常用培养基配制

常用培养基 LB 培养基 /升 终 1 X 浓度 胰蛋白胨 10 g 1.0% (w/v) 酵母抽提物 5 g 0.5% (w/v) NaCl 10 g 1.0% (w/v) H2O 至 1 升 调节 pH 值至 7.0 低盐 LB 培养基 /升 终 1 X 浓度 胰蛋白胨 10 g 1.0% (w/v) 酵母抽提物 5 g 0.5% (w/v) NaCl 10 g 0.5% (w/v) H2O 至 1 升 调节 pH 值至 7.0 Terrific Broth 培养基 /升 终 1 X 浓度 胰蛋白胨 12 g 1.2% (w/v) 酵母抽提物 24 g 2.4% (w/v) 甘油 4 g 0.4% (w/v) 加 H2O 至 900 ml 灭菌，冷却至 60C 后加入 100 ml 过滤灭菌的 10X TB 磷酸盐 (0.17 M KH 2PO4, 0.72 M K2HPO4) SOB 培养基 /升 终 1 X 浓度 胰蛋白胨 20 g 2.0% (w/v) 酵母抽提物 5 g 0.5% (w/v) NaCl 0.5 g 0.05% (w/v) 250 mM KCl 10 ml 2.5 mM H2O 至 900 ml 调节 pH 值至 7.0，加 H2O 至 990 ml 灭菌、冷却至室温。使用前加入 10 ml 灭菌的 1 M MgCl2 溶液 10 mM SOC 培养基 SOB 培养基(1 升)加入 20 ml 过滤灭菌的 1 M 葡萄糖 M9 基本培养基 /升 终 1 X 浓度 5X M9 salts 200 ml 灭菌 H2O 至 1 升 1 M MgSO4 1 ml 1 mM 20% 葡萄糖 10 ml 0.2 (w/v) 1 M CaCl2 0.1 ml 0.1 mM 5X M9 Salts /升 终 1 X 浓度 Na2HPO4x7H2O 64 g 47.8 mM KH2PO4 15 g 22 mM NaCl 2.5 g 8.6 mM NH4 5 g 18.7 mM 添加剂 /升 终 1 X 浓度 抗生素(如果需要) 氨苄青霉素 50 g/ml 氯霉素 20 g/ml 卡那霉素 30 g/ml 四环素 12 g/ml 半乳糖苷(如果需要) X-Gal 20 g/ml IPTG 0.1 mM 培养基含有琼脂或琼脂糖 琼脂(平板) 15 g 1.5% (w/v) 琼脂(软性琼脂) 7 g 0.7% (w/v) 琼脂糖(平板) 15 g 1.5% (w/v) 琼脂糖(软性琼脂糖) 7 g 0.7% (w/v) 参考文献 1. Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2. Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用储存液 10 M 醋酸铵 醋酸铵 385.4 g H2O 至 500 ml 1 M CaCl2 CaCl2x6H2O 219.1 g H2O 至 1 升 100X Denhardt 溶液 终浓度 Ficoll 400 10 g 0.02% (w/v) 聚乙烯吡咯烷酮 10 g 0.02% (w/v) 牛血清白蛋白 10 g 0.02% (w/v) H2O 至 500 ml 过滤灭菌后分装(25 ml)，-20C 保存 0.5 M EDTA (乙二胺四乙酸) (pH 8.0) Na2EDTAx2H2O 186.1 g H2O 至 700 ml 10 M NaOH (50 ml)调节 pH 值至 8.0 H2O 至 1 升 10 mg/ml 溴化乙锭 溴化乙锭 0.2 g H2O 至 20 ml 充分混匀后 4C 黑暗保存 警告: 溴化乙锭是一种突变剂。使用溴化乙锭溶液时需带手套；称量其粉末时需带面具。 1 M KCl KCl 74.6 g H2O 至 1 升 1 M MgCl2 MgCl2x6H2O 20.3 g H2O 至 100 ml 1 M MgSO4 MgSO4x7H2O 24.6 g H2O 至 100 ml 5 M NaCl NaCl 292.2 g H2O 至 1 升 10 M NaOH NaOH 400.0 g H2O 至 1 升 1 M Tris-HCl 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 Tri base 121.1 g H2O 至 800 ml 用于浓缩的 HCl 调节至所需的 pH 值 混合后加 H2O 至 1 升 3 M 醋酸钠 (pH 5.2 或 7.0) (2) 醋酸钠 x 3H 2O 401.1 g H2O 至 800 ml 用醋酸调节 pH 值至 7.0 或用冰醋酸调节 pH 值 5.2 H2O 至 1 升 参考文献 1. Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2. Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缓冲液 10X 磷酸盐缓冲液(储存液) (PBS) /升 终 1 X 浓度 NaCl 80.0 g 137 mM KCl 2.0 g 2.7 mM Na2HPO4 14.4 g 100 mM KH2PO4 2.7 g 2 mM H2O 至 800 ml HCl 至 pH 7.4 H2O 至 1 升 20X SSC /升 终 1 X 浓度 NaCl 175.3 g 150 mM Na3citrate x H2O 88.2 g 15 mM H2O 至 800 ml 1M HCl 调节 pH 值至 7.0 H2O 至 1 升 20X SSPE /升 终 1 X 浓度 NaCl 175.3 g 150 mM NaH2PO4xH2O 27.6 g 10 mM Na2EDTA 7.4 g 10 mM H2O 至 800 ml 10 M NaOH 调节 pH 值至 7.4 H2O 至 1 升 5X Tris-甘氨酸, Native 电泳缓冲液 /升 终 1 X 浓度 Tri 碱 15.1 g 25 mM 甘氨酸 72.0 g 192 mM H2O 至 1 升 稀释溶液的 pH 至 8.3 5X Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液 /升 终 1 X 浓度 Tri 碱 15.1 g 25 mM 甘氨酸 72.0 g 192 mM SDS 5.0 g 0.1% (w/v) H2O 至 1 升 稀释溶液的 pH 至 8.3 5X Tris-三(羟甲基)甲基甘氨酸-SDS 电泳缓冲液 /升 终 1 X 浓度 Tri 碱 121.1 g 0.1 M Tricine 179.2 g 0.1 M SDS 10.0 g 0.1% (w/v) H2O 至 1 升 稀释溶液的 pH 至 8.3 50X TAE (Tris-醋酸-EDTA)电泳缓冲液 /升 终 1 X 浓度 Tri 碱 242.0 g 40 mM 冰醋酸 57.1 ml 20 mM 0.5 M EDTA (pH 8.0) 100 ml 2% mM H2O 至 1 升 稀释溶液的 pH 大约为8.5 10X TBE (Tris-硼酸-EDTA)电泳缓冲液 /升 终 1 X 浓度 Tri 碱 108.0 g 90 mM 硼酸 55.0 g 90 mM 0.5 M EDTA (pH 8.0) 40 ml 2% mM H2O 至 1 升 10X TPE (Tris-磷酸-EDTA)电泳缓冲液 /升 终 1 X 浓度 Tri 碱 108.0 g 90 mM 磷酸(85%) 15.5 ml 23 mM 0.5 M EDTA (pH 8.0) 40 ml 2% mM H2O 至 1 升 TE (Tris-EDTA) 缓冲液 pH 7.4, 7.6 或 8.0 /升 终 1 X 浓度 1 M Tri, pH 7.4, 7.6, 8.0 10.0 ml 10 mM 0.5 M EDTA (pH 8.0) 2.0 ml 1 mM H2O 至 1 升 参考文献 1. Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2. Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缩写 A 腺嘌呤或腺苷；丙氨酸单字母代码 A260 260 nm 吸光值 ACES N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸 Ad-2 腺病毒-2 ADA N-(2-乙酰氨基)-2-亚氨基二乙酸 ADP 腺苷 5-二磷酸 AMP 腺苷单磷酸 AMV 禽成髓细胞瘤病毒 AP 碱性磷酸酶 APS 过硫酸铵 aRNA 反义 RNA ATP 腺苷 5-三磷酸 BCIP 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸 BES N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸 BGG 牛血清球蛋白 BICINE N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸 Bio-dNTP 生物素-脱氧核苷三磷酸 BME beta-巯基乙醇；2-巯基乙醇 bp 碱基对 Bq 贝可 BSA 牛血清白蛋白 B/W 蓝/白克隆 C 胞嘧啶或胞苷；半胱氨酸单字母代码 CA 酪蛋白氨基酸 CAPS N-环已胺-3-丙磺酸 cDNA 互补脱氧核糖核酸 CEU 粘性末端连接单位 Ci 居里 CIAP 小牛肠碱性磷酸酶 CMP c 胞苷单磷酸 cpm 次/分钟 CTP 胞苷 5-三磷酸 Da 道尔顿 dAMP 脱氧腺苷单磷酸 dATP 脱氧腺苷三磷酸 dCTP 脱氧胞苷三磷酸 ddATP 双脱氧腺苷三磷酸 ddCTP 双脱氧胞苷三磷酸 ddGTP 双脱氧鸟苷三磷酸 ddNTP 双脱氧核苷三磷酸 ddTTP 双脱氧胸苷三磷酸 DE-81 Whatman二乙基胺基乙基纤维素纸 DEPC 焦碳酸二乙酯 DIG 地高辛 dITP 脱氧肌苷三磷酸 dGTP 脱氧鸟苷三磷酸 DMSO 二甲亚砜 DNA 脱氧核糖核酸 DNase 脱氧核糖核酸酶 dNMP 脱氧核糖核苷单磷酸 dNTP 脱氧核糖核苷三磷酸 dpm 分解量/分钟 ds 双链 DTT 二硫苏糖醇 dTTP 脱氧胸苷三磷酸 dUTP 脱氧尿苷三磷酸 EDTA 乙二胺四乙酸 EGTA 乙二醇-双-(2-氨基乙基)四乙酸 ELISA 酶联免疫吸附实验 EMBL 欧洲分子生物学实验室 EMSA 凝胶电泳迁移分析 ENDO 内切脱氧核糖核酸酶分析 endo 内切核酸酶 exo 外切核酸酶 EXO 5和 3- 外切脱氧核糖核酸酶分析 FOA (5-FOA) 5-氟乳清酸 G 鸟嘌呤或鸟苷；甘氨酸的单字母代码 Gal D-半乳糖 GMP 鸟苷单磷酸 GMPD 糖基酶介导的多态性检测 GUS beta-D-葡萄糖醛酸酶 GTP 鸟苷 5-三磷酸 GQ 遗传质量合格 HC 高浓度 HEPES N-(2-羟乙基)哌嗪-N-2-乙磺酸 HRP 辣根过氧化物酶 HPLC 高效液相色谱 IEF 等电聚焦 IPTG 异丙基-beta-D-硫代半乳糖苷 kb 千碱基 kDa 千道尔顿 LAMP 环介导恒温扩增 LB Luria Bertani 培养基 LC 低浓度 LE 低电渗 LM 低熔点 LO 标记的核苷酸 MCS 多克隆位点 MES 2-码啉乙磺酸 MDA 多重置换扩增 M-MuLV 小鼠肉瘤病毒 MOPS 3-吗啉丙磺酸 mRNA 信使核糖核酸 MW 分子量 NAD 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 NADH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原型 NADP 烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸 NADPH 烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸，还原型 NBT 硝基蓝四氮唑 NDP 核苷二磷酸 NMP 核糖核苷单磷酸 NR 不推荐 NP-40 Nonidet P-40(去污剂) nt 核苷酸 NTC 无模板对照 NTP 核苷三磷酸 oligo(A) 寡聚腺苷酸 oligo(dT) 寡聚脱氧胸苷酸 OMP 乳清苷(一磷)酸 Pi 无机磷酸 PAAG 聚丙烯酰胺凝胶 PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS 磷酸盐缓冲液 PCR 聚合酶链式反应 PEI 聚乙烯亚胺 PEG 聚乙二醇 PIPES 哌嗪-1,4-二乙磺酸 PNK 多聚核苷激酶 pNPP 对硝基苯磷酸 poly(A) 多聚腺苷酸 poly(A)+ 多聚腺苷酸(mRNA) poly(dA-dT) 多聚(脱氧腺苷酸 脱氧胸苷酸) poly(dT) 多聚脱氧胸苷酸 PPi 无机焦磷酸盐 PVDF 聚偏二氟乙烯 QCA 质量控制分析 qPCR 定量聚合酶链式反应 RACE 快速扩增 cDNA 末端 RCA 滚环复制 RDA 随机置换扩增 RE 限制酶 R