传染病实践教学档

致病菌分离鉴定及生化特性分析 摘要：实验目的：从未知的菌液中分离鉴定出致病菌。实验原理：根据不同致 病菌的革兰氏染色、生化管实验、在培养基上生长特性来进行分离鉴定 实验方 法：将菌液在 TSA 培养基上进行画线接种培养，培养24h 后，观察菌落特征， 并且挑取不同的单个菌落进行革兰氏染色进行镜检，从中挑取一种致病菌接种 于生化管，培养24h 后观察结果。 实验结果：从菌液中分离并鉴定出了葡萄球 菌且菌液中可能含有大肠杆菌或着其他阴性杆菌。 关键词：致病菌 鉴定 分离 致病菌是指能引起疾病或能造成损伤的微生物，一般所说的致病菌指的是 病原微生物中的细菌。常见致病菌有沙门氏菌、志赞氏菌、金黄色葡萄球菌和 致泻大肠埃希氏菌，副溶血弧菌、李斯特菌等等。 1、材料与方法 1.1 实验材料 TSA 培养基（胰蛋白胨 3.4g、酵母提取物 1.2g、葡萄糖 0.5g、氯化钠 1g、大豆 胨 1g、琼脂粉 1g） 、器械（记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、 培养皿） 、药品（蒸馏水、结晶紫、碘液、95%酒精、品红、松柏油）生化试剂 （果糖、麦芽糖、蔗糖、蛋白胨、硝酸盐还原） 1.2 试验方法 1.2.1 制作 TSA 培养基 1.2.1.1 用天平称取胰蛋白胨 3.4g、酵母提取物 1.2g、葡萄糖 0.5g、氯化钠 1g、大豆胨 1g、琼脂粉 1g ，再用量筒量 200 毫升的蒸馏水，再将这些物质倒 入搪瓷杯中 1.2.1.2 称重：记下整个的重量 1.2.1.3 加热融化：将搪瓷杯置于电火炉上，边加热，边搅拌，直到沸腾，立 即将搪瓷杯取下 1.2.1.4、称重与补水：补水使重量与初次称重重量相同。 1.2.1.5、调节 PH：用 NaOH 溶液缓慢调节 PH，边滴入 NaOH 的同时边搅拌，并 不时用用 PH 试纸测定，使得 PH 值为 7.47.6 1.2.1.6 分装：将制作好的培养基分装平皿，每平皿 15-20ml，再包装待灭菌。 高压蒸汽灭菌 30 分钟. 1.2.2 致病菌的分离鉴定 取混合菌液病划线接种于 TSA 培养基，然后置 37温箱培养 24h，观察平 板细菌生长情况，根据菌落的形态特点，挑取了两个大小不同的典型黄色菌落 涂片，革兰氏染色，镜检。根据菌体形态及染色特性初步判定细菌类属，然后 挑取了镜检为革兰氏阳性杆菌所对应的菌落，接种生化管进行纯培养 24h。 2 实验结果 2.1 画线接种培养结果 培养基上有两种典型的菌落，分别是淡黄色小菌落，圆形、光滑中央隆起， 直径约 1-2mm 和黄色、圆形、光滑中央隆起的菌落，直径约 3-4mm。另外培养 基上还有一些成片的菌落，和不典型的菌落。 （培养结果见图一） 2.2 镜检结果 挑取的淡黄色小菌落进行革兰氏染色结果：红紫色的球菌，堆积呈葡萄串 状、单个、短链的革兰氏阳性球菌。 （见图二） ；挑取的黄色大菌落进行革兰氏 染色结果：红色的革兰氏阴性杆菌(见图三)。 2.3 生化结果 生化结果 生化管 产酸产气结果 蛋白胨 - 麦芽糖 + 果糖 + 蔗糖 + 硝酸盐还原 + + 表示阳性，且未产气； - 表示阴性 3 结果分析 3.1 大肠杆菌为阴性杆菌，革氏染色法为红色，其为杆状，因此本实验混合菌 液中可能含有大肠杆菌或者其他的阴性杆菌，若要进行进一步确定，需要做生 化实验或者 PCR 法进行分析鉴定。 3.2 葡萄球菌为革兰氏阳性菌，染色染色镜检结果应为蓝色，堆聚成葡萄串状， 葡萄球菌能发酵麦芽糖、果糖、蔗糖产酸而不产气，能利用硝酸盐，不能利用 蛋白胨。本实验镜检结果和生化结果与葡萄球菌特性大致一致，说明混合菌液 中含有葡萄球菌，染色镜检结果球菌是紫红色的，可能是因为试剂问题造成的。 3.3 由于实验材料的限制，混合菌液中具体含有那些菌，我们还不能 100%确定， 若要确定其具体