白喉棒状杆菌及检验课件

第二十三章： 需氧革兰阳性杆菌及检验 检验系 刘涛 棒状杆菌属棒状杆菌属 第一节第一节 * * GG 菌， 菌，菌体一端或两端彭大呈棒状而得名菌体一端或两端彭大呈棒状而得名 * * 菌体染色不均匀，出现节段浓染或异染颗粒菌体染色不均匀，出现节段浓染或异染颗粒 * * 排列不规则，排列不规则，呈栅栏状，或呈栅栏状，或L L形，或形，或V V形形 * * 无荚膜、无鞭毛、不产生芽胞无荚膜、无鞭毛、不产生芽胞 * * 多为条件致病菌，多为条件致病菌，只有白喉棒状杆菌是致病菌只有白喉棒状杆菌是致病菌 白喉棒状杆菌 CASE 患儿，男，6岁，咽痛、声嘶 、咳嗽、发热3天； 体温37 ，心率96/分，白细 胞升高；亚碲酸钾培养+ 病史：百白破疫苗出生后三个 月打了第一针，加强免疫因经 济困难而未接种（家属说舍不 得花钱，一针要40多元；孩子 的父亲右手残疾） 问题：什么病？ 患者和密切接 触者需如何处理？ * * 白喉（白喉（Diphtheria Diphtheria ）是一种急性呼吸道传染病）是一种急性呼吸道传染病 特征：患者咽喉部出现灰白色的假膜 假 膜 一、生物学性状一、生物学性状 1. 1. 白喉棒状杆菌的形态学特征白喉棒状杆菌的形态学特征 细长杆菌，粗细不一，一端或两端膨大呈棒状，细长杆菌，粗细不一，一端或两端膨大呈棒状， 排列不规则，呈栅栏状、排列不规则，呈栅栏状、V V字形或字形或L L形形。 奈瑟染色奈瑟染色 革兰染色革兰染色 1. 1. 白喉棒状杆菌的形态学特征白喉棒状杆菌的形态学特征 异染颗粒异染颗粒 成分：成分： 核糖核酸核糖核酸 + + 多磷酸盐多磷酸盐 作用：作用： 储存养料、鉴定价值储存养料、鉴定价值 AlbertAlbert染色染色 2. 2. 培养特性培养特性 * *吕氏血清斜面培养物吕氏血清斜面培养物 含凝固的血清，生长含凝固的血清，生长 迅速，异染颗粒明显。迅速，异染颗粒明显。 * *亚碲酸钾血平板亚碲酸钾血平板 黑色菌落。黑色菌落。 还原还原 在亚碲酸钾血琼脂平板上的在亚碲酸钾血琼脂平板上的白白 喉棒状杆菌菌落喉棒状杆菌菌落（181824 24 h h ） 亚碲亚碲酸盐酸盐 碲碲（黑色黑色） 根据对亚碲酸钾的还原根据对亚碲酸钾的还原能力能力、菌落形态及生、菌落形态及生 化反应可将白喉棒状杆菌分为化反应可将白喉棒状杆菌分为3 3种类型种类型：重型重型（ gravisgravis）、轻型、轻型（mitismitis）和中间型和中间型（ intermediusintermedius）。 重型 轻型 菌落不溶血、不规则、有条纹菌落不溶血、不规则、有条纹 菌落菌落 溶血、光泽、凸起溶血、光泽、凸起 3. 3. 变异变异 * * 白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。 * * 无毒株 溶原性细菌（产生外毒素） 噬菌体噬菌体 4. 4. 抵抗力抵抗力 * * 抗寒冷和干燥抗寒冷和干燥 * * 对湿热抵抗力弱对湿热抵抗力弱 * * 对青霉素、氯霉素、红霉素敏感对青霉素、氯霉素、红霉素敏感 对磺胺不敏感对磺胺不敏感 二、致病性与免疫性二、致病性与免疫性 1. 1. 致病物质致病物质： * * 白喉毒素（白喉毒素（diphtherotoxindiphtherotoxin） * * 索状因子（索状因子（cord factorcord factor） * * K K抗原（抗原（K antigenK antigen） 2. 2. 致病机制致病机制 1 1）白喉外毒素白喉外毒素：只有携带只有携带 棒状杆菌噬菌体棒状杆菌噬菌体的溶的溶 原性白喉杆菌才能产生外毒素原性白喉杆菌才能产生外毒素 外毒素外毒素结构结构： B B亚单位：有结合和转位功能亚单位：有结合和转位功能 A A亚单位：其上有亚单位：其上有1 1个催化区个催化区 作用靶位：心肌和神经细胞作用靶位：心肌和神经细胞 2. 2. 致病机制致病机制 2 2）索状因子）索状因子 破坏哺乳动物细胞中的线粒体，破坏哺乳动物细胞中的线粒体， 影响细胞呼吸与磷酸化。影响细胞呼吸与磷酸化。 3 3）K K抗原：抗吞噬抗原：抗吞噬 3. 3. 所致疾病所致疾病： * * 传染源传染源：患者、：患者、恢复期带菌者、健康恢复期带菌者、健康带菌者带菌者 * * 传播途径：飞沫或污染（多在秋冬季）传播途径：飞沫或污染（多在秋冬季） * * 临床表现： 白喉白喉急性呼吸道传染病急性呼吸道传染病 * * 临床表现： 1）细菌与毒素共同作用引起局部症状引起局部症状： 炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜导致窒息 2）毒素入血引起全身中毒症状毒素入血引起全身中毒症状： 外周神经炎：膈肌麻痹呼吸困难声带麻 痹声音嘶哑软颌麻痹吞 咽困难 心肌炎 3. 3. 所致疾病所致疾病： 1 1）人群易感性）人群易感性 * * 普遍易感；普遍易感； * * 1515岁儿童；岁儿童； * * 成人也有可能。成人也有可能。 4. 4. 免疫性免疫性 2 2）免疫特点）免疫特点 * * 抗毒素免疫；抗毒素免疫； * * 感染后机体可获得牢固的免疫力；感染后机体可获得牢固的免疫力； * * 机体还可通过其它方式获得免疫力：机体还可通过其它方式获得免疫力： 六月以下婴儿六月以下婴儿- - 母亲母亲 成人成人- - 隐性感染、疫苗隐性感染、疫苗 三、微生物学检查法三、微生物学检查法 * * 标本：假膜边缘取材标本：假膜边缘取材 * * 涂片镜检：涂片镜检： 革兰染色革兰染色 菌体颜色菌体颜色 奈瑟染色奈瑟染色 典型典型 菌体排列菌体排列 AlbertAlbert染色染色 异染颗粒异染颗粒 标本片镜下特点 * * 分离培养：分离培养： 标本标本 接种接种 吕氏血清斜面吕氏血清斜面 3737 612612 h h 直接涂片镜检直接涂片镜检 接接 种种 亚碲酸钾琼脂平板亚碲酸钾琼脂平板 培养培养 黑色菌落黑色菌落 1218 h1218 h 灰白色小菌落灰白色小菌落 （快速诊断快速诊断 ） Elek平板试验 白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素，白喉抗毒 素可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性，可用细 菌培养法和动物试验予以证实。 【原理】 Elek平板毒力试验是一种体外的毒力测定方 法。通过观察白喉抗毒素与白喉外毒素的双向 琼脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒 性。 【材料】 1产毒素的白喉杆菌、类白喉杆菌及待测的白喉 杆菌吕氏血清斜面24h培养物。 2Elek琼脂蛋白胨培养基。 3白喉抗毒素(1000u/m1)、马或兔血清(无菌)、无 菌滤纸条(6.01.5cm)、无菌5ml刻度吸管、无菌平皿及 镊子等。 【方法】 1将Elek琼脂蛋白胨培养基10ml加热 融化，待冷至5055时，加入无菌的马 或兔血清2ml，立刻混匀，并倾注平板。 2趁琼脂未凝固前，用无菌镊子将浸 有白喉抗毒素(1000u/m1)的滤纸条(尽量使 滤纸条上的抗毒素流尽)贴于平板中央，待 琼脂凝固后将平板置37温箱内12h(平 板面朝下)，使培养基略干燥。 3接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌 、类白喉杆菌和待检的白喉杆菌分别以与滤 纸条成垂直的方向划线接种，接种线须密且 集中，接种的菌量宜多。若用此法测未知标 本需设阳性对照(产毒株)及阴性对照(无毒株 )，一般每个平板可接种56个标本。置 37培养24、48、72h观察结果。 【结果】 注意观察在接 种线两侧距滤纸条 约1cm处有无与接 种线呈45角的白色 沉淀线出现。有沉 淀者，白喉杆菌毒 力试验阳性，该菌 株产生白喉外毒素 ；无沉淀线者，白 喉杆菌毒力试验阴 性，该菌株不产生 白喉外毒素。 * * 毒力鉴定：动物试验，毒力鉴定：动物试验，ElekElek平板毒力实验平板毒力实验 白喉杆菌菌苔白喉杆菌菌苔 沉淀线沉淀线( (阳性阳性 ) ) 含白喉抗毒素滤纸片含白喉抗毒素滤纸片 ElekElek毒力实验结果毒力实验结果 四、防治原则四