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文档简介
1、专题3 植物的组织培养技术,课题目标 说明植物组织培养的基本原理,学习植物组织培养的基本技术,进行菊花或其他植物的组织培养。 课题重点与难点 课题重点:植物组织培养过程中使用的无菌技术。 课题难点:植物组织培养过程中使用的无菌技术。,(一)植物组织培养的基本过程 知识要点: 1.细胞分化的概念; 2.离体植物细胞的脱分化和再分化。 (二)影响植物组织培养的因素 知识要点: 影响植物组织培养的因素有培养基配制、外植体的选取、消毒、接种、培养、移栽和栽培等。,快速繁殖,一、植物组织培养技术有何意义?,我国用花药培养法先后培育出优质高产的经济作物、粮食和蔬菜等新品种,广泛应用于果树和花卉的快速繁殖。
2、 借助于组织培养生产人工种子,解决某些作物品种繁殖力差、结子困难或发芽率低等问题。,生产药物、食品添加剂、香料、色素、和杀虫剂等。例如:紫杉醇,生物碱、紫草素等。 转基因植物的培育 植物去病毒,二、细胞的全能性,、所谓细胞全能性,是指细胞如受精卵一样,具有经过分裂、分化形成各种组织和细胞,最终发育成一个完整的个体的能力;细胞核全能性则指细胞虽不具备发育成一个完整个体的能力,但是当将其细胞核通过核移植等方法导入去核的卵细胞或受精卵,经过受体卵细胞质的诱导去分化、体细胞核和受体卵细胞质共同作用,依然可能发育成一个完整的个体。因此,细胞全能性和细胞核全能性是两个完全不同的概念,不能混为一谈。细胞核的
3、全能性并不代表细胞具有全能性。 、植物体细胞具有全能性 低等动物的细胞和高等动物早期胚胎细胞具有发育全能性 高等动物的体细胞核具有发育全能性 高等动物的体细胞是否具有全能性?一个还没有最后结论的话题,1、植物学家将胡萝卜的韧皮部细胞分离出来,将单个细胞放在特定的培养基中培养,获得了许多完整的植株,这些植株的特点是( ) .彼此性状极为相似.都是单倍体植株 .植株的变异频率较高.都是纯合体植株,2、根据分裂潜能,干细胞可分为全能干细胞(可发育成完整的个体)、多能干细胞(可发育成多种组织和器官)和专能干细胞(发育成专门的组织和器官),则这些细胞在个体发育中的分化顺序是( ) .全能专能多能 .全能
4、多能专能 .多能全能专能 .专能全能多能,练 习,三、植物组织培养的基本过程,什么叫细胞分化、脱(去)分化、再分化? 如何控制细胞的脱分化与去分化?,四、影响植物组织培养的因素,1、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同 2、培养基的配制(MS培养基) 大量元素:C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物:甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素:生长素、细胞分裂素、赤霉素等 3、不同植物激素使用顺序和使用量,4、消毒 在培养的整个过程中,都需要是一个无菌环境原因: 5、pH、温度、光照 菊花:
5、pH=5.8 温度控制在1822 每日光照12h,植物组织培养用的培养基,含有植物生长发育所需要的各种营养物质,这些营养物质同样为细菌等微小的生物提供了适合的营养。在这种培养基上,细菌等微小的生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力,它们比植物细胞生长、繁殖得更快,而且它们会产生毒素,使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此,植物组织培养要想取得成功,必须有效地防止细菌等的污染,保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌。为了达到这一要求,就要在植物组织培养过程中进行一系列的消毒、灭菌,并且要求无菌操作。,制备MS固体培养基,外植体消毒,接种,培 养,栽 培,四、实验操作,移 栽,冲洗酒精无菌水冲洗氯化汞无
6、菌水冲洗至少三次之上,此时的组织或细胞为离体的,即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境,而不是能体现其整个植物体的光能自养,在培养过程中,是脱分化、再分化的过程,随着芽和根的形成,就具有了自养的能力,是由细胞到一个个体的演变过程,1、高等植物是光能自养型生物,为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基?,2、培养过程中为什么需要进行光照,思 考,?,1、培养基的灭菌(高压蒸汽灭菌) 2、外植体的消毒(酒精、氯化汞) 3、接种的无菌操作(酒精、酒精灯灼烧) 4、无菌箱中的培养; 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,3、在整个操作过程中,是如何来实现无菌环境的?,结果分析与评价,(一)对
7、接种操作中污染情况的分析 (二)是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 (三)是否进行了统计、对照与记录 (四)生根苗的移栽是否合格,课题延伸(略),练习 1.答:植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差,对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长,如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染,就会导致实验前功尽弃,因此要进行严格的无菌操作。 2.答:外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好,容易诱导脱分化和再分化。,方法:酶解法 在温和条件下,用纤维素酶、果胶酶分解,物理法:离心、振动、电刺激等 化学法:用聚乙二醇(P
8、EG)等试剂作为诱导剂 包括膜融合和核融合,形成多种杂种细胞 AA、AB、BB等,植物组织培养的过程,右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答:(1)步骤是 ,最常用的方法是 。(2)步骤一般常用的化学试剂是 ,目的是 。 (3)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中,运用的技术手段是 ,其中步骤相当于 ,步骤相当于 。 (4)植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株。使能够在新的植物体上有所表现,其根本原因是。,去掉细胞壁,分离原生质体,酶解法,聚乙二醇(PEG),诱导植物原生质体融合,植物组织培养,脱分化,再分化,远缘杂交亲本 的遗传特征,杂种植株获得双亲的遗传物质,(5)若远源杂交亲本A和B都是二倍体,则杂种植株为倍体。(6)从理论上讲,杂种植株的育性。若运用传统有性杂交方法能否实现?。 并说明现由 。因此,这项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于。 (7)利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种过程中,遗传物质
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