鱼粉和鱼排粉有下面2个问题 真假的问题 好坏的问题 (2) 解决问题的方法 真假 镜检 、AA 、N I R、 定性和常规检测分析 上述这些方法已能解决真假的问题 五.鱼粉 好坏-是现在碰到最多的问题 鱼粉的好坏与鱼粉的种类有关 白鱼粉蒸汽鱼粉直火鱼粉蒸干鱼粉 (下杂鱼粉,鱼干粉) 直火鱼粉常含少部分(10-20%)过热成分 质量差的直火鱼粉有时含40-50%的烧焦 鱼粉,也可能是掺入的自燃鱼粉. 直火干燥鱼粉。样品 经脱脂处理。可见很 多颗粒被火燎焦糊了 直火干燥鱼粉。样品经 脱脂处理。可见被火燎 焦糊的颗粒 五.鱼粉 鱼粉的好坏与鱼粉的新鲜度有关 新鲜度指标: 感观、气味、 V