人类免疫缺陷病毒抗体

湖南省职业病防治院 作业指导书 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法） 文件编号 版 号：第 2 版 编 写：李毅刚 审 核： 批 准： 2011 年 月 日 200 年 月 日 200 年 月 日 修改记录 修改页码 修 改 内 容 修改人 批准人 生效日期 湖南省职业病防治院作业指导书 文件编号： 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法） 版 号：第 1 版 页码 1/2 1、目的 用于临床人类免疫缺陷病毒感染的辅助诊断。 2、范围 适用于献血员筛查与临床病例。 3、职责 检测人员按照本规程进行检测操作。 4、原理 采用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒“1”型和“2”型（HIV-1/HIV-2）抗 原包被的微孔板和酶标记的 HIV-1/HIV-2 抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原 理检测人血清或血浆中的 HIV-1 和 HIV-2 抗体。 5、样本要求 5.1仅限于检测人体血清或血浆。 5.2常规方法采集。 5.3血清：采血后，室温放置1-2小时，待血液凝固，再于3000转/分钟离心15分钟。 5.4血浆：采血后，样品与抗凝剂反复轻摇混匀，再3000转/分钟离心15分钟。 5.5如果样品没有在8小时内测定，应将其保存于2-8。如果样品不能在7天内测定， 应将血清或血浆与血细胞分离， -20保存，避免反复冻融。 6分析系统 6.1 分析仪器：Thermo Mk3 型酶标仪，检测波长 450nm，参考波长 630nm。 6.2 37恒温箱。 6.3 振荡器用于样品、试剂的混匀。 6.4 微量加样枪。 6.5 试剂准备： 试剂盒于冰箱保存，使用前应取出置37。 取试剂盒内洗涤液用蒸馏水作25倍稀释，置洗瓶中备用。 6.6 质控试剂：-20保存，溶解后随试剂一起冷藏，每天随样品一起检测并保存质控 结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。 7、分析步骤 7.1 样品编号：从 6 号开始编号。 7.2 设阴性对照 3 孔，Anti-HIV-1 阳性对照 1 孔，Anti-HIV-2 阳性对照 1 孔，分别加入阴、 阳对照各 50 微升。 7.3 每个标本待测孔加入标本血清 50 微升，充分混匀，封板，置 37孵育 60 分钟。 7.4 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置 3060 秒，甩干，重复 6 次后拍 干。 7.5 每孔加酶标工作液 50 微升，充分混匀，封板，置 37孵育 30 分钟。 7.6 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置 3060 秒，甩干，重复 6 次后拍 干。 7.7 每孔加显色剂 A 液，显色剂 B 液各 50 微升，充分混匀，封板，置 37孵育 10 分钟。 7.8 每孔加入终止液 50 微升，混匀。 7.9 选取相应的程序号，用酶标仪双波长比色。 8、计算 Cutoff值=阴性对照平均A值+0.15。 9、参照区间 9.1 阴性对照A值应0.12 9.2 Anti-HIV-1阳性对照A值应0.8 9.3 Anti-HIV-2阳性对照A值应0.8 10.临床意义 样品A值临界值为HIV抗体阳性 样品A值临界值为HIV抗体阴性 11.注意事项 11.1 从冷藏环境中取出试剂盒应置 37平衡 30 分钟后方可使用，余者应按前述方法保存 和使用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡 30 分钟后再行测试。 11.2 使用前试剂应摇匀。 11.3 须确保样品加样量准确，如果加样量不准确，可能会导致错误的结果，建议使用微量 移液器加所有组份；用滴瓶滴加时，应先弃去 12 滴，垂直匀速地滴加。避免在加样过程 中，将液体接触到或溅到微孔边缘上。 11.4 封片不能重复使用。 11.5 结果判断须在反应终止后 10 分钟内完成。 11.6 不同批号的试剂不可混用。 11.7 本试剂盒应视为有传染物质，请按传染病实验室检查规程处理。 12.支持性文件 12.1 全国临床检验操作规程（第 3 版） 12.2 刘锡光，祁自柏等，病