雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化 毕业设计论文.doc

毕业设计(论文)题 目 名 称：雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织 细胞的动态变化 题 目 类 别： 毕业论文 学 院 （系） ： 动物科学学院 专 业 班 级： 动医3022 学 生 姓 名： 指 导 教 师： 时 间 ： 目录任务书 开题报告 指导老师审查意见 评阅老师记录 答辩会议记录 中文摘要 英文摘要 1前言11.1益生素的作用机理11.2益生素的作用61.3国内外的研究热点81.4我国益生素的展望92材料与方法 102.1材料 102.2方法 113结果与分析 133.1雏鸡服用益生素后盲肠扁桃体抗体生成细胞数量变化 133.2 雏鸡服用益生素后哈德尔腺抗体生成细胞数量的动态变化 153.3 雏鸡服用益生素后十二指肠派伊尔结杭体生成细胞数量动态变化 174讨论与小结 18参考文献 19致 谢 20外文参考资料原文 外文参考资料译文 长江大学毕业设计(论文)任务书学 院 动物科学学院 专 业 动物医学 班 级 动医3022班 学生姓名 杨 飞 指导教师/职称 赵红梅（副教授） 1. 毕业设计(论文)题目：雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化2. 毕业设计(论文)起止时间：2005年12月1日2006年6月10日3. 毕业设计(论文)所需资料及原始数据（指导教师选定部分）所需资料:1 李平兰，江汉湖乳酸菌细菌素研究进展.微生物学通报，1998，25(2)2 柴家前，孙明军.短乳杆菌的分离鉴定及对鸡肠粘膜siga分泌的影响j. 中国兽医学报.2001,21(5);485-489. 3 孔健，马桂荣，刘稳，任红卫益生素生产菌sb900的分离及生物特性研究.微生物学报，1995，35(6)4 潘康成，何明清.地衣芽抱杆菌对家兔体液免疫功能的影响研究j.中国微生态学杂志.1998,10(4);204-206.5 郭兴华.益生菌基础与应用m.北京:北京科学技术出版社，2001,10.6 王世若，王兴龙，韩文瑜.现代动物免疫学m.长春:吉林科学技术出版社，2001,7:260-2687 阴天榜，刘兴有.家禽免疫学m.北京:中国农业科技出版社8 刘忠贵，郑世民，杨丽萍.感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后局部粘膜液功能变化j.畜牧兽医学报，2001,32(2):187-191.9 郑世民.雏鸡感染鸡传染性贫血病毒后免疫变化和对新城疫疫苗的应答及其机理c.东北农业大学博士学位论文，2002:13-15. 10 潘康成，何明清我国微生物添加剂研究及应用兽药与饲料添加剂，2002，4：35-3711 王兴龙，微生态学与微生态制剂的研究进展中国兽医学报，1997，1：101-10312 perdigon g, alvarec s, rachid m, et al. immure system stimulation by pmbioticsj.dairy sci.1995,78:1597-1606.13 gismondo m r,drago l,lombardi a.review of probiotics available to modify gastrointestinal floraj，international journal of antimicrobial agents，1999，12：287-29214 anatola bezkorovavainy.probic:determ inants of survivaland growth in the gutj，american journal of clinical nutrition，2001，73(suppl)：399-40515 fuller r. probiotics in man and animals j.appl bacterio,1987,66:365-378.16 yun-kun lee. handbook of probiotics m.printed in the united states of america, 1999.17 kelly scott swanson. prebiotics and probiotics: impact on gut microbial populations, nutrient digestibilities,fecal protein catebolite concentrations, and immune function of humans and dogsd.university of illinois, and urbana-champaign doctor of phiosophy thesis,2002:1-26.18 jalil benyacoub, gail l. czarnecki-maulden, christoph cavadini. supplmnantation of food with enterococcus faecium ( sf68 ) stimulates in young dogs1.the journalnutrition, 2003, 133 (4):1158-1162.原始数据:4. 毕业设计(论文)应完成的主要内容1毕业论文的任务书2毕业论文的开题报告3针对毕业论文课题任务的调查报告,实验记录或报告4学生毕业论文工作记录本5外文资料的译文(不少于3000字)5毕业设计(论文)的目标及具体要求目标：本实验主要是进行雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化的研究 。 要求：1 快速采取盲肠扁桃体、派伊尔结、哈德尔腺做成组织切片；2 用免疫组织化学染色法测定盲肠扁桃弥散区和淋巴小结、哈德尔腺集合管和分泌小管、十二指肠派伊尔结的iga、igm、igg抗体生成细胞数量。 6. 完成毕业设计(论文)所需的条件及上机时数要求1 实验动物： 1日龄雏鸡2 实验仪器：烧杯、解剖刀、解剖针、剪刀、镊子、解剖盘、单面刀片、培养皿、吸管、指形管、橡皮圈、软木塞、胶布、塑料脸盆、恒温箱、蜡杯、镊子、解剖针、酒精灯、塑料面盆、温台、切片机、 切片刀、 单面刀片、酒精灯、 蜡铲、台木、毛笔、 蜡带盘、 载玻片、 镊子、滴瓶、展片台、显微镜、细胞计数板、细胞计数器等3 试剂：组织切片：50%、70%、85%、95%、100%的酒精，二甲苯， 甘油蛋白，10%中性福尔马林固定液， 1/2二甲苯+1/2石蜡，纯石蜡。免疫组织化学染色：pbs缓冲液（ph7.27.4）： nacl 137mmol/l，kcl 2.7mmol/l，na2hpo4 4.3mmol/l，kh2po4 1.4mmol/l。0.01mol/l柠檬酸盐缓冲液（cb，ph6.0，1000ml）： 柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。0.5mol/l edta缓冲液（ph8.0）： 700ml水中溶解186.1gedta2h2o，用10mmol/l naoh调至ph8.0,加水至1000ml。1mol/l的tbs缓冲液（ph8.0）： 在800ml水中溶解121g tris碱，用1n的hcl调至ph8.0,加水至1000ml。 3%甲醇-h2o2溶液：用30%h2o2和80%甲醇溶液配制。 封闭剂: a. 甘油和0.5mmol/l碳酸盐缓冲液（ph9.09.5）等量混合； b. 油和tbs(或pbs)配制。 4上机时数：总共上机120余小时，包括资料查找和论文编写 任务书批准日期 年 月 日 教研室(系)主任(签字) 任务书下达日期 年 月 日 指导教师(签字) 完成任务日期 年 月 日 学生（签名） 长 江 大 学毕业设计（论文）开题报告题 目 名 称：雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化题 目 类 别： 毕业论文 学 院 （系） ： 动物科学学院 专 业 班 级： 动医3022班 学 生 姓 名： 杨 飞 指 导 教 师： 赵红梅 开题报告日期： 2005年10月 雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化学 生：杨 飞 长江大学动物科学学院指导老师：赵红梅 长江大学动物科学学院一题目来源题目来源于赵老师研究课题。二目的及意义 益生素是一种可通过改变肠道菌群平衡而对动物施加有利影响的活微生物饲料添加剂，即调节机体的微生态环境，益生素的产品称为微生态制剂。动物的肠道、体表、呼吸道和生殖道等存在大量的微生物群，这些微生物与机体细胞密切接触、交换能量，甚至互传信息与动物机体的营养、免疫、急性及慢性感染有着密切的关系，构成了动物的微生态系统，即动物微生态。该系统中的各种微生物种群协调共生，肠道内微生物保持着宿主的微生态平衡，当正常微生物种群紊乱时，微生态系统的平衡被破坏，动物消化生长功能受阻或失调，导致疾病发生。关于胃肠道微生态学在动物生产上的作用研究最多，也最深入，主要是加强肠道微生物区系的屏障功能或增进免疫功能，增强抗病力和体质，提高饲料利用率和动物生长率。国内外资料证明益生素有增强哺乳类动物免疫机能的作用，关于禽特异性免疫还缺乏系统的研究。禽局部粘膜是病原入侵的主要客户，局部粘膜的免疫状态很大程度上影响着禽抵抗病原的能力，益生素能否提高雏鸡局部粘膜的免疫功能，尚未见有报道。因此，本文从禽局部粘膜免疫组织的免疫学变化着手，对服用益生素后雏鸡局部免疫组织一盲肠扁桃体、派伊尔结、哈德尔腺的iga, igm , igg生成细胞数量的动态变化进行了研究，为益生素的临床应用及进一步阐明其作用机理提供理论依据。三阅读的主要参考文献及资料名称1 李平兰，江汉湖乳酸菌细菌素研究进展.微生物学通报，1998，25(2)2 柴家前，孙明军.短乳杆菌的分离鉴定及对鸡肠粘膜siga分泌的影响j. 中国兽医学报.2001,21(5);485-489. 3 孔健，马桂荣，刘稳，任红卫益生素生产菌sb900的分离及生物特性研究.微生物学报，1995，35(6)4 潘康成，何明清.地衣芽抱杆菌对家兔体液免疫功能的影响研究j.中国微生态学杂志.1998,10(4);204-206.5 郭兴华.益生菌基础与应用m.北京:北京科学技术出版社，2001,10.6 王世若，王兴龙，韩文瑜.现代动物免疫学m.长春:吉林科学技术出版社，2001,7:260-2687 阴天榜，刘兴有.家禽免疫学m.北京:中国农业科技出版社8 刘忠贵，郑世民，杨丽萍.感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后局部粘膜液功能变化j.畜牧兽医学报，2001,32(2):187-191.9 郑世民.雏鸡感染鸡传染性贫血病毒后免疫变化和对新城疫疫苗的应答及其机理c.东北农业大学博士学位论文，2002:13-15. 10 潘康成，何明清我国微生物添加剂研究及应用兽药与饲料添加剂，2002，4：35-3711 王兴龙，微生态学与微生态制剂的研究进展中国兽医学报，1997，1：101-10312 perdigon g, alvarec s, rachid m, et al. immure system stimulation by pmbioticsj.dairy sci.1995,78:1597-1606.13 gismondo m r,drago l,lombardi a.review of probiotics available to modify gastrointestinal floraj，international journal of antimicrobial agents，1999，12：287-29214 anatola bezkorovavainy.probic:determ inants of survivaland growth in the gutj，american journal of clinical nutrition，2001，73(suppl)：399-40515 fuller r. probiotics in man and animals j.appl bacterio,1987,66:365-378.16 yun-kun lee. handbook of probiotics m.printed in the united states of america, 1999.17 kelly scott swanson. prebiotics and probiotics: impact on gut microbial populations, nutrient digestibilities,fecal protein catebolite concentrations, and immune function of humans and dogsd.university of illinois, and urbana-champaign doctor of phiosophy thesis,2002:1-26. 18 jalil benyacoub, gail l. czarnecki-maulden, christoph cavadini. supplmnantation of food with enterococcus faecium ( sf68 ) stimulates in young dogsi.the journalnutrition, 2003, 133 (4):1158-1162.四 国内外现状、发展趋势及研究的主攻方向 微生态制剂包括益生菌、益生元及含有益生菌和益生元的合生素三种类型。微生态制剂作为绿色饲料添加剂现已被广大消费者所接受。与化学结构简单、作用机理单一的抗生素相比，微生态制剂的成分要复杂得多。除了活的菌体之外，菌体本身尚包含碳水化合物、蛋白质和核酸等生物大分子，由于这些物质的存在决定了其作用原理的多样性。一般认为微生态制剂促进畜禽健康的作用机理包括以下几个方面:帮助寄主肠道菌群尽快达到应有数量，或者维持其生态平衡。饱和肠粘膜的吸附位点，致使病原菌无法在肠粘膜上定植。对于益生元来讲，可以竞争性地和病原菌表面的受体结合，从而使病原菌不能与肠壁受体结合.刺激寄生免疫细胞的活性，提高免疫球蛋白的水平。动物免疫系统的复杂程度和动物体重的增长呈反比的关系。现在认为减少肠道中病原菌的数量和降低对免疫系统的刺激会导致动物体内细胞介素的降低。而动物体内细胞介素的水平和动物的生长有关。白细胞介素一1的升高可以引起动物生长速度的下降。所以那些对动物可以产生显著免疫调节作用的益生菌和益生元在使用上要格外注意，对于添加量、使用次数和使用方法要经过多次严格的实验才可能达到最佳效果。 我们必须清楚的认识到并不是所有的益生菌都是绝对安全的。有的益生菌含有的抗药因子可以通过基因物质的交换转移到正常的肠道菌群中。现在有人把含有抗药因子的基因工程菌用做益生菌，其结果将会和滥用抗生素一样，制造出任何抗生素都无法消灭的超级细菌，给人类造成更大的威胁。绿色饲料添加剂的开发已是大势所趋，值得指出的是，在研究益生菌的同时，必须下大力气研究动物肠道菌菌群自身的特点及与寄主和环境之间的关系，才能设计出新一代高效的微生态制剂。五 主要研究内容、需要重点研究的关键问题及解决思路1 研究内容本实验主要是进行雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化的研究 2 所研究的关键问题（1） 快速采取盲肠扁桃体、派伊尔结、哈德尔腺（2） iga、igm、igg生成细胞数量的测定3 解决思路 盲肠扁桃体、派伊尔结、哈德尔腺的iga、igm、igg生成细胞数量的测定：组织器官的快速采取组织切片免疫组织学方法光镜检测单位面积阳性细胞（细胞质中有棕色颗粒）六 完成毕业设计（论文）所必须具备的工作条件及解决的办法1实验动物 1日龄雏鸡、益生素均由赵红梅老师提供2实验场所 长江大学动物科学院微生物实验室 七 工作的主要阶段，进度与时间安排1 2005年9月1日2005年10月15日，在西校区图书馆三楼自然期刊阅览室对乳酸菌的相关资料进行收集，同时在电子阅览室对论文相关资料进行下载整理及撰写开题报告，交给赵红梅老师审阅修改。2 2005年10月16日2006年6月5日，为论文作准备，收集资料、数据及在实验室进行对雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化测得的数据资料进行整理。3 2006年6月10日，将整理好的论文交由赵红梅老师审阅批改。八 指导教师审查意见 长江大学毕业设计(论文)指导教师审查意见学生姓名杨 飞学院（系）动物科学学院专 业动物医学毕业设计(论文)题目雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化指导教师赵红梅职 称副教授评 审日 期评审参考提纲1. 毕业设计（论文）的理论及实际意义2. 对毕业设计（论文）的研究内容、研究方法及研究结果的意见3. 从毕业设计（论文）来看学生综合应用基础理论与专业知识分析、解决实际问题的能力4. 对毕业设计（论文）的质量与水平的评价，是否有新的见解或创新5. 对毕业设计（论文）期间学生的学习态度、组织纪律的意见6. 毕业设计（论文）是否完成规定任务，是否同意参加答辩7. 存在的主要问题与不足审查意见： 长江大学毕业设计(论文)评阅教师评语学生姓名杨 飞学院（系）动物科学学院专 业动物医学毕业设计(论文)题目雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化评阅教师苏加义职 称副教授评 阅日 期评阅参考提纲1. 毕业设计（论文）的理论及实际意义2. 对毕业设计（论文）的研究内容、研究方法及研究结果的意见1. 从毕业设计（论文）来看学生综合应用基础理论与专业知识分析、解决实际问题的能力2. 对毕业设计（论文）的质量、水平与应用价值的评价，是否有新的见解或创新3. 毕业设计（论文）是否完成规定任务、达到了学士学位论文的水平，是否同意参加答辩4. 存在的主要问题与不足评语：长江大学毕业设计(论文)答辩会议记录学生姓名杨 飞学院(系)动物科学学院专 业动物医学毕业设计(论文)题目雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化指导教师赵红梅职 称副教授辅导教师赵红梅评阅教师苏加义职 称副教授评审日期答辩时间答辩地点一、答辩委员会组成答辩委员会主任/职称：委 员：二、会议记录摘要 1. 答辩委员会提问（分条摘要列举） 2. 学生回答问题情况记录（与提问对应）三、答辩委员会评语（学生毕业设计(论文)质量与水平、分析论证能力、综合应用能力、表达能力、回答问题情况、是否达到学士学位论文水平及建议等）四、学生毕业设计（论文）成绩评定(1) 指导教师评定成绩： _分(2) 评阅教师评定成绩： _分(3) 答辩委员会评定成绩： _分(4) 综合评定毕业设计(论文)成绩(五级制)： _答辩委员会主任（组长）(签名) ：委员 (签名) ：秘书 (签名) ： 年 月 日院(系)答辩委员会主任(签名)： 院(系)(签章)雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化学 生：杨 飞 长江大学动物科学学院指导老师：赵红梅 长江大学动物科学学院摘要 为研究用益生素分别灌服1日龄雏鸡3天，灌服后1、4、7、10、18 d采用组织切片及免疫组织化学方法检测盲肠扁桃体、派伊尔结、哈德尔腺iga 、 igm 、igg生成细胞数量的动态变化，结果发现服用益生素雏鸡其上述三种粘膜组织的iga、igm、igg生成细胞数量主要在47d明显高于对照组雏鸡。表明益生素能够提高雏鸡呼吸道和消化道局部枯膜免疫组织的抗体生成细胞数量。 关链词 雏鸡; 益生素; 局部黏膜免疫组织; iga,igm和igg生成细胞 dynamic changes of antibody-fornung cells in local immune tissues of chicks administrated with prohioticsstudent:yang fei, college of animal science,yangtze universitytutor:zhao hongmei, college of animal science,yangtze university abstract: for studying 1-day-old chicks were fed with probiotics for 3 days,the experimental chicks were taken to collect cecal tonsils,glands of harder and peyers patch to defect the dynamic changes of iga-forming cells、igg-forming cell、igm-forming cells by application of immunohisto chemistry staining after administration probiotics 1、4、7 、10 、18 days .the results were as follows;the iga-forming cells、igg-forming ce1ls、igm-forming cells in local immune tissues of chicks after administration probiotics 47 days were enhanced compared with those of without probiotics. results showed that orally fed probiotics enhanced the iga-forming cells、igg-forming cells and igm-forming cells in local immune tissues of chicks and the effect was pronounced in the probiotics treatment. key words: chicks; probiotics; local immune tissues;iga、igm and igg antibody-fomring cells雏鸡服用益生素后局部黏膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化学 生：杨 飞 长江大学动物科学学院指导老师：赵红梅 长江大学动物科学学院1 前言随着抗生素时代的即将过去，寻找对动物与人类有益无害的抗生素替代品已成为养殖业向前发展的根本所在。其中，益生素乃最先被饲喂动物的在动物消化道内起有益作用的微生物制剂，它以活的形式在动物消化道中与病原菌通过竞争性抑止，增强动物机体的免疫力，并直接参与胃肠道微生物的平衡，达到胃肠道功能正常化的目的。抗生素是种将菌丝筛选和繁殖培养，取其代谢产物制成的抗菌物质，其作用是抑制和杀灭病原菌以达到防止疾病的目的，在此同时，也抑杀了动物机体内正常共生的菌群，破坏了微生态平衡。相反，益生素的作用在于扶植正常微生物菌群，提高他们在肠道中的定居繁殖能力以抵抗致病微生物，把生态失衡调节为生态平衡，从而达到促进生长、防治疾病的目的1。1.1益生素的作用机理益生素的作用机理在理论上的进展还很小，现阶段对其作用机理的研究主要是基于“微生态平衡理论”，主要包括以下几个方面2:1.1.1 优势种群学说 正常微生物群对整个肠道菌群起决定作用，使用微生物的目的就在于恢复优势菌群，保持微生态平衡。正常情况下，动物肠道内存在大量的微生物菌群，其中能有效促进动物生长和饲料消化的有益菌群主要由杆菌、真菌、消化球菌、厌氧弯曲杆菌等令性厌氧菌群、乳杆菌和双歧杆菌构成。田允波等（1999）指出，一般情况下，猪鸡肠道内优势种群为厌氧菌（占99以上，而需氧菌和兼性厌氧菌只占1），其中主要是拟杆菌，双歧杆菌及乳酸杆菌等，各种菌群间既具有正向关系（偏利共生、相生和互惠现象），又有负向关系（竞争、偏害现象人正向效应则促使种群发展，而负向效应则限制或阻止种群的过度膨胀，这两者达到平衡时，我们称之为“微生态平衡”）。当某些条件如外界环境中的物理、化学或生物性状改变，动物受到饲料转换、断乳、运输、或疾病等应激作用，机体处于病例状态，免疫力下降或使用抗生素药物后，均会导致肠道内菌落比例失调，动物体很容易产生疾病。摄入益生素后，消化道内有益菌群得到了有效补充，使有益菌在数量和作用强度上占绝对优势，该菌群的繁殖和代谢，大大的抑制致病菌群的生长繁殖，从而保持菌群的正平衡，有效地防止菌群失调（han等，1984）2。1.1.2 生物夺氧学说 需氧芽胞杆菌能在指主肠道内迅速地定值并生长繁殖，消耗氧气，又称生物夺氧。以益生素形式添加好氧菌特别是芽胞杆菌或添加寡糖特异性地增值芽胞杆菌，它们繁殖过程中均对消耗肠道内的氧气，造成局部厌氧环境，降低氧化还原电势，扶植和促进正常菌群厌氧菌的生长繁殖（吕道俊等，2000），同时也抑制了需氧病原菌和兼性厌氧病原菌的生长，从而把失调菌群恢复到正常状态其中，酵母则可以分泌一些消耗肠道氧气的生长因子，进而在肠道中促进有益菌的生长，维护菌系平衡（吴额群等，2000），从而达到防病。致病、促生长的目的3。1.1.3 菌群屏障学说 化学益生素和益生素的添加可使动物肠道内有益菌增加，而有益菌抑或因其与病原菌结构相似，竞争性抑制病原菌微生物粘附到肠鼓膜上皮细胞上，同病原微生物争夺有限的营养物质和生态位点，并参与其与致病菌群的生存繁殖。同时有益菌在消化道内形成致密膜菌群，形成微生物屏障，抑制消化道粘附病原菌，中和毒性产物，防止毒素和废物的吸收（barrow，1980），从而有助于动物消化道内建立正常的有益微生物区系，排除或控制潜在的病原菌4。1.1.4 微生物的代谢途径微生物代谢方面的作用可归纳为“三流运转学说”，即微生物与宿主动物之间或正常微生物与宿主动物之间存在新陈代谢和物质交换。其主要途径如下5：（1） 降低肠道ph值 添加化学益生素如寡糖类物质或益生素，动物肠道内的乳酸菌和链球菌含量会增多，其代谢产生乳酸。丙酸等有机酸，使消化道内ph值降低，不仅能抑制包括很多革兰氏阳性菌在内的病原菌的存活与繁殖，如乳酸菌分解糖类产生乳酸。乙酸，酵母产生乙醇等抑制对酸敏感病原菌的生长，从而使肠道内有益菌重新占据优势地位，建立起良好的微生物群系；而且在酸性环境中，胃蛋白酶可能被激活成有消化能力的胃蛋白酶，有助于蛋白质的消化吸收。此外，有机酸可加强肠道的蠕动和分泌，促进饲料消化，提高营养物质的吸收5。（2） 抑制有害物质的产生 肠道内的腐败菌。大肠杆菌等增多，会产生如氨、吲哚和酚等一些有害物质，这些物质具有潜在抑制生长和致癌作用，但添加寡糖或益生素后，生产这些物质的酶活性会受到抑制，因而控制有害产物的生成。保加利亚乳酸杆菌的代谢产物能中和大肠杆菌外毒素，许多好氧菌产生的sod可帮助动物消除氧自由基。饲喂啤酒酵母后，肠道内有益菌群大量增值，它们在抑制潜在病原菌的同时，也能阻止肠内腔和氨的产生、促进肠蠕动、维持完整的肠粘膜结构。双歧杆菌可以通过其代谢产物抑制致病菌和肠内固有腐败菌，减少肠道内毒素反腐败产物的含量，减轻肝脏的解毒负担，增强肝脏的营养代谢功能5。（3） 合成与分泌更多营养物质及消化酶 研究表明，动物饲养寡糖和或益生素可使肠道内有益菌如乳酸菌。双歧杆菌等增多，它们可在肠内合成b族和k族维生素及蛋白质，增加血液中钙、镁的数量，改善动物对矿物质的吸收，甚至产生某些未知生长因子，加强动物体营养代谢，促进动物生长，产生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等酶类，提高3大有机物质的消耗率，同时产生如嗜酸菌素、乳糖菌素等抗菌物质，抑制病原菌在肠道内繁殖，合成氨基酸、维生素等营养物质。许多微生物具有很强的利用纤维素、半纤维素、果胶、几了质和植酸磷等动物本身不能直接利用的物质的能力，并释放出细胞内原生质物质供动物利用，从而促进动物生长发育和增重。hotten（1988）报道，枯草芽孢杆菌和地农芽杆菌具有较强的蛋白孢酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解植物饲料中非淀粉多糖酶如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶；酵母菌和霉菌均能产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、等多种酶类，可提高蛋白质和能量利用率。益生菌的蛋白酶和肽酶组成的蛋白酶系统能分解蛋白质和多肽，一方面使饲料养分更容易利用，另一方面，益生菌自身蛋白质分解后也可以为畜禽提供更多的营养素6。（4） 嗜酸乳杆菌乳酸乳杆菌等在动物体内可产生过氧化氢（b.wren等，1982），激活动物大肠内的过氧化物酶硫氰酸盐反应系统，使乳酸过氧化物酶于过氧化氢结合，然后将硫氰酸盐氧化成氧化性中间产物，抑制葡萄球菌等致病菌的生长繁殖（闵晓梅等，2001）。顾宏伟（1994）指出，蜡样芽胞杆菌孢子加到鸡饲料中，肉鸡后期（2849日龄）血液中超氧化物歧化酶活性明显高于对照组，盲肠沙门氏菌阳性率显著降低6。（5） 产生细菌素 细菌素是一类选择性作用于细菌靶细胞的抗菌物质，几乎每一乳酸菌株都能产生细菌素。乳酸乳球菌产生的nisin细菌素可抑制链球菌、葡萄球菌及校状芽孢杆菌生长（杨洁彬等，1996）。嗜酸乳杆菌产生的细菌素能抑制大肠杆菌dna合成。自枯草芽孢杆菌中提取的枯草菌素（subticin），能抑制真菌。双歧杆菌还能产生bifidin菌素，其主要由苯甲基丙氨酸和谷氨酸组成，对肠道腐生菌起抑制作用。此外，还有牛肝菌素、嗜酸乳菌素、嗜酸菌素和无蛋白菌质（reuterin），能有效地抑制广谱性革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌、酵母和真菌产生的毒性氧化代谢产物则emcorar（1997）7。（6） 产生诱导酶 双歧杆菌和某些乳杆菌能产生胞外糖苷酶，降解肠粘膜上皮细胞上致病菌和细菌毒素的潜在受体复杂多糖，通过酶作用，阻止毒素对上皮细胞的粘附和侵入。添加双歧杆菌，小鼠腹腔巨噬细胞内重要的溶酶体酶酸性磷酸酶的含量大大提高（郑仁恕等，1994）7。1.1.5 调节免疫系统 益生菌活菌的粘附特性乃诱导免疫的一个重要因素。病原菌与上皮细胞结合，诱导组织、巨噬细胞程序性死亡，引起炎症反应（lu letal，2001）。益生菌（ewingetal，1994）可保护肠壁，与病原菌竞争附着并进入肠上皮细胞，增大细胞间隙，刺激巨噬细胞产生siga、sigm，有效地抑制感染（perdigonetal，1995）。乳酸菌的两种不同的粘附机理分别为，一种是需要ca2+的非特异系统，ca2+信号活化途径可促使乳酸菌与肠细胞的特异受体结合，所有的乳酸杆菌可借助此系统进行粘附；另一种是ca2+独立系统，该系统中有两种乳酸成份参与乳酸的粘附，一种是抗蛋白酶（与菌体表面吸附有关），另一种是热稳定性对蛋白酶敏感的胞外蛋白，部分乳酸杆菌借助此系统进行粘附（chauviere getal，1999）。也有人认为乳酸菌的细胞脂磷酸壁质是重要的粘附因子，尤其是对啮齿类组织的粘附，其粘附则是借助细菌表面或双歧杆菌培养物上清液中类蛋白促粘附于肠道粘膜表面上，诱导抗体产生（ryhanenel，1996）。用灭活的酵母喂生长猪3周，可提高十二指肠近端甘露糖从粘膜到浆膜的流速，提高回肠林状细胞的数量，增加结肠粘膜厚度（breres getal，2001）。肠道上皮细胞含有甘露寡糖，肠道病原体凝集素与甘露寡糖相结合，而酵母细胞壁的甘露寡糖也能吸附有毒物质和病原菌，使细菌不能与肠壁上含甘露寡糖的细胞结合，从而保护动物肠道（kent l，2000），提高动物抗病力。细菌脂多糖（lp）和细菌肽聚糖(pg)可通过信号传导通路刺激巨噬细胞、内皮细胞、噬中性粒细胞产生介质，如肿瘤坏死因于il-1、il-6、il-8、il-12等，对介导非特异性免疫起重要作用（koppetal，1999）。lps也可单独或联合ifn-r诱导巨噬细胞的no合成（sidney metal，1994）。liene（1995）则发现lps可通过活化巨噬细胞的蛋白激酶c，促进no合酶mrna的表达与翻译。ki-tazawa h等（2001）从乳酸杆菌提取的dna中的2个核酸序列（sol-lg7和sol-lg10）与促有丝分裂的序列具有高度同源性，可诱导b淋巴细胞分裂7。1.1.6 净化环境的机制枯草芽孢杆菌可在大肠中产生氨基酸氧化酶、氨基转移酶及分解硫化物的酶，将臭源吲哚化合物完全氧化，将硫化物氧化成无臭无毒物质，从而降低血液及粪便中有害气体浓度，减少其向外界排放的量，改善饲养环境（赵芙蓉等，1998）。嗜胺菌能消化肠道游离的氨（胺）及吲哚等有害物质，抑制大肠杆菌的活动；而排出的粪中所含有的活菌体，可消化剩余的氨（孙黎等，2001）。苏云金将杆菌添加到禽舍内，可抑制蛆的孵化，减少苍蝇；小鸡口服后，产生的粪便对蛆有杀毒作用（lahi imetal，2001）。用放线菌微生物作除臭剂，除臭率达66，而禽类经处理后成分基本不受影响（林敏等，1995）。g pleluigi等（2001）认为，乳酸杆菌中含有精aa脱亚氨阳性酶，可明显降低多胺水平8。1.1.7 提高液体饲料质量的机制在生物技术的角度上讲，乳酸菌不仅可以改善肠道菌群，而且有益于液体饲料中的菌群；从动物营养而言，则可减少微生物对饲料的降解。饲料卫生差的不良影响多源于微生物的代谢产物。由于微生物利用了饲料中的养分，从而降低了饲料营养价值。许多大型矿物质饲料和预混料生产商，旨以解决许多地方因饲养卫生差所引发的问题，提出了在生态系统（液体饲料冲使用益生素建立良性生态平衡的净化措施）。作为益生素，乳酸菌和酿酒酵母的试验结果提供了正面依据，乳酸菌的快速繁殖产生了大量的乳酸，降低了液体饲料的ph值，而饲料的酸化对饲喂系统和动物肠道中微生物的分配有利，因为病原微生物生长适宜ph值一般都在7左右。此外，乳酸菌与有害微生物的竞争抑制其繁殖8。 1.2 益生素的作用1.2.1 促进动物生长发育，提高饲料的利用率，改善动物产品质量益生素通过产生大量消化酶类，如丝状真菌中的木酶、曲霉、能产生蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶等各种消化酶（jin lzetal，2000）；或经肠内发酵直接产生丙氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和苏氨酸等，还可产生维生素等（刘林如等，1990），提供动物机体所需要营养物质；在动物胃肠道形成微酸性环境，激活内源酶活性，维持肠道内ph值，有利于维生素d、ca2+、fe2+等的消化吸收。董传发（1986）报道，牛育肥过程中添加活性酵母益生素可使生长速度提高38；在育肥期可显著增加胭体净肉率3.5，降低脂肪率2.28；dawson（1993）报道，酵母培养物可增加肉牛采食量，提高增重速度和饲料报酬；wallace等（1993）综合16个研究结果报道，饲喂酵母培养物可使肉牛增重速度提高7.5。添加真菌益生素可以减缓采食后瘤胃内环境稳定。苑文珠等（2001）报道，通过添加曲霉菌或酵母菌制剂提高乳酸的利用，使瘤胃ph值升高，减少反刍动物因饲喂高精料日粮引起的瘤胃ph值降低所造成瘤胃机能障碍。益生素可以维持和加强犊牛小肠上皮细胞胞质中细胞器的结构和功能，从而在亚细胞水平上发挥作用（那日苏等，2002），酵母可以通过改变微生物的作用增强对瘤胃内氨的利用和蛋白质合成，增加进入后段消化道的微生物蛋白质的数量和小肠中非氨态氮的吸收率，在消化道内促进植酸酶产生，提高非反刍动物对磷的吸收利用（pagen，1980）。大量试验研究结果表明：真菌益生素能够提高厌氧菌尤其是纤维分解菌数量。gunther（1989）报道，在奶牛日粮中添加10g活性酵母培养物，其标准奶产量从28.4kg/d huber（1989）报道，给奶牛饲喂酵母培养物，可使产奶量和标准奶产量分别提高1.2l和0.8l；dawson（1993）报道，酵母培养物用于奶牛可增加采食量，提高产奶量，改善乳成份；walace等（1993）综合18个研究结果报道，饲喂酵母培养物产奶量平均提高7.8；在能量、蛋白质酸性纤维和中性纤维均超过nrc标准的混合日粮中添加酵母，也表现出产奶量增加3.1，4校正乳提高9.3，乳脂率提高0.29的效果（diva等，1993）。metyes cc（2000）研究发现，猪、鸡血浆中赖氨酸、尿中赖氨酸和机体中赖氨酸的20来源于肠道中有益微生物的合成。光合细菌菌体营养丰富，蛋白质含量达6065，还含有维生素b、泛酸、叶酸等，能提高饲料效率、动物抗病能力及产蛋率。从血清总蛋白和血清尿素含量考虑，添加益生素可使仔猪血清的总蛋白含量明显升高，由对照组的平均50.3g/l升高到55.1g/l；而血清尿素的含量则由对照组的平均3.63mmol/l下降到2.80mmol/l，提高仔猪对蛋白质和氨基酸的利用（梁明振等，2002）。王梦亮（1999）研究发现，使用光合细菌添加剂，能提高鲤鱼肠道蛋白酶和淀粉酶活力，提高水产品产量8。1.2.2 增强动物免疫力，防止育龄动物腹泻益生素使良好的免疫激活剂，能有效地提高干扰素和巨噬细胞的活性，促进b细胞产生抗体和提高嗜菌细胞活性，其细胞壁上存在的肽聚糖，能刺激肠道免疫细胞而增加局部免疫抗体，从而提高动物抗病力。益生素中的双歧杆菌等菌株具有清除动物体内氧自由基的作用（ten，1987）。1973年bloksma用酸奶喂无菌动物，发现其体内免疫球蛋白g1、g2a、g2b的含量大为提高。潘康成等（1999）综述认为，动物口服益生菌后，可调整肠道菌群，使肠道微生态系统处于最佳平衡状态，活化肠粘膜内相关淋巴组织，使sigaa抗体分泌增强，提高免疫细胞再循环而活化全身免疫系统，从而增强机体免疫功能。inooka（1983）研究发现，纳豆芽孢杆菌能够增强雏鸡抗绵羊红细胞抗体的产生，并显著提高仔鸡脾脏t、b淋巴细胞比例，增强鸡的细胞免疫功能。刘克琳等（1994）报道，凝结芽孢杆菌试验组鸡的免疫器官生长发育较对照组迅速，血中t细胞值较对照组高。潘康成等（1997，1998）还发