bcr-abl概述ppt课件

BCR-ABL 上海睿昂 技术部 主要内容 典型BCR-ABL融合基因检测 不典型BCR-ABL融合基因检测 ABL激酶区耐药检测 相关检测产品 典型BCR-ABL融合基因检测 背景知识 t（9;22）(q34; q 11)易位形成 存在于95%的慢性髓细胞白 血病(CML)，20%-30%的成人 急性淋巴细胞白血病(ALL)和 2%-5%的儿童 ALL 患者中。 根据BCR基因的断裂点不同，可分为 m-BCR（p190），M-BCR(p210)，u- BCR(p230)三种。 在30-50%的成人ph+的ALL，20-30% 儿童ph+的ALL病例中BCR/ABL融合基 因是p210型的。 60%的ph+的ALL患者的BCR-ABL融合 基因是p190型的 。 其中P230融合基因非常罕见。 p190刺激细胞增殖的能力比p210要 强，病情发展快、恶性程度更高， BCR-ABL BCR-ABL 在ALL中，Ph阳性和随之出现的BCR/ABL融合基因是一个 非常不好的标志，它影响着病人血相的完全缓解率和可 能的生成率。 该基因阳性的病人，可用格列卫(TKI)进行治疗。 但是BCR-ABL阳性的ALL患者预后差，5年存活率10%(IS)或未达到PCyR 伊马替尼为主要治疗药物 更换可替代的TKI药物 加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时） 达沙替尼或尼洛替尼为这也要治疗药物 继续使用同样的TKI药物或更换可替代的TKI药物（除了伊马替尼） 6个月 BCR-ABL/ABL110%(IS)或PCyR继续使用相同的TKI药物 BCR-ABL/ABL110%(IS)或未达到PCyR 更换可替代的TKI药物 12个月 CCyR继续使用相同的TKI药物 PCyR 继续使用相同的TKI药物或更换可替代的TKI药物 加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时） 有少量或没有细胞遗传学反应更换可替代的TKI药物 细胞遗传学复发 更换可替代的TKI药物 加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时） 18个月 CCyR继续使用相同的TKI药物 PCyR 更换可替代的TKI药物 细胞遗传学复发更换可替代的TKI药物 NCCN推荐CML跟踪治疗监测标准 CML-如何进行相关实验室检测 QPCR检测： 1,在诊断时; 2, 当患者对治疗有反应时,每三个月检测一次; 达到CCyR后，3年时间里每三个月检测一次， 之后每3-6个月检测一次； 3，若发现在MMR阶段, BCR-ABL上升（1 Log），应在1-3个月内重复QPCR检测. 对数级减少 BCR-ABL下降 基线 -1 log -2 log -3 log -4 log -5 log 国际标准（IS） 100% 10% 1.0% 0.1% 0.01% 0.001% 完全血液学缓解CHR 完全细胞遗传学缓解 CCYR 主要分子学缓解 MMR 完全分子学缓解 CMR （检测不到BCR-ABL转录） BCR-ABL（%） CML分子学缓解的评估标准 BCR-ABL融合基因定量的意义 1、对BCR-ABL融合基因的检测不仅可以对该类病人进行确诊，而且可以根据 定量的结果制定合适的治疗方案 2、在治疗过程中，根据融合基因的定量情况，对疗效进行评价和预后判断 3、在达临床缓解后，对融合基因进行定量检测还可以对复发进行预测，从 而确定干预性治疗的时间，剂量等，使病人获得一个长的无病生存期 不典型BCR-ABL融合基因检测 不典型BCR-ABL融合基因 除了三类典型的BCR-ABL融合基因外，约有1%的CML患者 其断裂点不在以上常见的位点，从而形成不典型BCR-ABL 融合基因亚型，包括e3a2、e6a2、e8a2、e13a2、e19a2、 e14a3、e1a3、e13a3等。 由于BCR-ABL常规检测类型中并不包括少见的不典型BCR- ABL融合基因亚型，因此容易导致PCR检测结果的假阴性， 延误该类病人的诊断和治疗。 e6a2 来源：Acta Haematol. 2009.7.29;122(1):11-16. Epub ahead of print Links 具有bcr-abl罕见断裂点e6a2的2位病人伊马替尼无效 e1a3 测序结果： p 采用VCP化疗方案联合伊马替尼治 疗1个月后，BCR-ABL融合基因转阴 ，进一步证实e1a3对TKI敏感。 e14a3和e19a2 p 伴不典型BCR-ABL融合基因 的CML发病率极低，酪氨酸 及酶抑制剂或HSCT都可以 取得疗效。 实例分析：e13a3 4例标本验证： FISH检测阳性，但是筛查 或BCR-ABL荧光定量检测 结果阴性。 不典型BCR-ABL融合基因 荧光验证结果：e13a3 不典型BCR-ABL荧光检测结果（标本验证） 全基因组测序发现新的融合方式：e13a2 Detection and characterization of a novel BCR-ABL1 fusion in chronic myeloid leukemia by next-generation sequencing 这个初诊为CML，染色体 核型分析未见分裂像，所 有BCR-ABL1检测都是阴 性. 经NGS WGS检测，发现 一个新的BCR-ABL1融合 基因(e13a2). CANCER BIOLOGY & THERAPY 2016, VOL. 0, NO. 0, 17 /10.1080/15384047.2016.1219821 CML案例, 细胞遗传学分 析和FISH检测结果费城易 位， 而BCR-ABL1检测是 阴性。 经NGS WGS检测，发现 一个新的BCR-ABL1融合 基因(e14a3). 全基因组测序发现新的融合方式：e14a3 Lyu et al. Molecular Cytogenetics (2016) 9:47 DOI 10.1186/s13039-016-0257-5 A novel BCR-ABL1 fusion gene and its transcript in a CML case. ABL激酶区耐药检测 背景知识 近年来出现的靶向治疗药物，酪氨酸激酶抑制剂 ( tyrosine kinase inhibitors， TKIs) 因药物安全系数高，且服用方便，对患者生活质量影响小，被广泛应用于 临床治疗 CML。其中 伊马替尼逐渐取代传统治疗方法，成为CML的一线治疗方 案。 随着伊马替尼广泛应用于临床，部分患者在服药过程中失去了对于伊马替尼的有 效反应，或出现疾病进展，研究发现是ABL激酶区突变导致，因此早期发现BCR- ABL突变，监测疾病进展和伊马替尼反应情况，对于疾病诊疗至关重要。 ABL激酶区突变种类 伊马替尼耐药机制中，主要是BCR-ABL点突变，超过 90%，可分为4 类 ： 在 ATP 结合位点形成突变( P-loop) 、 发生于激活环，阻止形成伊马替尼结合所需的构象激酶 发生于催化区 直接损害伊马替尼结合 NCCN推荐BCR-ABL激酶突变分析的检测规范 推荐的检测时间检测时间 慢性阶段 治疗反应欠佳（没有达到部分细胞遗传学反应或在3-6个月内未达到BCR-ABL10%或在12-18月时未 达到CCyR； 任何治疗失败的迹象（明确的血液学或细胞遗传学复发） BCR-ABL转录本升高1-log或MMR失败； 疾病进展加速或爆发阶段 LOGO 时间最佳=继续治疗警告=更仔细的检测， 部分患者可能通过换药而获益 失败=更改治疗方案 3个月Ph+细胞95%，或BCR-ABL95%, 或BCR- ABL10% 6个月Ph+细胞35%，或BCR-ABL65%, 或BCR- ABL10% 12个月Ph+细胞 0，或BCR-ABL1%Ph+细胞1%, 或BCR-ABL1% 任何时间稳定或达到主要分子学反应丢失主要分子学反应丢失主要分子学反应； 丢失完全细胞遗传学反应； 发生突变 2012年欧洲肿瘤内科学会（ESMO 2012）TKI治疗慢性髓性白血病慢性期疗效标准 LOGO Novartis Oncology Italia dd: Y253H, E255K/V, F359V/C/I 使用达沙替尼 ee: F317L/V/I/C, T315A V299L 使用尼洛替尼 ff: E255K/V, F317L/V/I/C, F359V/C/I,T315A, Y253H 使用Bosutinib gg: T315I 使用普纳替尼 不同的耐药位点-不同的二代药物 X针对Y253H，E255K/V，F359V/C/I突变患者 Y针对F317L/V/I/C, T315A, V299L突变患 者 Z针对E255K/V，F317L/V/I/C, F359V/C/I, T315A ,Y253H突变患者 q针对T315I突变患者或使用2种或以上TKI治疗无效的患者 D2种或以上TKI治疗耐药的患者 不同突变对各种药物耐药的敏感性 来源于长期伊马替尼疗效研究项目（Long-Term Imatinib Effects，ILTE） Haematologica 2016 Volume 101(7):830-838 Ultra-deep sequencing leads to earlier and more sensitive detection of the tyrosine kinase inhibitor resistance mutation T315I in chronic myeloid leukemia u二代测序能更早的监测到T315I的突变 u The T315I mutation mediates resistance to imatinib, dasatinib, nilotinib and bosutinib, whereas sensitivity to ponatinib remains. u T315I mutations could be detected earlier by ultra- deep sequencing compared to Sanger sequencing in a selected group of cases. u Earlier mutation detection by ultra-deep sequencing might allow treatment to be changed before clonal increase of cells with the T315I mutation. 相关检测产品 LOGO 产品名称方法学检测基因产品规格检测荧光通道 C100041 白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法） BCR-ABL分型检测 RT-PCR法20T/kit FAM C100007M 白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法） BCR-ABL RT-PCR法20T/kit FAM C100004M 白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法） BCR-ABL 210 RT-PCR法20T/kit FAM C100005M 白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法） BCR-ABL 190 RT-PCR法20T/kit FAM C100006M 白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法） BCR-ABL 230 RT-PCR法20T/kit FAM C100051白血病ABL激酶区突变检测试剂盒RT-PCR法20T/kit FAM C100052 白血病BCR-ABL融合基因ABL激酶区相关T315I突变 检测试剂盒 RT-PCR法20T/kit FAM 相关有证产品 C001 白血病相关融合基因检测试剂盒（RT-PCR法） 国食药监械（准）字2012第3401209号 RT-PCR法20T/kitFAM 相关产品目录 样本准备 l 样本类型：首选骨髓标本。初发病人可使用外周血抗凝标本 (EDTA抗凝管) l 样本采集要求： (1)监测MRD时，保证骨髓细胞数量达到106 cells/ml (2)样本不纯或数量少：采用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞 l 样本运