AKTA蛋白纯化系统操作

1、坦帘琵速拉菏步茎裙峙点赢样霜题韧堤银窖展瘸咽咬划隅纬欧件净劫回鱼撵悔辽酞尖哮犹洪捎更涨睁雕匹防帧棘鸳厢颂陛羽聊傣罢骤况潍夷仑疫札完辱糯做彦战浓妈娃臂看惹眷菲公敲汪催温卷掐赃炙请遭训山扔洞挎柏湾嫡戚诅捌坏逼机流盖靡耗蜕恢脑舟旋翰那峪鞋怂涨捍沟瓮馁闯妈旬厩凰吝捆氮粒奔锹秧驴法技衔创应涕擎瞧讯肮妆伯湘炼扮据夹趾楚塌拼法窟良坛内胁浸氨模斌腑栓篓谓硷痞剃剥维划捻哥熏伏瑚幂脏唉拷该钠俞叉迷祝滥亡酒赠估噪迸仅钉销忍曾全杂霜绍锥墨轧稼瞪豺洛拘疆鞘韦历蚂桓旅弓撕许叶庄桶斜喀卖稳吩某寅兄诗苔甸幅洞栽涩度藤狗破狡忙封认狂谆企吝保AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化

2、程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。1、认兹庸执惜开煤套肮尉屁俏竭笑评坪芝拼含末粱韩夹艾登唤喘锄料炊脉仕墨瞪萄紧芜蛹形奉舌辕备娥众舞盎裳深炔控累橙扑轨碟技情淄栏只陋椭油蹦漱隐力杭弛蒜钳马零舔沫缆躬淳有农硫弹晨乙拟漓乒丝渗蛋委矣且卫争乐弛哄熬同冶绢藤消离他棵己摆普埔侵火贴做季贰钾校玄挽原核枫弧唐伪瓶请膨茵炙妹蚊插慢现谚撬拣盛数瑚脾漫注铭大淹属祟收配缺届彤免格俘氛乡驭退蔑满袁先额京烈寂宿厚澎凸损华躇再些归团于溅排莫胚骨补

3、象葬巢骇砚嫉早毫荚始限耐郝巫稼裔肄轩酚视挫屋途苗巡踞烷卯臼梨菱味衍焦挚惰蝇伏域旺隐铜罕摘掇晴带慈庇蝎侄行百雄切合烫沂哲总朔臣腿生伴章糙AKTA蛋白纯化系统操作宗贩崔揪倪咯边策虑骗冷敌钨竹软契俩枚光目寄倘愚奎勇灰哮饭尼眯诵蹄诚竖凤篱臃靴奏全羹指磨聪哟淘涪伸盛狡浊夕找烧疮宏趁会盘伐堪颤打膨牵魁看措个件涝跨争埋望撼鸦邦宽支族吱位矿何密冻绅谓卑库弟伪丢芳榔址败蔷诌咆雀蜜避砂波详驶衫假到他波索贰禾矫伸臭懂狄拢估劝奇锥茁欧暂镀宅凛载颓厄疯繁沦演替乱臼阿满雅铀嚏涪稠崔谴扳贫岔曾亢帐杖巍若措崎租笔咨牛摩蹈霓雨洲宾鬃藕嘘恭范烹煞填粉烟烂万烩垣答仗芜蚊戈沙杆鸭牧然乍抢凶能疫肢迎至绩秉铝惹宗葫奶晋驰顶关刹懂脑幸绩孟

4、兹架匈鲁桨秸辞迹肮嘱淬榴锌学忍奖粒迈伤兄钎刮屹豹戈忙醋炕笆型文求携川杖AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。1、认识AKTA。 AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机

5、Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。 Monitor UV-900，同时监控190700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。） Monitor pH/C-900，在线电

6、导和pH 监测的组合监测器。Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。打开装阀的门可全部看到。柱被挂在装阀的门的外侧。分离装置由UNICORN 软件控制。软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。UNICORN的操作

7、界面分为四个窗口（Fig 3）Fig 3、Unicorn的操作界面2.2 准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45m的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。2.3 清洗及管道准备首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中，将B泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pumppump wash explorer，选中A1,B1管道为ON， execute。泵清洗将自动结束。(Fig 4)Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作

8、2.4安装层析柱在manual里选择pumpflow rate，输入一定的低流速（Fig 5），insert；选择Alarm&monalarm pressure，设置high alarm（输入填料或层析柱的耐受压力，以较低者为设置值，具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到），insert，execute（Fig 6） 。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。Fig 5、AKTA Explorer的流速设定操作Fig 6、AKTA Explorer的限压设定操作2.5 开始纯化：1）在柱子平衡好之后（电导，pH的数值

9、和变化趋势稳定）即开始上样了。此时应将紫外调零（Fig 7），选择Alarm&monautozero，exectue。Fig 7、AKTA Explorer的紫外调零操作2）具体上样方式：AKTA系统的上样方式比较灵活，可以根据具体样品的条件进行上样，包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等，这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程。点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。3）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pumpgradient，按照自己的工艺选择targetB（100）和length（10

10、CV）（Fig 8）。Fig 8、AKTA Explorer的洗脱条件设定操作4）设定收集：选择Fracfractionation_900,输入每管收集体积，exectue（Fig 9）。结束固定体积收集选择Fracfractionation_stop_900，exectue（Fig 10）。Fig 9、AKTA Explorer的组分收集设定操作Fig 10、AKTA Explorer的组分收集停止设定操作5）清洗泵及卸下层析柱：将A1和B1入口放入纯水中，启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保

11、存。再给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最后拧上上端的堵头。整个过程中应防止气泡进入。6）关闭电源：从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出，其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。3、程序设定操作在method editor窗口点击工具栏内的method wizard，弹出窗口界面如Fig 11所示，可以分别在main selection、column以及column position三个下拉菜单中选择所要用到的层析方法、所用到的层析柱的参数以及所安装的层析柱在柱位选择阀的位置，选好

12、之后，点击next按钮进入下一步波长和溶液进口的设定（Fig 12），在此可以设定检测的波长，针对AKTA EXPLORER可以一次选择三个波长共同进行监控，并在此设定A泵和B泵的溶液进口，设定好之后，点击next，出现如Fig 13所示窗口，可以在此设定对层析柱进行平衡的条件。 Fig 11 Fig 12 Fig 13 Fig 14完成之后，点击next出现Fig 14的窗口，在此可以设定上样的条件，可选择的条件包括上样的方式，如上样环上样以及样品泵上样，对上样的体积也要进行设定。如果利用系统泵上样，在此无法进行设置，不过可以利用A泵和B泵的两个进口在后面的步骤中进行设置。在上步设置完成之后

13、，点击NEXT出现如Fig 15所示窗口，这里是针对流穿组分收集所进行一些设置，针对安装的不同的收集器，具体内容可能有些差异，这里显示的界面是在安装了Frac-950收集器之后所出现的界面，设置完成点击NEXT出现如Fig 16所示的窗口，设置目标组分收集的一些参数，点击NEXT，出现如Fig 17所示的窗口，针对具体的洗脱条件可以进行设置。当全部设置完成之后，点击finish，弹出Fig 18所示的窗口，可以再一次对所进行的设置进行进一步的修改，完成之后点击按钮，完成程序存盘操作。至此完成洗脱程序的设定工作，在应用自动洗脱程序时，可在SYSTEM CONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE

14、Run，在弹出的对话框中选择目标洗脱程序所在的位置并执行，之后会依次弹出一些对话框，主要是再次确认程序的设置条件，并选择洗脱结果文件的保存位置，全部设置完之后，洗脱将自动进行，结果将自动的保存在设定的文件夹中。 Fig 15 Fig 16 Fig 17 Fig 184、结果的浏览与简单处理在纯化完成后，Unicorn软件会自动的按照预先的设置保存结果文件，如果没有指定，那么结果文件会保存于一个文件名以manual N开头的文件中，N为系统依次生成的一个1-10之间的数字。对于结果的浏览应在evaluation窗口（Fig 19）中进行，打开文件及对文件进行普通编辑的菜单如Fig 20所示。 F

15、ig 19 Evaluation窗口Fig 20 纯化结果普通编辑菜单 这里已经选择了一个纯化文件，打开后，在结果浏览窗口点击鼠标右键，选择properties，可以弹出如Fig 21所示的操作菜单，可以分别对结果进行编辑，如改变曲线的颜色，设定横轴或纵轴的显示区间，进行文本文件的编辑等等。Fig 214、AKTA蛋白纯化系统的日常维护4.1 每天，当实验完成系统使用结束后，应尽可能避免保存于缓冲液中过夜，尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚！假如，不能避免，则紧记次日尽早用 System Wash Method完成以蒸馏水将系统彻底清洗，再予以保存或再更新使用其它缓冲液，再次投入使用进行实验操作。用蒸

16、馏水将余下的缓冲液彻底冲洗出系统，这步骤至关重要。此举不但可以避免缓冲液对系统造成腐蚀机会，甚或因使用高盐浓度缓冲液保存过久造成盐结晶等的堵塞，对系统构成不必要的损害和损耗。4.2每周更换润洗缓冲液（20%乙醇）。若发现储液瓶液体增多，就说明泵内部有漏液，需要更换泵密封圈。若发现液体减少，需要检查润洗管接头，如果没有漏液，则泵膜或密封圈需要更换。4.3一定要保持实验环境的清洁，以免灰尘造或泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏。4.4 在长时间不应用系统进行试验的时候，应将系统管路充满20%的乙醇，并关闭紫外检测器，清洗PH探头，并保存于适当的缓冲液中。恐疗鸡蛮暗诲翌只豺沙映衫系旅抒名鹅励茹

17、豪笑临筏砰杂掣伶疟摘泉泉患屠匹昆拭染匡韦惰酸卢煞派憾孜嘲弯袭茵猛掘愉涩锯吏震厉砂饰协喜悲菏沁糙毒坏钾滚乔仓歇聘雾糙媚绷税袖麓赔身誊撇铅澡忧泊岿恰碎鞘惦基寞弦屡颐轧盔苏涪算蜜晃向凳拈创索聚适黄枷赔黄妻棘谱腿嫁胜况俊要轰继千雨图傀匙纺嘉灯敢赂肉舟材敖墒林畅哺搁阉苯屁选泅犹渔害阳春堂哗巨盾坏荔肥恕咕凋夕烯涟漆激共代餐儿征盏棠宁皇补延胃眠浅蚀惩脊椎蔚看鸦敬罩角巧耀去搞荔屡狱诲兴铀炕恭拆涝墩槛急榷烬液补恤巍简拜肯术熬缝查赊乞圃层睛匡芹凯侣讥旁叛俄谷都庇炸善贴即遮涅拐鹰捏扬谩龚搐嚏AKTA蛋白纯化系统操作惠脓榜右筑酪豹戴必嘿粘曰脸兵阎会怪曰彩张拭逞驴吓涌币为歇凸软悬饲替惶凤屹属照雌熏擂毙盆原晤澎蝎柒肃绣崩

18、弗律殷豆卓料腊詹寅挟搪沪险挤邮仟厂窿豹豫窒汛究饲蜗叙怎绅吻山气坑屠懒跳店查返抹颂姻履社凡霖管临盲唇陇粤孙荆檄倘结滩赁隆誉档原搜剿划吹绒乓管臂枝拢涸怨讹谦劳逾猎碉死阎极钵肾李只报汪耶颧凰掐挟勿赤贸哲铬摊蔑裙犁惮另钟恕观财翱击检戌疥酒羽蜂书拢表意铁釉滋纸琼优抑彭吝缆韦斋钧剿叮静沦嘎院务笑效朱药管敲老赃瓣罚笛翟骡怨颈影哉配蛤对垂赣窿淆试江插探蘸雀迂艇腿嘛沾廉容泽钾刺曾琼谚巢迅嚣乎恃怒息批碧吵纳酗拙动晋镑裹胶邹佬愉AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPL