实践操作技能题库-实验室-9道

实践操作技能题库-实验室 一、细菌革兰氏染色（50 分） 操作要点： （一）能够制作生理盐水涂片与固定（10 分） （二）能够对初染、媒染、脱色、复染四个步骤正确操作（20 分） （三）能够熟练使用显微镜和观察细菌形态，着重评估其染色 效果。 （20 分） 二、沙门菌增菌与分离培养（50 分） 操作要点： （一）对沙门菌的实验室检测的基本方法与流程、样本处理与 所用试剂有一定了解。 （10 分） （二）能够正确处理粪便样本与增菌操作（20 分） （三）能够正确使用沙门科玛嘉平板进行划线分离与培养，能 够分离单菌落与识别沙门菌菌落形态。 （20 分） 三、志贺氏菌血清学凝集试验（50 分） 操作要点： （一）对志贺菌的基本血清型别与玻片凝集实验有一定了解。 （10 分） （二）能够正确使用分型血清进行玻片凝集操作（20 分） （三）能够准确判定凝集现象和判定志贺菌血清型别（20 分） 四、霍乱弧菌增菌与分离培养（50 分） （一）对霍乱弧菌的实验室检测的基本方法与流程、样本处理 与所用试剂有一定了解。 （10 分） （二）能够正确处理粪便样本与增菌操作（20 分） （三）能够正确使用四号琼脂/TCBS 琼脂进行划线分离与培养， 能够分离单菌落与识别霍乱弧菌菌落形态。 （20 分） 五、沙门菌药物敏感性测试（纸片法） （50 分） （一）对细菌药物敏感性实验的基本方法与流程、样本处理与 所用试剂有一定了解。 （10 分） （二）能够正确制备菌悬液与涂布 MH 平板（15 分） （三）能够正确装载药敏纸片和使用纸片分配器压盖平板（15 分） （四）能够正确测量抑菌圈直径和判定结果（10 分） 六、请回答实验室检测布氏杆菌的方法，并对下列血清标本进 行布病病原检测（50 分） 。 答：有两种：虎红平板试验可以对布病进行初筛，适用于大样 本量检测，试管凝集法 1:100（+）以上可以对布病进行确诊（10 分） 。 虎红平板试验（共 15 分）：实验前先将虎红试剂摇匀（ 2 分） ， 准备玻璃平板一块，取虎红试剂 30ul，待检血清 30ul，枪头混匀， 5min 内观察有无凝集现象。要求操作者对标本检测结果进行判别 （13 分） 。 试管凝集试验（25 分）：取硬玻璃管 3-4 个，对血清分别进行 1:25、 1:50、1:100、1:200 稀释，每管中加入等体积的布病抗原， 摇匀，放入 37C 温箱中放置 18-24h，观察试管凝集现象及清澈度， 对结果进行判定。 3 七、请对下列标本进行乙脑 IgM 的检测（50 分） 。 答：（一）首先将乙脑试剂盒取出室温平衡 30 分钟；将洗液按 照说明书进行配制（5 分） （二）血清标本进行 1:100 稀释（5 分） ，脑脊液标本 1:10 稀 释（5 分） 。 （三）取出试剂盒中酶联管，设置空白对照、阴性对照、阳性 对照，进行标记。加入标本 50ul，空白对照不加，阴性对照和阳性 对照各 50ul 入相应标记孔，用膜封板，37C 温箱放置 1h。 （15 分） （四）洗板 4 次，甩干！在各孔中加入酶标抗原 50ul，用膜封 板，37C 温箱放置 1h。 （10 分） （五）洗板 4 次，甩干！在孔中分别加入显色液 A 和 B 各 50ul，用膜封板，37C 温箱放置 15min，加入终止液， 15min 内判 读结果。 （10 分） 八、请对下列手足口病标本进行病原检测（50 分） 。 答：（一）标本处理过程（15 分）： 1.粪便标本处理（10 分）：请操作者说出需要准备哪些耗材和 试剂（氯仿、完全 PBS、1.5mlEP 管，玻璃珠，电动加样器，加样 枪，不同规格的 tip 头，离心机） 。取 1.5mlEP 管一个，完全 PBS 0.9ml 和氯仿 0.1ml，放入 3-5 个玻璃珠，取绿豆大小粪便放入 EP 管，振荡器剧烈震荡 30S，6000rpm/min 离心 15min，取上清备用， 进行提取病毒 RNA。 2.咽拭子标本处理（5 分）：首先将咽拭子标本剧烈震荡 20min，3500rpm/min 离心 15min 钟，取上清备用，进行提取 RNA。 （二）核酸提取（5 分）：给操作者提供病毒 RNA 提取试剂盒， 请操作者针对说明书，对操作步骤进行叙述。 （三）RT-PCR 配制：提供 EV71 荧光 RT-PCR 试剂盒，请操 作者配制 EV71 RT-PCR 体系（10 分） ，并对荧光 RT-PCR 仪器进 行程序和模板设置（程序设置 5 分，模板设置 5 分） 。 （四）判读结果（10 分）：调出日常手足口病双通道试剂盒检 测结果，请操作者进行操作，对结果进行判读。 九、请对下列禽流感标本进行病原检测（50 分） 。 答：（一）禽流感标本前处理（10 分）：对棉签进行挤压，或 震荡器剧烈震荡 20 分，离心机 15min，取上清进行核酸提取。 （二）核酸提取（10 分）：给操作者提供病毒 RNA 提取试剂 盒，请操作者针对说明书，对操作步骤进行叙述。 （三）RT-PCR 配制（20 分）：提供 EV71 荧光 RT-PCR 试剂 盒，请操作者配制 EV71 R