![实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量_第1页](http://file1.renrendoc.com/fileroot_temp2/2020-9/24/68b04119-4dee-4eaf-b9ef-1c9d1a2f0bdb/68b04119-4dee-4eaf-b9ef-1c9d1a2f0bdb1.gif)
![实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量_第2页](http://file1.renrendoc.com/fileroot_temp2/2020-9/24/68b04119-4dee-4eaf-b9ef-1c9d1a2f0bdb/68b04119-4dee-4eaf-b9ef-1c9d1a2f0bdb2.gif)
![实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量_第3页](http://file1.renrendoc.com/fileroot_temp2/2020-9/24/68b04119-4dee-4eaf-b9ef-1c9d1a2f0bdb/68b04119-4dee-4eaf-b9ef-1c9d1a2f0bdb3.gif)
下载本文档
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、 实验项目:荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验题目】荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验目的】1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能,掌握其基本操作。【实验原理】维生素B2(又叫核黄素,VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为: 由于分子中有三个芳香环,具有平面刚性结构,因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解,对热稳定。 维生素B2溶液在430440nm蓝光的照射下,发出绿色荧光,荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH67的溶液中荧光强度最大,而且其荧光强度与维生素B2
2、溶液浓度呈线性关系,因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质光黄素,光黄素也是一个能发荧光的物质,其荧光比维生素B2的荧光强得多,故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内,且在避光条件下进行。 在稀溶液中,荧光强度F与物质的浓度c有以下关系:F2.303I0bc当实验条件一定时,荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系:F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。【主要仪器与试剂】主要仪器:F-2500 HiTachi荧光分光光度计;1cm石英皿;50mL容量瓶;5mL移液管;烧杯;胶头滴管试剂:维生素B2标准溶液:未知液4【实验内容及步骤】1
3、、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0g/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分别置于50mL的容量瓶中,各加入去离子水稀释至刻度,摇匀。标记为的一系列维生素B2标准溶液。待测。2、待测液制备 取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中,加入去离子水稀释至刻度,摇匀。待测。3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置em540nm为发射波长,在250500nm范围内扫描标准溶液,记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线,便得到激发光谱。从激发光谱图上找出其最大激发波长ex。在此激发波长下,在400600nm范围内扫描,记录发射强度与发射波长间的函数关系,便
4、得到荧光发射光谱。从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长em。4、标准溶液及样品的荧光测定 将激发波长固定在最大激发波长ex,荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处em。扫描蒸馏水和上述5个标准液的荧光发射强度。数据记录于表1中。以溶液的荧光发射强度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,制作标准曲线。 在同样条件下测定未知溶液的荧光强度,并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度,计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。【数据记录与结果分析】、维生素B2激发光谱图: 最大激发波长ex=373nm、维生素B2荧光发射光谱图: 最大荧光发射波长处em=524nm表1:标准溶液及待测溶液的浓度和荧光强度数据记
5、录: 维生素B2溶液浓度/(g/mL)0.0000.2000.4000.6000.8001.000相对荧光强度0.23424.6548.0070.5091.86112.9、系列标准溶液浓度与荧光发射强度的标准曲线图: 由计算机处理得标准曲线方程为 y=112.49x-1.7769相关系数r= 则待测溶液的浓度c =0.907g/mL【问题讨论】1、试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因?答:原因是由于现代电子技术具有检测十分微弱光信号的能力,并且荧光强度与激发光强度成正比,提高激发光强度也可以增大荧光强度,使测定的灵敏度提高;而吸收光度法测定的是吸光度,不管是增大入射光强度,还是提高检测器的灵敏度,都会使透射光信号与入射光信号以同样的比例增大,吸光度值不会改变,因此灵敏度不能提高。2、维生素B2在pH=67时荧光最强,本实验为
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 【正版授权】 ISO 20560-1:2024 EN Safety information for the content of piping systems and tanks - Part 1: Piping systems
- 2023年贵州木工技师理论考试题
- 2023年生产工作计划范文
- 【小升初】青岛版2023-2024学年六年级下册数学期末调研检测试卷合集2套(无答案)
- 数控机床及加工机械项目可行性报告
- 期末检测(试题)2023-2024学年统编版语文三年级下册
- 2022-2023学年江苏省宿迁地区部编版四年级下册期末考试语文试卷
- 2020-2021学年浙江省湖州市德清县人教版三年级上册期末检测数学试卷
- 2022-2023学年湖南省邵阳市邵阳县部编版四年级下册期末考试语文试卷
- 《呼吸器官导学案-2023-2024学年科学人教鄂教版》
- 英语-外研(一年级起点)-四年级下册-学生单词默写专用表格
- (中级工程师)2021年《水利水电工程专业》职称考试试卷(附答案)
- GB/T 24425.6-2009钢丝螺套技术条件
- 第三章放大电路的频率响应
- GB/T 15234-1994塑料平托盘
- 山东省济宁市普通中学2021-2022学年高一英语下学期期末试卷含解析
- 《重庆谈判》教学设计
- 初一家长学校讲座(课堂)课件
- 白金五星级酒店餐饮部员工操作手册(sop)中餐厨房-0
- 中耳乳突炎的CT诊断课件
- 2023年阜外心血管病医院医护人员招聘笔试题库及答案解析
评论
0/150
提交评论