连接sels基因的携p―选择素单抗靶向微泡结合超声治疗早期糖尿病肾病的实验研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 连接 SelS 基因的携 P选择素单抗 靶向微泡结合超声治疗早期糖尿病 肾病的实验研究 摘要 目的 研究B 接 SelS 基 因的携 P-选择素单抗靶向微泡结合超声 治疗早期糖尿病肾病的效果。 方法 选 取 SPF 级 60 只雄性 SD 大鼠为研究对 象，制备 2 型糖尿病大鼠模型后随机分 为对照组、单纯 SelS 组（SelS 组） 、 SMBp 组、超声+SMBp 组（UE+SMBp 组） ，各 15 只。比较四组大鼠摄食量、 摄水量、尿量、体重、空腹血糖、24 h 尿蛋白、2 微球蛋白、血尿生化指标及 P-选择素、Ang、TGF-1、SelS 水平。 结果 四组大鼠治疗前一般情况比较， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 差异无统计学意义（P 0.05） ；四组治 疗后空腹血糖、24 h 尿蛋白、2 微球蛋 白水平、血尿生化指标及 P-选择素、 Ang、TGF-1、SelS 水平差异有统计 学意义（P 中国论文网 /6/view- 12954811.htm 关键词 P-选择素；单抗靶向微 泡；糖尿病肾病 中图分类号 R587 文献标识码 A 文章编号 1673-7210（2017） 11（a）-0015-05 Experimental study of monoclonal antibody targeted microbubble carrying P- selectin and connecting SelS gene in combination with ultrasound in treating early diabetic nephropathy WANG Yan1 LI Jing2 HUANG Ruizhu3 HUANG Ping1 HUANG Yuyu2 1.Department of Geriatric Endocrinology， Guangzhou No.1 Peoples Hospital， Guangdong -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 Province， Guangzhou 510180， China； 2.Department of Geriatric Nephrology， Guangzhou No.1 Peoples Hospital， Guangdong Province， Guangzhou 510180， China； 3.Department of Internal Medicine， 458th Hospital of Guangzhou Military Area， Guangdong Province， Guangzhou 510180， China Abstract Objective To study the effect of monoclonal antibody targeted microbubble carrying P-selectin and connecting SelS gene in combination with ultrasound in treating early diabetic nephropathy. Methods A total of 60 specific pathogen free SD male rats were selected as the research objects to build type 2 diabetes rat models. Then the rat models were randomly divided into the control group， SelS group， SMBp group and UE+SMBp group， each group had 15 rats. The food intake， water -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 intake， urine volume， body weight， fasting blood-glucose， 24 h urine protein， 2 microglobulin， blood and urine biochemical indexes， P-selectin， Ang ， TGF-1 and SelS levels of rats in the four groups were compared. Results Before treatment， the differences in general conditions of rats among the four groups were not statistically significant （P 0.05）. The differences in fasting blood-glucose， 24 h urine protein， 2 microglobulin level， blood and urine biochemical indexes， P-selectin， Ang ， TGF-1 and SelS levels were statistically significant after treatment （P 30 mg 则表明 2 型糖尿病肾病模型制备 成功7。如果检测结果未满足上述条件， 可继续以高糖高脂饲料喂养，直至符合 条件为止。在所有糖尿病肾病大鼠模型 均制备成功后采用随机数字表法分为对 照组、SelS 组、 SMBp 组、UE+SMBp -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 组，各 15 只。 1.3.1.4 超声微泡的制备 将包括 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 2000- 生物素、二棕榈酰磷脂酰胆碱、聚乙二 醇 4000、普洛沙姆-188 等在内的脂质 材料水溶于 75蒸馏水中，通全氟丙烷 气体，超声振荡至乳白色液体后静置， 去除下清液后加入等量的蒸馏水并将未 结合的脂质清除，重复 4 次后加入抗生 蛋白链菌素，静置条件下去除下清液 2 次后制备成为 MB 微泡8-9。向制备好 的 MB 微泡中加入生物素化抗大鼠 P-选 择素单克隆抗体，静置过夜后去除下清 液 2 次，置于 4冰箱中待用10。将 SelS 质粒经由感受态大肠埃希菌予以转 化、扩增、内毒素质粒提取，通过 XhoI 内切酶以及 EcoRI 内切酶实施酶 切11。选取制备好的 MBp 微泡 3 mL 以及浓度为 1.5 g/L 的 SelS 基因 1 mL 在 4条件下混匀并静置 2 h，促使 SelS 基因充分黏附于 MBp 微泡外壳， 从而制备成为 SMBp 微泡12 。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 1.3.2 实验方法 经大鼠尾静脉分别注入同等剂量 （1.5 mL/100 g）生理盐水（对照组） 、 SelS 微泡（SelS 组） 、SMBp 微泡 （SMBp 组和 UE+SMBp 组） 。除了 UE+SMBp 组外，其余三组均利用 GCZZ 型基因转染治疗仪对大鼠双侧肾 组织实施照射，辐照剂量为 2 W/cm2， 连续脉冲持续时间为 3 min。四组均给 予 30 d 治疗，随后观察治疗效果13。 1.4 观察指标 包括摄食量、摄水量、尿量、体 重；空腹血糖、24 h 尿蛋白、2 微球蛋 白；血尿生化指标；P-选择素、血管紧 张素（Ang） 、转化生长因子 1（TGF-1） 、SelS 水平。其中，空腹 血糖采用罗康全优越型血糖仪进行测定； 24 h 尿蛋白、2 微球蛋白、血尿生化指 标（尿素氮、肌酐、胆固醇、三酰甘油、 糖化血红蛋白、血清胱抑素）采用 AU4800 全自动生化分析仪予以测定； 采用 ELISA 法检测大鼠血清 P-选择素、 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 Ang、TGF-1、SelS 水平。 1.5 统计学方法 采用 SPSS 17.0 统计学软件进行 数据分析，计量资料数据用均数标准 差（xs）表示，多组间比较采用单因 素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验，以 P 0.05） ；治疗后在摄食量、 摄水量、尿量比较上，对照组SelS 组 SMBp 组UE+SMBp 组，在体重比较上， 对照组 0.05） ；治疗后四组空腹血糖、 24 h 尿蛋白、2 微球蛋白比较，对照组 SelS 组SMBp 组UE+SMBp 组，差异 有统计学意义（P 0.05） ；治疗后尿素 氮、肌酐、胆固醇、三酰甘油水平，对 照组 SelS 组 SMBp 组UE+SMBp 组， 差异有统计学意义（P 0.05） ，治疗后 P-选择素、Ang、TGF-1、SelS 水平， 对照组SelS 组SMBp 组UE+SMBp 组，差异有统计学意义（P 0.05） 。见 表 4。 3 讨论 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 由于糖尿病肾病存在着非常复杂 的代谢紊乱问题，一旦病情未能够得到 有效控制而发展至终末阶段，则其治疗 难度呈几何增长。所以及早诊断、及早 有效治疗成为阻断病情持续恶化的关键 所在14-15。随着医学技术的快速发展， 靶向超声分子技术日益成熟，通过对普 通的超声微泡进行制备处理，将能够直 接作用于病变组织的特异配体与之结合， 经由静脉注射后能够充分利用靶向作用 来促使特定分子长时间黏附、聚集于病 变部位，再辅之以超声检查，形成”主 动性靶向超声分子成像”16。该手段能 够在病症并未产生特异性临床表现之前 提示组织或器官受损程度，继而为临床 早期干预治疗工作开展提供指导依据， 是其他传统检测手段以及影像学技术所 无法比拟的。尤其是主动性靶向超声分 子技术全程无创无痛，无论是敏感性还 是特异性均处于较高水平，糖尿病肾病 临床诊治工作中具有着广阔的潜能，日 益引起医学界的重视与关注。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 国外医学研究表明，超声微泡除 了能够为诊断工作提供帮助外，还可以 作为基因或者是药物的载体，将各种治 疗性药物直接输送至病变部位并采用高 能量的超声波将微泡击碎，其所携带的 药物分子在靶区定点释放，大幅提高病 变部位或组织周围血药浓度，使得治疗 药物作用时间更加持久17。此外，此 种超声靶向击破微泡技术已经在心血管 系统的应用中取得了理想的效果，进一 步证实了其有效性及实用性18-19。然 而，时至今日尚未有将其应用在糖尿病 肾病治疗工作中的报道，所以对此方面 内容加以分析和研究，无疑具有重要的 研究r 值和现实意义。 本次研究通过动物实验证实，治 疗前后大鼠摄食量、摄水量、尿量、体 重存在显著差异，具体表现为模型制备 后 2 型糖尿病肾病大鼠“ 三多一少 ”特征 明显。比较空腹血糖、24 h 尿蛋白、2 微球蛋白、尿素氮、肌酐、胆固醇、三 酰甘油、糖化血红蛋白、血清胱抑素、 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 P-选择素、Ang、TGF-1、SelS 水平， UE+SMBp 组取得的治疗效果优于其他 三组，组间差异有统计学意义（P 0.05） 。由上述研究结果表明，超声靶向 击破微泡技术在此次动物试验中取得了 理想的治疗效果，为糖尿病肾病治疗提 供了一种全新的思路和手段，尤其是该 治疗方案基因药物在靶向组织处释放过 程中具有时间和空间的可控性，充分利 用了微泡在超声作用下产生的“声孔效 应”，实现了基因药物在多种生物膜之 间的跨膜传递，进一步提高了基因药物 的治疗效果20 。提示超声微泡介导基 因治疗方案在糖尿病肾病临床治疗工