刘文武毕业幻灯片

吡那地尔联合硝酸甘油对兔缺血再灌注心肌保护作用的研究硕士研究生：刘文武责 任 导 师：马 宾研 究 背 景缺血再灌注损伤生活质量提高老年人口增加环境的改变缺血性心血管疾病发病率逐年升高，严重威胁人类的健康溶栓心脏移植PCICABG缩短组织缺血时间、尽快恢复血流缺血再灌注损伤缺 血 及 药 物 预 处 理深入保护缺血再灌注心肌、减轻其损伤缺血预处理提出及其初期研究1、 mitoKATPC； 2、热休克蛋白； 3、核因子 -KB； 4、 Na H 交换体； 5、 NO作用； 6、肌红蛋白作用；发现1、减轻心肌细胞的坏死、凋亡； 2、保护血管内皮细胞； 3、保护平滑肌细胞证实深入临床操作难度大、风险高设想通过药物根据 IPC机制而达到心肌保护作用探索证实安全性高、操作方便容易控制的心肌保护新途径思考何种药物效果佳及其单用还是联合试验选药及其设计多项研究表明mitoKATP可能是 IPC的共同终末途径吡那地尔：氰胍类mitoKATPC开放药大量实验证明， NO介导心肌保护发挥重要作用硝酸甘油：外源性增加机体的 NO含量设想单一药物预处理效果联合用药会否更佳材 料 与 方 法材料 -主要试剂、仪器 1、 吡那地尔： sigma公司 2、 硝酸甘油：山西康宝生物制品股份有限公司。 3、 SOD、 MDA、 CK、 NO和 LDH试剂盒均为南京建成生物技术公司提供。 4、 伊文思蓝 、 氯化三苯基四氮唑 BIOSHARP公司。 5、 小动物微型呼吸机：上海嘉鹏科技有限公司。 6、 MedLab生物信号采集处理系统：南京美易科技有限公司。 7、 超低温冰箱 海尔 DW-86L626型，温度调节范围： -20 -86 。 8、 隔水式恒温培养箱 上海一恒科技有限公司。 9、 离心机 Centrifuge 0406-1型 上海手术器械厂。 10、 721分光光度计：上海凤凰光学科仪有限公司。材料 -实验动物 家兔 50只，重量 30.5kg，雌雄不限，由蚌埠医学院实验动物中心提供。试验方法 -分组缺血 40分 钟 再灌注 150分 钟 I/R缺血 40分 钟 再灌注 150分 钟 SO输 注 NIT60分 钟 （ 100g/kg） 缺血 40分 钟 再灌注 150分 钟 NIT输 注 PIN30分 钟 （ 250g/kg） 缺血 40分 钟 再灌注 150分 钟 PIN输 注 NIT60分 钟 （ 100g/kg） +吡那地 尔 30分 钟 （ 250g/kg）缺血 40分 钟 再灌注 150分 钟 NIT+PINIR模型制作 家兔经耳缘静脉缓慢推注20%乌拉坦 5ml/kg，背部及四肢固定于兔板上，分离气管、切开后插管，连接小动物微型呼吸机行机械通气，频率设置为 50次 /分，潮气量为 10ml/kg，给予呼吸末正压通气，吸气与呼气之比为 1:2，压力 0.75-1.5kPa。经右颈总动脉切开置 22号导管至左心室，连接 40Kpa压力换能器监测血流动力学。四肢及胸部连接电极，监测胸导联及肢体导联心电图开胸前准备各时间段心电图表现A BC DE F上图：家兔在缺血再灌注不同时间段心电图变化表现（胸导联， 50min/s）（图 A：正常家兔心电图表现；图 B：结扎开始时心电图表现；图 C：结扎 40分钟心电图表现；图 D：再灌注 30分钟心电图表现；图 E：结扎 60分钟心电图表现；图 F：结扎 120分钟心电图表现）典型心室内压曲线开胸及冠脉结扎胸骨左缘第 4肋骨剪断打开胸腔分离心包暴露心脏左冠状动脉主干、左心耳根部（以下 2mm） 穿线寻找结扎观察心电图变化心电图 S-T段呈弓背样抬高明显 、结扎线远端心肌呈现紫绀为结扎成功标准成功心肌梗死面积测定实验结束后于冠脉 原结扎点胸骨左缘第 3肋骨剪断钝性分离 主动脉 周围组织暴露主动脉 ，并用血管钳将其夹闭原位结扎左心室注入1%伊文思蓝2ml心脏变蓝后将其取出，剔除心房及结缔组织PBS漂洗 干净纱布吸去水分 ，置于 -20 冰箱 30分钟心脏切片共约 7或 8片置于 1TTC缓冲液(pH=7.4)，在 37OC下染色 15min切片用 10%甲醛溶液固定后照相使用 IPP软件 处理缺血危险区占左心室的比例心肌梗死图形表现1、未缺血区 域为蓝色2、 危险区及梗死区为砖红色、灰白色或土黄色呈不规则、岛屿状分布。标本收集 1、各组分别再灌注即刻、 30min、 60min、 120min，从左侧股静脉抽取静脉血 2ml，静置后离心分离血清， -80冰箱保存备用。检测 SOD、 MDA、 NO、 CK、LDH，均严格按试剂说明书进行 2、 各组分别于再灌注后 30min、 60min、 90min、 150分钟采集心室发展峰压（ LVSP）等心室内压指标。 将其数据导入 excel便于实验结束后统计统计学处理 实验数据用 XS表示，采用随机区组设计的单因素方差分析，组间多重比较采用最小显著差法 (LSD-t)。P0.05为差异有统计学意义。实 验 结 果各组 LVSP的比较组别 LVSP(mmHg)T30 T60 T90 T150I/RSO54.1212.2110716.546.1611.5299.816.740.5511.2610117.0938.3312.76101.515.5PIN 67.211.53 59.111.56 56.999.68 60.77.36 NIT 71.010.29 63.210.89 60.57.15 63.412 PIN+NIT 78.412.9 7114.27 71.516.5 73.717.5 注：与 I/R比 0.05, 0.01,与 SO比 0.01,与 PIN 0.01 与 NIT 0.01。050100150200250300350T30 T60 T90 T150图 1 各组不同时间段 LVSP值比较LVSP值(mmHg)I/RSOPINNITNIT+PIN各组 LVEDP比较组别 LVEDP (mmHg)T30 T60 T90 T150I/R 6.511.33 13.793.84 20.714.43 22.594.78SO 5.31.77 5.81.14 6.181.94 6.42.41PIN 6.92.06 9.652.92 11.982.69 123.56 NIT 7.092.64 8.541.89 10.62.99 10.763.12 PIN+NIT 5.683.45 7.052.92 8.464.99 9.566.06注：与 I/R比 0.05, 0.01,与 SO比 0.01,与 PIN 0.01 与 NIT 0.01。0510152025T30 T60 T90 T150图 2 各组不同时间段 LVEDP值比较LVEDP值(mmHg)I/RSOPINNITNIT+PIN各组 +dp/dtmax比较组别 +dp/dtmax T30 T60 T120 T150I/R 2672.56401.39 2260.42386.93 1927.68382.08 1706.81430.07SO 4821.9635.17 4702.3703.2 4481.8723.2 4448.1764.97PIN 3179.15600.2 2865.64675 2607.86636 2501.1811.53 NIT 3377.31421.19 3063.3530.34 2806.6391.2 2726255.67 PIN+NIT 3634.5872.47 3442.1797.47 3258573.61 3007322.53 注：与 I/R比 0.05, 0.01,与 SO比 0.01,与 PIN 0.01 与 NIT 0.01。0100020003000400050006000T30 T60 T90 T150图 3 各组不同时间段 +dp/dtmax值比较+dp/dtmax值I/RSOPINNITNIT+PINHR组别 HR(次 /分 )T30 T60 T120 T150I/R 238.6226.28 215.8521.31 199.2420.11 177.7722.41SO 292.817.83 284.7813.7 281.9818.5 283.716.18PIN 249.215.69 235.5813.5 228.213.3 223.6420.2 NIT 265.4130.64 254.930.18 24127 235.930.85 PIN+NIT 274.526.55 265.923 256.528.75 252.2832.54注：与 I/R比 0.05, 0.01,与 SO比 0.01,与 PIN 0.01 与 NIT 0.01。050100150200250300350T30 T60 T120 T150图 4 各组不同时间段 HR值比较HR(次/分)I/RSOPINNITNIT+PIN各组心肌梗死面积的比较组别 样本数 危险区 /左心室I/R 10 (54.337.1)%SO 10 0NIT 10 (40.837.8)%PIN 10 (38.678.0)%NIT+PIN 10 (27.78.3)% CK组别 CK(U/L)T0 T30 T60 T120I/R 1865.68229.23 2534.6424.38 3008.2304.87 3805.1454