【医学课件大全】偶氮胂ⅲ法测血钙

实验十七 偶氮胂法测 血钙 血浆中约含钙2.1mmol/(8.410.2mg/dl)，以三种形式存在：非 扩散钙(non-difusional calcium)：是指与血浆蛋白相结合的钙，占血浆 总钙的45%；离子钙(ion calcium)：是具有生理活性的部分，约占 血浆总钙的50%；络合钙(chelating calcium)：主要指与枸橼酸结合 的钙，是体内钙的一种运输方式，约占血浆总钙的5%左右。钙离子和 络合钙都能透过毛细血管壁，故统称为扩散钙。血钙的测定方法很多 ，一般可分为总钙测定和离子钙测定法。前者包括同位素稀释质谱法 (isotope diluting mass spectrometry)、原子吸收光谱法(atomic absorption spectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography) 和络合滴定法(chelating titration)等。AAS是最常用的准确测定血浆总 钙含量的参考方法，但费用昂贵，不适于常规工作；分光光度法中以 甲基百里香酚蓝比色法（methyl thymol blue colorimetry）和偶氮胂 比色法（Arsenazo colorimetry）最常用。络合滴定法简便易行， 但判断终点受主观因素影响，有被淘汰趋势，但不少基层实验室仍延 用。离子选择电极法测定离子钙已在临床广泛应用。分光光度法已被 广泛用自动生化分析议分析。 【实验原理】 在碱性条件下，样品中钙与偶氮胂作 用生成蓝色复合物，其颜色深浅与钙浓度 成正比，通过在660nm波长处测定吸光度 的变化值，与经过同样处理的钙校准液进 行比较，即可计算出样品中钙含量。 【操作步骤】 测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） 试剂（ml） 2.0 2.0 2.0 37恒温5分钟 蒸馏水（ml） - - 0.02 标准液（ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混匀，37恒温2分钟，660nm波长，以空白管调零，测定 各管吸光度。 【计算】 样品钙含量（mmol/L）= 2.50 【参考范围】血清钙：2.12.6mmol/L 【临床意义】 （1）低钙血症见于 摄入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹泻、阻 塞性黄疸；需要增加：妊娠后期及哺乳期妇女；吸收减少：佝偻 病、甲状旁腺功能减退症；肾脏疾病：急、慢性肾衰竭、肾病综合 征、肾小管性酸中毒；坏死性胰腺炎。 （2）高钙血症见于 摄入钙过多：静脉用钙过量、大量饮用牛奶 等；原发性甲状旁腺功能亢进症、肾癌等使血钙升高；服用维生 素D过多，钙吸收作用增强；骨病：变形性骨炎、转移性骨癌、多 发性骨髓瘤等，骨溶解增加；具有异位内分泌作用的肿瘤；长期 制动引起骨骼脱钙。 【评价】 1. 线性范围：0.006.00mmol/L，0.99。 2. 精密度：批内、批间平均CV分别5.0% 3. 准确度：不准确度10% 4. 试剂空白吸光度值0.35。 【注意事项】 1. 样品中钙含量超过5.00mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘 以稀释倍数。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定2小时。 5. 所用试验器材必须清洁，没有钙污染。 6. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 7. 试剂使用后立即关紧瓶盖，避免污染。 8. 使用肝素作为抗凝剂时浓度不能太高，每毫升血液中肝素浓度应小 于50单位。不能使用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA等作抗凝剂。 实验十七 钙镁试剂比色法测血镁 【目的要求】 1.掌握比色法测血镁 2.熟悉血镁测定的其他方法 【实验原理】 血清中的镁在碱性条件下，与金属色原染料钙镁试剂（ calmagite)反应生成紫红色络合物。颜色深浅与美的浓度 成正比，与同样处理的标准品比较，可以求得镁的含量。 【操作步骤】 测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） 试剂（ml） 2.0 2.0 2.0 37恒温5分钟 蒸馏水（ml） - - 0.02 标准液（ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混匀，37恒温2分钟，540nm波长，以空白管调零，测定 各管吸光度。 【计算】 样品镁含量（mmol/L）= 1.0 【参考范围】血清镁：0.671.04mmol/L 【评价】 1. 线性范围：2.0mmol/L10%。 2. 精密度：批内、批间平均CV分别5.0% 3. 准确度：不准确度10% 4. 试剂空白吸光度值1.10。 【注意事项】 1. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应 保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本 空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定1小时。 5. 所用试验器材必须清洁，没有镁污染。 6. 所用试剂具有毒性和腐蚀性，请勿用口吸吸管 ，如有污染，应立刻用大量流水冲洗。 实验十八 还原钼蓝法测血清磷 血液中的磷( phosphorus )主要有两种形式：有 机磷和无机磷。血清无机磷含量与血钙有一定关 系，两者浓度的乘积为一常数（以mg/dl浓度计算 ，乘积等于40）。磷参与机体糖、脂类及氨基酸 的代谢，是骨盐的主要成分，也是转运能量的物 质，磷酸盐是调节酸碱平衡的重要缓冲体系之一 。 【目的要求】 1.掌握此法测血磷的原理。 2.熟悉血磷测定的其他方法 【实验原理】 利用磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷 钼酸复合物，用对甲氨基酚硫酸盐还原生 成钼蓝，与同样处理的标准液进行比色， 可求得血磷的含量。试剂中加入聚山梨酯- 80以抑制蛋白质干扰。 【操作步骤】 测定管（U）标准管（S）空白管（B） 去离子水（ml） - - 0.1 磷标准液（ml） - 0.1 - 血清 0.1 - - 显色液（ml） 4.0 4.0 4.0 混匀，37恒温10分钟，650nm波长，以空白管调零， 测定各管吸光度。 【计算】 样品磷含量（mmol/L）= 1.29 【参考值】成人0.97 1.62 mmol/L；儿童1.45 2.10 mmol/L 【临床意义】 1. 低磷血症见于 摄入不足和吸收减少：饥饿或恶病质、吸收不 良综合征、呕吐、腹泻、长期应用含铝的制剂等；磷转移入细胞内 ：静脉注射葡萄糖、胰岛素及碱中毒、妊娠等；丢失过多：血液透 析、肾小管酸中毒、急性痛风等；其他：如酒精中毒、糖尿病酮症 酸中毒、维生素D缺乏症等。 2. 高磷血症见于 甲状旁腺功能减退症、维生素D过多症、 Addison病、肢端肥大症、多发性骨髓瘤等。 体重约见5%的无机盐主要有Ca、