20%koh溶甲法诊断甲真菌病与直接镜检、培养和甲病理对照研究(1)

20%KOH20%KOH 溶甲法诊断甲真菌病与直接镜检、溶甲法诊断甲真菌病与直接镜检、 培养和甲病理对照研究培养和甲病理对照研究(1)(1) 作者：李薇，冉玉平，杜晓萍，代亚玲 【摘要】目的提高甲真菌病诊断的准确率和阳性率， 探索新的实验方法。方法对疑为甲真菌病感染者 61 例采用 20%KOH 溶甲法从甲标本中检测真菌，并与直接镜检法、真 菌培养法和组织病理学检查进行比较。结果 20%KOH 溶甲法 检出率%，高于直接镜检法、真菌培养法和组织病理学检查。 结论 20%KOH 溶甲法是一种检出率高、可行性强的甲真菌病 诊断方法。 【关键词】甲真菌病；诊断 【Abstract】ObjectiveToimprovetherateofaccuracyandp ositivenessindiagnosisofonychomycosis，andtoexplore newapproaches.Methods61casesofsuspectedonychomycosi sweretestedbyKOH- treatednailclippings，andcomparedwithdirectmicrosco picexamination，fungalculture，histopathologicexami nation.ResultsThepositiverateofKOH- treatednailclippingswas%，andwasalsohigherthanother approaches.ConclusionKOH- treatednailclippingsisareliablemethodthathasprovedh ighpositiverate. 【Keywords】onychomycosis；diagnosis 甲真菌病在自然人群中的发病率为 2%13%1 ，与其他皮 肤病如银屑病等从临床上难以区别，甲屑直接镜检和真菌 培养是公认诊断甲真菌病的金标准，但受取材的质和量等 因素影响，二者结合诊断的阳性率70%2 。近年来开展 了剪取病甲做组织病理学检查3 ，使查菌的阳性率得以 提高，却存在着制作繁杂、耗时长等缺点，限制了其推广。 为了寻求检出率高、可行性强的诊断方法，我们采用 20%KOH 溶甲法（以下简称溶甲法）从甲标本中检测真菌， 并与直接镜检法、真菌培养法（以下简称培养法）和组织 病理学检查（以下简称病检法）进行了比较。 1 资料与方法 一般资料我科门诊和住院疑为甲真菌病感染者共 61 例，男 24 例，女 37 例，年龄 870 岁，平均岁，病程 3 个月40 年，平均年。指、趾甲共 207 个。均在受检前 1 个月内未 接受过局部和系统抗真菌药物治疗。 标本采集以 75%酒精消毒病甲表面后，用消毒手术刀刮弃表 层甲屑，刮和剪取足量甲（屑） ，分为 4 份。 方法和判断标准 4 份标本分别按下述 4 种方法处理。 直接镜检法取刮下甲屑于载玻片上，加 10%KOH1 滴溶解， 10min 后观察，镜下见菌丝和孢子者为阳性。 培养法甲（屑）分别接种于以下 3 种培养基：含氯霉素、 放线菌酮的沙堡培养基，2528C 培养；含氯霉素、不 含放线菌酮的沙堡培养基，2528C 培养；含菜籽油的 沙堡培养基，37C 培养。每管培养基种 24 点，培养 4 周无菌落生长为阴性；有菌落生长者，据其生长特征以及 玻片法或钢圈法培养结构特点做菌种鉴定，必要时做米粉 吐温琼脂培养基、尿素酶培养基帮助鉴定。 病检法剪下的病甲经%戊二醛固定；软化脱钙（脱钙液：盐 酸 34ml、氯化铝 28g、甲酸 20ml，蒸馏水 400ml） ；酒精梯 度脱水及氯仿处理（酒精浓度分别为 85%、95%、100%） ；石 蜡包埋、切片；染色、封片镜检（行 PAS 及六胺银染色） 。 组织中见到菌丝和孢子者为阳性。 溶甲法病甲置 20%KOH 内，56C 水溶 30min；生理盐水洗 涤溶解物，离心后弃上清液；沉淀物涂片；丙酮固定； Parker 墨水染色，封片镜检。观察到菌丝和孢子者为阳性。 2 结果 直接镜检法 61 例拟诊患者甲标本中，真菌阳性者 35 例 （%） ，见图 1。 培养法 61 例拟诊患者甲标本培养出 38 例 40 株真菌，单一 感染 36 例（%） ，混合感染 2 例（%） 。菌种分布情况：33 株 皮肤癣菌中红色毛癣菌 31 株，须癣毛癣菌 2 株，见图 2； 酵母菌 6 株中白色念珠菌 2 株，糠秕马拉色菌 3 株，念珠 地丝菌 1 株；曲霉属 1 株。有 2 例为混合真菌感染，1 例为 红色毛癣和糠秕马拉色菌，1 例为红色毛癣菌和白色念珠菌。 病检法 46 例检出真菌成分。35 例直接镜检阳性标本中，34 例检出真菌成分。33 例有皮肤癣菌感染病甲的菌丝多较细， 分隔、分支，可见链状关节孢子，常位于裂隙中，见图 3；4 例分离出酵母菌病甲的孢子小、散在或群集。1 例分 离出真菌病甲的菌丝粗而短，着色不均，排列紊乱，多位 于裂隙中。9 例培养阴性病甲的甲板中均见有真菌成分，菌 丝较细，分隔，菌体多侵犯甲板深层，平行、斜行或垂直 于甲板表面走行，提示为皮肤癣菌。3 例培养阴性的病甲： 2 例银屑病患者疑合并甲真菌感染标本和 1 例疑甲真菌感染 标本（随访 3 个月后出现银屑病束状发） ，见角化不全，大 量细胞核残留，无菌丝和孢子，提示为银屑病甲改变，可 排除甲真菌病的诊断。 溶甲法 35 例直接镜检阳性标本均检出真菌成分。33 例皮肤 癣感染的病甲：菌丝多较细，见图 4；2 例分离酵母菌的病 甲，1 例见假菌丝和顶端厚壁孢子，提示为白色念珠菌。17 例培养阴性的病甲：菌丝多较细，分隔、分支，关节孢子， 提示多为皮肤癣菌。 4 种方法检出结果见表 1。 表 161 例疑甲真菌病 4 种方法检查结果例 病检法与直 接镜检相比，2=，PPPPP3 讨论 甲真菌病是为数不多的可治疗的甲病之一，因而其正确诊 断十分重要。直接镜检检出率较低，本研究为 5738%，但 快速、方便，可直接明确有无真菌感染。培养法检出率%， 造成培养阳性率低的原因可能是：取材不当，如标本中无 活的菌丝存在，取甲屑培养则无菌生长。培养基选择，如 放线菌酮在一定程度上抑制皮肤癣菌以外的真菌（酵母菌） 生长。培养法要求观察 4 周，门诊一般也要 10 天后出报告， 耗时虽较长，但可鉴定菌种，进而行药敏试验，对药物的 选择有一定指导意义，如克柔念珠菌对氟康唑天然耐药。 病检法检出率%，高于直接镜检和培养法，能观察到真菌在 甲中寄生的状况，可对病原