免疫排斥与器官移植课件

第五章第五章 免疫排斥与免疫排斥与 器官移植器官移植 n n 移植：移植：应应应应用自体或异体的正常用自体或异体的正常细细细细胞、胞、组织组织组织组织 、 器官置器官置换换换换病病变变变变的或功能缺的或功能缺损损损损的的细细细细胞、胞、组织组织组织组织 、 器官，以器官，以维维维维持和重建机体生理功能的治持和重建机体生理功能的治疗疗疗疗方法方法 。 n n 移植物：移植物：被移植的组织细胞或器官。被移植的组织细胞或器官。 n n 供者：供者：提供移植物的个体。提供移植物的个体。 n n 受者：受者：接受移植物的个体。接受移植物的个体。 移植的类型移植的类型 n n 自体移植：自体移植：指移植物取自受者自身。指移植物取自受者自身。 n n 同系移植：同系移植：指遗传基因完全相同或基本相似个体指遗传基因完全相同或基本相似个体 之间的移植。之间的移植。 n n 同种移植：同种移植：同种内遗传基因不同的个体之间的移同种内遗传基因不同的个体之间的移 植。植。 n n 异种移植：异种移植：不同种属个体间的移植。不同种属个体间的移植。 移植抗原移植抗原 n n 概念概念：引起移植排斥反引起移植排斥反应应应应的抗原的抗原 n n 类型：类型： 1.1.主要组织相容性抗原主要组织相容性抗原 2.2.次要主要相容性抗原次要主要相容性抗原 3.3.血型抗原血型抗原 4.4.组织特异性抗原组织特异性抗原 同种异型抗原的提呈与识别同种异型抗原的提呈与识别 n n 直接识别：直接识别：受者受者T T细细细细胞直接胞直接识别识别识别识别 供者供者APCAPC表面表面 MHCMHC分子或抗原分子或抗原肽肽肽肽-MHC-MHC分子复合物。分子复合物。 n n 间接识别：间接识别：受者受者T T细细细细胞胞识别经过识别经过识别经过识别经过 受者受者APCAPC加工加工处处处处 理的来源于供者理的来源于供者MHCMHC分子的分子的肽肽肽肽。 直接识别 间接识别 直接识别和间接识别比较直接识别和间接识别比较 直接识别直接识别间接识别间接识别 被识别的分子形被识别的分子形 式式 未经加工处理的同种异型未经加工处理的同种异型 MHCMHC分子分子 经经经经加工加工处处处处理的同种异型理的同种异型MHCMHC 抗原抗原 APCAPC供者供者APCAPC受者 受者APCAPC 被活化的被活化的T T细胞细胞CD4CD4+ + Th Th细胞和或细胞和或CD8CD8+ + CTL CTLCD4CD4+ + Th Th细胞和或细胞和或CD8CD8+ + CTL CTL 排斥反应强度排斥反应强度非常强烈非常强烈较弱较弱 参与排斥反应的参与排斥反应的 类型类型 急性排斥反应（早期）急性排斥反应（早期）急性排斥反应（中、晚期）急性排斥反应（中、晚期） 、慢性排斥反应、慢性排斥反应 对环孢素对环孢素敏感敏感不敏感不敏感 移植排斥反应的效应机制移植排斥反应的效应机制 n n 细胞免疫应答效应机制细胞免疫应答效应机制 n n 体液免疫应答效应机制体液免疫应答效应机制 n n NKNK细胞效应机制细胞效应机制 n n 细胞因子的效应机制细胞因子的效应机制 细胞免疫应答效应机制细胞免疫应答效应机制 受者受者CD4CD4+ + Th1 Th1细胞通过直接识别或间接识别途细胞通过直接识别或间接识别途 径识别移植抗原并被激活，活化的径识别移植抗原并被激活，活化的T T细胞释放细胞释放 多种炎性细胞因子如多种炎性细胞因子如IFN-IFN-、IL-2IL-2等，引起迟等，引起迟 发型超敏反应性炎症，还可活化发型超敏反应性炎症，还可活化CD8CD8+ + CTL CTL，产，产 生细胞毒效应。生细胞毒效应。 体液免疫应答效应机制体液免疫应答效应机制 抗同种异型抗原的抗体与相应抗原形成复合物抗同种异型抗原的抗体与相应抗原形成复合物 ，激活补体，损伤移植物。抗体也可通过调理，激活补体，损伤移植物。抗体也可通过调理 作用和作用和ADCCADCC作用对移植物造成损伤。作用对移植物造成损伤。 NKNK细胞效应机制细胞效应机制 在同种异体移植后，受者在同种异体移植后，受者NKNK细胞的细胞的KIRKIR不能识别不能识别 移植物细胞表面的同种异型移植物细胞表面的同种异型MHCMHC分子，抑制信号分子，抑制信号 传入受阻，传入受阻，NKNK细胞被激活，参与移植排斥反应。细胞被激活，参与移植排斥反应。 活化活化T T细胞分泌的多种细胞因子也可活化细胞分泌的多种细胞因子也可活化NKNK细胞细胞 ，增强其杀伤活性，参与对移植物的排斥。，增强其杀伤活性，参与对移植物的排斥。 细胞因子的效应机制细胞因子的效应机制 n n IL-2IL-2活化同种异型反应性活化同种异型反应性T T细胞；细胞； n n IFN-IFN-诱导诱导MHCMHC分子表达，增强分子表达，增强APCAPC活性，激活性，激 活活NKNK细胞和巨噬细胞，参与并增强排斥反应细胞和巨噬细胞，参与并增强排斥反应 ； n n TNF-TNF-是导致移植物损害的重要介质；是导致移植物损害的重要介质； n n 某些趋化性因子介导特定效应性某些趋化性因子介导特定效应性T T细胞聚集于细胞聚集于 移植物，并参与排斥反应发生。移植物，并参与排斥反应发生。 同种异型移植排斥的类型同种异型移植排斥的类型 n n 宿主抗移植物反应宿主抗移植物反应 n n 移植物抗宿主反应移植物抗宿主反应: : 1. 1.超急性排斥反应超急性排斥反应 2.2.急性排斥反应急性排斥反应 3.3.慢性排斥反应慢性排斥反应 超急性排斥反应超急性排斥反应 概念：概念：移植器官与受者血管接通后数分钟至数移植器官与受者血管接通后数分钟至数 小时内发生的排斥反应。小时内发生的排斥反应。 机制：机制：体液免疫介导，由于受者体内预存有针体液免疫介导，由于受者体内预存有针 对供者同种异型抗原的抗体所致。对供者同种异型抗原的抗体所致。 急性排斥反应急性排斥反应 概念：概念：发生在移植后数天至发生在移植后数天至2 2周左右的排斥反应。周左右的排斥反应。 机制：机制： 1.CD41.CD4+ + Th1 Th1细胞介导的迟发型超敏反应和细胞介导的迟发型超敏反应和CD8CD8+ + CTL CTL直接杀伤直接杀伤 表达同种异型抗原的移植物细胞，引起间质细胞损害。表达同种异型抗原的移植物细胞，引起间质细胞损害。 2.2.机体产生的抗血管内皮细胞表面同种异型抗原的抗体与机体产生的抗血管内皮细胞表面同种异型抗原的抗体与 相应抗原形成免疫复合物，激活补体而损害移植物血管相应抗原形成免疫复合物，激活补体而损害移植物血管 。 3.3.激活的巨噬细胞和激活的巨噬细胞和NKNK细胞参与移植物组织损伤。细胞参与移植物组织损伤。 慢性排斥反应慢性排斥反应 概念：概念：发生于移植后数周、数月、发生于移植后数周、数月、 甚至数年的排斥反应。甚至数年的排斥反应。 机制：机制： 1.1.免疫学因素免疫学因素 2.2.非免疫学因素非免疫学因素 免疫学机制免疫学机制 1.1.特异性抗体或效应细胞对微血管内皮细胞的特异性抗体或效应细胞对微血管内皮细胞的 细胞毒作用，导致血管损伤；细胞毒作用，导致血管损伤； 2.2.迟发型超敏反应诱使巨噬细胞分泌平滑肌细迟发型超敏反应诱使巨噬细胞分泌平滑肌细 胞生长因子，导致动脉血管内平滑肌细胞，血胞生长因子，导致动脉血管内平滑肌细胞，血 管壁增厚，间质纤维化。管壁增厚，间质纤维化。 非免疫学机制非免疫学机制 1.1.移植术后早期出现缺血移植术后早期出现缺血- -再灌注损伤；再灌注损伤； 2.2.移植器官去神经支配和血管损伤等；移植器官去神经支配和血管损伤等； 3.3.免疫抑制剂的毒副作用；免疫抑制剂的毒副作用； 4.4.受者并发高血压、高脂血症、糖尿病和慢性受者并发高血压、高脂血症、糖尿病和慢性 巨细胞病毒感染等也可导致慢性排斥反应。巨细胞病毒感染等也可导致慢性排斥反应。 移植物抗宿主反应移植物抗宿主反应 概念：概念：移植物中的淋巴移植物中的淋巴细细细细胞胞识别识别识别识别 宿主宿主组织组织组织组织 同同 种异型抗原而种异型抗原而发发发发生的一种排斥反生的一种排斥反应应应应。 前提条件前提条件: : 1. 1.受者与供者受者与供者HLAHLA型型别别别别不相配合；不相配合； 2.2.移植物中含有足移植物中含有足够够够够数量的免疫数量的免疫细细细细胞，尤其是胞，尤其是 成熟的成熟的T T细细细细胞；胞； 3.3.受者受者处处处处于免疫无能或免疫功能极度低下的状于免疫无能或免疫功能极度低下的状 态态态态 GVHRGVHR机制机制 T T细细细细胞是介胞是介导导导导GVHRGVHR的主要效的主要效应细应细应细应细 胞。骨髓移胞。骨髓移 植物中成熟植物中成熟CD4CD4 + + T T细细细细胞胞识别识别识别识别 宿主的同种异型抗宿主的同种异型抗 原，并增殖分化原，并增殖分化为为为为效效应应应应T T细细细细胞。胞。这这这这些激活的效些激活的效 应细应细应细应细 胞随血流游走至受者全身，胞随血流游走至受者全身，对对对对宿主宿主组织组织组织组织 或器官或器官发动发动发动发动 免疫攻免疫攻击击击击。 供受者的配合选择供受者的配合选择 n n 一般情况一般情况 n n ABOABO血型相容血型相容 n n HLAHLA相容性相容性 HLAHLA分型试验分型试验 n n 血清学分型法血清学分型法 n n 细胞学分型法细胞学分型法 n n 基因分型法基因分型法 血清学分型法血清学分型法 n n 原理：原理：CDCCDC n n 应用：应用：SDSD抗原（抗原（HLA-AHLA-A、B B、C C、 DRDR、DQDQ）。）。 技术要点技术要点 （1 1）分离待检的淋巴细胞，经洗涤、计数后，配成一定）分离待检的淋巴细胞，经洗涤、计数后，配成一定 浓度。检测浓度。检测HLA-HLA-类抗原时，需分离类抗原时，需分离B B淋巴细胞。淋巴细胞。 （2 2）取分型板，加入标准抗血清和待检淋巴细胞，充分）取分型板，加入标准抗血清和待检淋巴细胞，充分 混匀，温育。混匀，温育。 （3 3）加入补体，温育。）加入补体，温育。 （4 4）加台盼蓝染色死细胞。）加台盼蓝染色死细胞。 （5 5）用倒置显微镜观察计数死细胞的百分数。）用倒置显微镜观察计数死细胞的百分数。 CDCCDC试验结果判定标准试验结果判定标准 死细胞百分数（死细胞百分数（% % ） 结果结果计分计分 0 01010阴性阴性 1 1 11112020微弱阳性微弱阳性 2 2 21214040弱阳性弱阳性 4 4 41418080阳性阳性 6 6 8181100100强阳性强阳性 8 8 细胞学分型法细胞学分型法 n n 原理：淋巴细胞增殖试验原理：淋巴细胞增殖试验 n n 应用：应用：LDLD抗原（抗原（HLA-DHLA-D、DPDP） n n 类型：类型： 1. 1.双向混合淋巴细胞培养法双向混合淋巴细胞培养法 2. 2.单向混合淋巴细胞培养法单向混合淋巴细胞培养法 双向双向MLCMLC方法原理方法原理 双向双向MLCMLC中的两种淋巴细胞既是刺激细胞又是反应细中的两种淋巴细胞既是刺激细胞又是反应细 胞胞, ,彼此能发生相互作用。若彼此淋巴细胞均无形态学彼此能发生相互作用。若彼此淋巴细胞均无形态学 改变或细胞分裂增殖，说明两个个体间改变或细胞分裂增殖，说明两个个体间HLAHLA型别相同型别相同 。若彼此淋巴细胞均发生形态学改变或细胞分裂增殖。若彼此淋巴细胞均发生形态学改变或细胞分裂增殖 ，说明两个个体间，说明两个个体间HLAHLA型别不同。型别不同。 双向双向MLCMLC方法方法技术要点技术要点 n n 1. 1.分离待检淋巴细胞，洗涤、计数，配成一定浓度。分离待检淋巴细胞，洗涤、计数，配成一定浓度。 n n 2. 2.反应管加双方淋巴细胞，对照管分别加单方淋巴细胞。反应管加双方淋巴细胞，对照管分别加单方淋巴细胞。 n n 3. 3.将细胞置将细胞置COCO 2 2 培养箱培养箱3737培养培养5 56 6天。天。 n n 4. 4.取沉淀物涂片、染色，高倍镜下计算转化率，或在培养取沉淀物涂片、染色，高倍镜下计算转化率，或在培养 终止前终止前161620h20h加加 3 3 H-TdRH-TdR，培养后将细胞收集于滤膜，液，培养后将细胞收集于滤膜，液 闪仪测定闪仪测定cpmcpm，计算，计算SISI。 单向单向MLCMLC方法原理方法原理 单向单向MLCMLC方法中的两种淋巴细胞有刺激细胞和反应方法中的两种淋巴细胞有刺激细胞和反应 细胞之分。首先将其中一种淋巴细胞用丝裂霉素处细胞之分。首先将其中一种淋巴细胞用丝裂霉素处 理或理或X X线照射，使其丧失免疫反应能力，但线照射，使其丧失免疫反应能力，但HLAHLA抗原抗原 不发生改变，因此被处理的细胞只作为刺激细胞，不发生改变，因此被处理的细胞只作为刺激细胞， 刺激细胞只能单向作用于反应细胞，它刺激另一种刺激细胞只能单向作用于反应细胞，它刺激另一种 未处理的淋巴细胞，使其发生淋巴细胞转化和增殖未处理的淋巴细胞，使其发生淋巴细胞转化和增殖 。 单向单向MLCMLC方法类型方法类型 n n 纯合子分型细胞试验：阴性分型法纯合子分型细胞试验：阴性分型法 n n 预致敏淋巴细胞分型试验：阳性分型法预致敏淋巴细胞分型试验：阳性分型法 HTCHTC试验原理试验原理 n n HTCHTC是只表达一种是只表达一种LDLD抗原的细胞，即同源染色体上编抗原的细胞，即同源染色体上编 码码LDLD抗原的抗原的MHCMHC单倍型基因相同。这种细胞经丝裂单倍型基因相同。这种细胞经丝裂 霉素霉素C C处理或处理或X X线照射后，作为刺激细胞。线照射后，作为刺激细胞。 n n 试验时将已知型别的试验时将已知型别的HTCHTC与待检的淋巴细胞混合，进与待检的淋巴细胞混合，进 行单向行单向MLCMLC。若待检细胞不发生增殖反应（。若待检细胞不发生增殖反应（SI2SI2），）， 说明待检细胞与说明待检细胞与HTCHTC的的HLAHLA型别相同。因根据阴性反型别相同。因根据阴性反 应作为判定标准，故应作为判定标准，故HTCHTC试验又称为阴性分型法；试验又称为阴性分型法； PLTPLT试验原理试验原理 预致敏淋巴细胞是一种仅对一种单倍型具有识别增殖预致敏淋巴细胞是一种仅对一种单倍型具有识别增殖 能力，而处于静止状态的淋巴细胞。这种细胞遇到相能力，而处于静止状态的淋巴细胞。这种细胞遇到相 应抗原刺激后，可迅速发生淋巴细胞转化和增殖。应抗原刺激后，可迅速发生淋巴细胞转化和增殖。PLTPLT 试验是将此种细胞作为已知的分型细胞。正式试验时试验是将此种细胞作为已知的分型细胞。正式试验时 ，将待检淋巴细胞处理作为刺激细胞，分别与一系列，将待检淋巴细胞处理作为刺激细胞，分别与一系列 的预致敏淋巴细胞（反应细胞）进行单向的预致敏淋巴细胞（反应细胞）进行单向MLCMLC。如果待。如果待 检细胞与预致敏淋巴细胞预先识别的抗原相同，预致检细胞与预致敏淋巴细胞预先识别的抗原相同，预致 敏淋巴细胞会迅速增殖。因预致敏淋巴细胞分型试验敏淋巴细胞会迅速增殖。因预致敏淋巴细胞分型试验 是用阳性反应作为判定标准，故是用阳性反应作为判定标准，故PLTPLT试验又称为阳性分试验又称为阳性分 型法。型法。 单向单向MLCMLC方法的技术要点方法的技术要点 n n 单向单向MLCMLC方法的技术要点与双向方法的技术要点与双向MLCMLC方法类似，不同方法类似，不同 点有：点有：需提前筛选纯合子分型细胞或制备预致敏淋需提前筛选纯合子分型细胞或制备预致敏淋 巴细胞；巴细胞； n n HTCHTC试验中待检细胞不需处理，作为反应细胞，而试验中待检细胞不需处理，作为反应细胞，而 PLTPLT试验中待检细胞需进行处理，作为刺激细胞；试验中待检细胞需进行处理，作为刺激细胞； n n 形态学方法以转化细胞百分率判断淋巴细胞反应程形态学方法以转化细胞百分率判断淋巴细胞反应程 度，一般认为转化率小于度，一般认为转化率小于5%5%为阴性；为阴性； n n 3H-TdR3H-TdR掺入试验以刺激指数（掺入试验以刺激指数（SISI）判断淋巴细胞反）判断淋巴细胞反 应程度。应程度。 基因分型法基因分型法 n n RFLPRFLP分析法分析法 n n PCR-SSCPPCR-SSCP探针分型法探针分型法 n n PCR-SSPPCR-SSP分型法分型法 n n PCR-SSCPPCR-SSCP n n PCRPCR指指纹图谱纹图谱纹图谱纹图谱 技技术术术术 限制性片段长度多态性分析法（限制性片段长度多态性分析法（RFLPRFLP） RFLPRFLP是最早建立的研究是最早建立的研究HLAHLA多态性的基因分析技多态性的基因分析技 术。根据不同个体间的术。根据不同个体间的HLAHLA相应碱基序列在不同部位相应碱基序列在不同部位 存在多个不同酶切位点，通过一组限制性内切酶消化存在多个不同酶切位点，通过一组限制性内切酶消化 、识别、切割这些位点，产生数量和长度不一的、识别、切割这些位点，产生数量和长度不一的DNADNA 酶解片段，经电泳分离，与相应的酶解片段，经电泳分离，与相应的cDNAcDNA探针进行杂交探针进行杂交 ，即可分析限制性片段长度多态性，借以确定，即可分析限制性片段长度多态性，借以确定HLAHLA的的 型别，这种型别，这种HLAHLA分型法称为分型法称为DNA-RFLPDNA-RFLP。若对。若对DNADNA片片 段进行体外扩增，然后再进行段进行体外扩增，然后再进行RFLPRFLP分析，则可大大提分析，则可大大提 高高RFLPRFLP的敏感度和特异性，这种引入的敏感度和特异性，这种引入DNADNA体外扩增体外扩增 技术的限制性片段长度多态性分析则称为技术的限制性片段长度多态性分析则称为PCR-RFLPPCR-RFLP 分型法。分型法。 PCR-SSOPPCR-SSOP PCR-SSOPPCR-SSOP分型法是将待检细胞分型法是将待检细胞HLAHLA基因片段经基因片段经PCRPCR 扩增后转移至扩增后转移至NCNC膜或尼龙膜上，然后与放射性核素（膜或尼龙膜上，然后与放射性核素（ 32P32P）、生物素或地高辛等标记的）、生物素或地高辛等标记的SSCPSSCP探针进行杂交探针进行杂交 ，若待检，若待检DNADNA与已知核苷酸序列的探针互补，则两者与已知核苷酸序列的探针互补，则两者 结合，即可分析出待检结合，即可分析出待检DNADNA序列，据此确定序列，据此确定HLAHLA的基的基 因型别。因型别。 PCR-SSPPCR-SSP分型法分型法 PCR-SSPPCR-SSP是根据是根据HLAHLA碱基序列的多态性和已知的碱基序列的多态性和已知的DNADNA 序列设计出一套针对每一等位基因的特异性引物，序列设计出一套针对每一等位基因的特异性引物，SSP SSP 只能和相应等位基因特异片段的碱基组列互补性结合只能和相应等位基因特异片段的碱基组列互补性结合 。通过。通过PCRPCR技术将待检技术将待检DNADNA扩增，产生相对应的特异扩增，产生相对应的特异 性扩增产物，通过电泳分析确定性扩增产物，通过电泳分析确定HLAHLA型别。型别。 PCR-SSCPPCR-SSCP 单链单链DNADNA具有在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电具有在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电 泳时，可形成一定的空间结构和构像的特点。即使长泳时，可形成一定的空间结构和构像的特点。即使长 度相同的单链度相同的单链DNADNA其碱基顺序不同，甚至单个碱基不其碱基顺序不同，甚至单个碱基不 同，所形成的构像不同，电泳时泳动速度和迁移率也同，所形成的构像不同，电泳时泳动速度和迁移率也 不同。不同。PCR-SSCPPCR-SSCP是指目的是指目的DNADNA经经PCRPCR扩增、变性后扩增、变性后 进行进行SSCPSSCP分析，靶分析，靶DNADNA中碱基序列的改变会出现泳动中碱基序列的改变会出现泳动 移位。因此，若供、受者的移位。因此，若供、受者的SSCPSSCP带型一致，则其带型一致，则其HLAHLA 基因相匹配；若电泳带型不一致，则不匹配。基因相匹配；若电泳带型不一致，则不匹配。 PCRPCR指纹图谱技术指纹图谱技术 PCRPCR反应过程中，在特异性反应过程中，在特异性DNADNA最后一个循环的退火最后一个循环的退火 期，单链期，单链DNADNA互相结合形成同一个体完全互补的同质互相结合形成同一个体完全互补的同质 双链，但某些单链双链，但某些单链DNADNA还可能与不同个体的单链还可能与不同个体的单链DNADNA 形成不完全互补的异质双链。由于不同个体的形成不完全互补的异质双链。由于不同个体的DNADNA具具 有不同分子构象，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈有不同分子构象，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈 现特异的区带图谱，称为现特异的区带图谱，称为PCRPCR指纹图谱。指纹图谱。HLAHLA基因分基因分 型时，将供、受体的型时，将供、受体的DNADNA扩增产物混合，电泳后得出扩增产物混合，电泳后得出 一指纹图，再与二者各自的一指纹图，再与二者各自的PCRPCR指纹图谱进行比较，指纹图谱进行比较， 根据指纹图的一致性作为选择供者的依据。根据指纹图的一致性作为选择供者的依据。 微量细胞毒试验微量细胞毒试验 用供者的淋巴细胞做靶细胞，与受者的血清进行用供者的淋巴细胞做靶细胞，与受者的血清进行CDCCDC ，可检出受者血清中是否含有针对供者淋巴细胞的抗，可检出受者血清中是否含有针对供者淋巴细胞的抗 体，以防止超急性排斥反应的发生。体，以防止超急性排斥反应的发生。 流式细胞仪检测流式细胞仪检测 将供者淋巴细胞与受者血清共育后，用荧光标记的抗将供者淋巴细胞与受者血清共育后，用荧光标记的抗 人人IgIg对结合有抗体的细胞染色，在流式细胞仪上进行对结合有抗体的细胞染色，在流式细胞仪上进行 荧光标记测定。该法比微量细胞毒试验的灵敏度高荧光标记测定。该法比微量细胞毒试验的灵敏度高100100 倍。倍。 混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养 将受者与供者的淋巴细胞做双向混合培养，或者与灭将受者与供者的淋巴细胞做双向混合培养，或者与灭 活供者的淋巴细胞做单向混合培养，细胞发生反应的活供者的淋巴细胞做单向混合培养，细胞发生反应的 程度与供、受者相容的程度呈负相关。程度与供、受者相容的程度呈负相关。 细胞介导的淋巴细胞毒试验细胞介导的淋巴细胞毒试验 将受者淋巴细胞与灭活的供者淋巴细胞做常规单向混将受者淋巴细胞与灭活的供者淋巴细胞做常规单向混 合淋巴细胞培养，获得致敏的受者淋巴细胞后，再与合淋巴细胞培养，获得致敏的受者淋巴细胞后，再与 51Cr51Cr标记的、标记的、PHAPHA刺激的供者淋巴细胞做刺激的供者淋巴细胞做CMLCML试验，试验， 51Cr51Cr释放的程度与供、受者相容程度呈负相关。释放的程度与供、受者相容程度呈负相关。 交叉配合试验交叉配合试验 n n 微量细胞毒试验微量细胞毒试验 n n 流式细胞仪检测流式细胞仪检测 n n 混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养 n n 细胞介导的淋巴细胞毒试验细胞介导的淋巴细胞毒试验 移植排斥的免疫学防治移植排斥的免疫学防治 一、排斥反应的监测一、排斥反应的监测 二、排斥反应的防治二、排斥反应的防治 排斥反应的监测排斥反应的监测 1. 细胞免疫学监测 2. 细胞因子监测 3. 抗HLA抗体检测 4. 蛋白、酶类、补体检测 排斥反应的防治措施排斥反应的防治措施 1. 移植抗原检测与配型 2. 免疫抑制剂的使用 3. 移植耐受的诱导 移植抗原的检测与配型 1 1、HLAHLA的检测的检测 ：血清学检测：血清学检测 细胞学检测细胞学检测 基因检测基因检测 2 2、预存抗体检测、预存抗体检测 3 3、交叉配型、交叉配型 免疫抑制 1.1.药物：药物：CsACsA、Fk506 Fk506 2. 2. 单克隆抗体：抗单克隆抗体：抗CD3CD3单抗单抗 3. 3. 血液净化血液净化 ：去除已存在的抗体：去除已存在的抗体 application(s)application(s)mode of actionmode of actionagentagent corticosteroids, prednisone anti-inflammatory, altering T-cell and PMN traffic organ transplant, hypersensitivity, autoimmunity rapamycinrapamycin Inhibition of T cell Inhibition of T cell activation by IL-2activation by IL-2 organ transplantorgan transplant cyclosporine, ticrolimus inhibition of IL-2 production by T cells organ transplant, Immunosuppressive agentsImmunosuppressive agents application(s)application(s)mode of actionmode of actionagentagent azathioprine, 6-MP purine metabolismorgan transplant methotrexatefolate metabolismorgan transplant cyclophosphamide, melphalan alkylation of DNA, RNA and proteins autoimmune diseases, organ transplant x-irradiationLymphopeniamalignancy/marrow transplantation Immunosuppressive agentsImmunosuppressive agents TCR calcineurin 2+ NF-ATc NF-ATn NF-AT Ca 2+ CsACyP FK506FKBP FKBP 蛋白激酶Rapamycin IL-2 IL-2R 输血史对肾移植存活率的影响 移植前输血次数移植前输血次数 一年存活率一年存活率 0 0 次次 44%44% 1-4 1-4次次 58%58% 5-9 5-9次次 60%60% 1010次次 68%68% Blood transfusion and graft survivalBlood transfusion and graft survival 干细胞移植干细胞移植 干细胞：是一类具有自我更新、高度增殖 和多向分化潜能的早期未分化细胞。 干细胞的分类干细胞的分类 胚胎干细胞 成体干细胞 干细胞的临床应用干细胞的临床应用 1.1. 作为细胞治疗与组织器官替代治疗的种子细胞作为细胞治疗与组织器官替代治疗的种子细胞 2.2. 研究胚胎发育的调控机制研究胚胎发育的调控机制 3.3. 作为疾病基因治疗的理想载体作为疾病基因治疗的理想载体 4.4. 用于药物筛选和新药开发用于药物筛选和新药开发 异种移植（异种移植（xenograftxenograft）：）：指不同种属间的移指不同种属间的移 植，是用手术的方法将某一种属个体的器官或植，是用手术的方法将某一种属个体的器官或 组织移植到另一种属个体的某一部位。组织移植到另一种属个体的某一部位。 异种移植的特殊免疫学问题异种移植的特殊免疫学问题 异种移植的特性异种移植的特性 1 1、人体内存在针对动物细胞表面多糖分子的天然人体内存在针对动物细胞表面多糖分子的天然 IgM IgM 抗体，导致超急排斥反应。抗体，导致超急排斥反应。 2. 2. 迟