地贫诊断相关知识与产前诊断.ppt

1、地贫筛查和产前诊断,地贫实验室遗传筛查与产前诊断,地贫的血液学表型筛查 地贫的分子诊断 从家系分析进行筛查或排除地贫,遗传咨询,产前地贫携带者筛查策略,双方的两项指标 均同时正常,产检对象（孕妇及其配偶）,地贫分子诊断,知情同意选择,胎儿产前基因诊断,血液五分类分析（检测MCV和MCH等RBC指标）,双方的两项指标 均同时降低,一方正常，另一方的两项指标降低,地贫全套检查,异常的一方做地贫全套检查,-地贫特征,-地贫特征,ID,双方均为 -地贫特征,一方为-地贫特征，另一方为ID或-地贫特征,+,-,单纯性ID或单纯性-地贫,双方均为 -地贫特征,ID或-地贫特征的一方 做地贫分子诊断,夫妇双

2、方基因诊断,血R正常的 一方做地 贫分子诊断,-,单纯性ID或单纯性-地贫,-,+,+,地贫的产前筛查原则,1、地贫高发区内夫妻双方尽早作地贫筛查； 2、因地制宜选用合适的方法、仪器； 3、科学合理的筛查流程以减少假阴性的发生； 4、血液学表型结合分子诊断，必要时进行家系 分析，综合各种检查结果才能得出结论； 5、表型与基因诊断结果有不符之处时，要慎之 又慎，需用其它分子诊断方法进一步分析。,育龄夫妻筛查的时间早,1、育龄夫妻尽可能早筛查，在婚前检查时 最好或孕早期，因孕妇缺铁的比例较低，有利于 红细胞指数的应用和排除缺铁性贫血对地贫筛查 结果的判断。 2、有足够的时间完成特殊病例或未知突变的

3、 分子诊断。 3、有利于合理安排时间进行产前诊断，如果 有条件可早期绒毛取样进行产前诊断，在孕中期 可采集羊水标本，孕晚期用脐带血标本比较合 适。,适宜的方法和技术优,1、因地制宜，选用灵敏、准确的筛 查和 分子诊断的方法； 2、在具有决定意义的项目上要特别重视红 细胞指数测定、HbA2定量 和铁代谢状态的分 析）。,实验室技术人员专,1、需要具备相关资历及有关知识，最好有 高水平的人员把关，保证筛查结果的可靠性； 2、PCR上岗证； 3、参加省卫生厅组织的生化免疫遗传和分 子遗传统一考试。,地贫筛查下结论慎,地贫筛查的结论必须多项目综合考虑： 1、是否有小细胞症？ 2、是否有铁代谢异常？ 3

4、、Hb电泳是否有异常带？ 4、抗碱Hb是否高？ 5、HbA2是否增高？ 6、有无可能为静止型地贫？,红细胞指数在地贫筛查中的重要作用,1、红细胞指数的降低提示地贫的高风险性， 但红细胞指数正常并不能说没有地贫风险； 2、对于处于临界值（如78flMCV85fl）的 结果，必须慎重考虑并做进一步的检查； 3、生理变异与病理性因素应考虑在内； 4、MCH比MCV更为可靠；RDW-CV意义不可 小视； 5、血细胞分析必须有严格的质量控制体系,红细胞脆性试验的局限性,1、此方法仅适用于无血细胞分析仪的基 层单位，当然增加项目创收也可以，但不宜 单独使用（案例见后） 2、此方法不适用于孕产妇和婴幼儿的地

5、 贫筛查； 3、使用该指标时必须排除其它红细胞膜 的病变。,地中海贫血的分子诊断的目的,1、用于地贫筛查表型阳性的明确诊断; 2、排除地贫表型不明显者的常见突变; 3、用于静止型地贫的分子诊断; 4、排除ID合并地贫； 5、用于胎儿出生前的诊断（产前诊断）; 注意： 1、分子诊断结果一定要与地贫筛查结果综合考虑； 2、单独使用时一定要将所有可能的情况均考虑在内， 即使这样也有可能漏诊。,哪些情况必须作基因诊断？,情形一：双方同为或地贫表型阳性 处理：双方均进行或地贫基因诊断。 结果：如果分子诊断确定双方均为同类型的地贫，建议去产前诊断中心登记，择机进行产前诊断；如果一方确定突变，另一方表型阳性

6、但未检测出突变，抓紧时间鉴定未知突变。,情形二 ：一方为地贫表型阳性，另一方为-地贫表型阳性时 。 处理：双方均作地贫基因诊断或者将-地贫表型阳性者标本送有条件实验室检测。 结果：确定基因型后，建议去产前诊断中心登记择机检查并提前通知实验室。,情形三：一方为-地贫表型阳性，另一方为表型正常。 处理：表型正常的一方须做-地贫基因诊断。 结果：表型正常者未检出突变，进行产前咨询后转为常规产检；表型正常者检出静止型突变，接受HbH病的产前咨询，按知情同意选择原则进行产前诊断。,情形四：一方为-地贫表型阳性，另一方为-地贫表型阳性时。 处理：-地贫表型阳性的一方须做-地贫基因诊断 。 结果：如果-地贫

7、表型阳性合并-地贫，按同为-地贫处理；如果-地贫表型阳性未合并-地贫，产前咨询后转入常规产检。,情形五：一方为缺铁（多为孕妇），另一方情况不明。 处理：缺铁的一方必须做-地贫基因诊断。 结果：如果ID合并-地贫，对方也必须做-地贫基因诊断；如果ID未合并-地贫，对方可不做-地贫基因诊断，产前咨询后转入常规产检。,情形六 ：一方为HbH病，不管另一方MCV和MCH正常与否 。 处理：非HbH病的一方必须进一步做-地贫基因 。 结果：如非HbH病的一方排除-地贫突变，产前咨询后转入常规产检；如非HbH病的一方为-地贫，必须进行产前诊断。,情形七 ：一方为-地贫表型阳性合并异常血红蛋白病，但另一方-

8、地贫表型阳性又未检测出已知突变。 处理：抓紧时间检测未知突变，建议产前诊断中心抽脐带血做产前诊断。 结果：分子诊断结合脐带血电泳的结果进行产前诊断。,地中海贫血的产前诊断,地贫的产前诊断的意义,地贫的产前诊断（胎儿出生前的诊断）是最后一道关卡，是决定是否淘汰胎儿的决定性依据，需要特别谨慎处理，无论多么小心都不为过，否则一不小心就会带来灭顶之灾！,地贫的产前诊断的原则,1、实验室要严格按临床基因扩增实验室的要求从事分子诊断； 2、必须签订知情同意书，需要列明该检测涵盖的突变范围，未检测的突变占地贫中的比例； 3、独立的两次平行测定是保证结果准确的必要步骤，最好是采用两种不同的实验方法相互验证。

9、4、标本的质量和适当保存也是减少风险的重要环节。,地贫的产前诊断时间要求,植入前的诊断（PGD）：68细胞期。 绒毛取样：孕9-12周； 羊水取样：孕16-22周； 脐血取样：孕20周后； 取样风险：羊水取样风险最小，脐血次之，绒毛取样风险最大。 脐血标本既可获得较多量的DNA，而且还可通过Hb电泳对-地贫进行快速有效的诊断，从而更有效地保证产前诊断的可靠性。,产前诊断标本的处理,1、产前诊断的标本标识特别重要，实行唯一标识制度，这是保证产前诊断准确的前提。 2、产前诊断的标本及时处理，有问题及时与实验室技术人员进行沟通。 3、羊水标本按取样的先后最好分为三管，标识清楚，以防母血污染。 4、脐

10、带血的处理同外周血一样，可以电泳或抗碱Hb测定鉴定是否是脐带血。,产前诊断标本被母血污染的后果,假设孕产妇为轻型地贫，在临床上以此类情况多见： 1、就可将原本重型或中间型地贫误诊为轻型地贫，此为灭顶之灾！ 2、将原本为HbH病误诊为轻型-地贫，这也是非常麻烦的官司！ 3、将原本正常的胎儿误诊为轻型地贫，这种情况还算好处理，后果不算严重。,羊水标本被母血污染的处理,1、按程序处理羊水，如果污染轻微，对地贫产前分子诊断的结果影响不大（注：并不是没有）; 中度、重度的母血污染，则误诊的机会非常大 。 2、记录羊水离心后的详细情况，及时通知临床医生并在报告单上注明“羊水标本严重污染，结果仅供参考”，建

11、议间隔2周以上再次取样，最好采用脐带血，以引起临床医生注意。,产前诊断标本被母血严重污染的补救方法,1、如果做-地贫基因诊断，对于基因型为 - SEA /的胎儿（实际基因型可能为- SEA /- SEA ）可在 孕24周后，定期进行B超下监测，观察心/胸比例、胎盘厚 度、胎儿有无水肿等改变。一经发现胎儿有上述变化，建 议尽快终止妊娠。 2、对于基因型为-地贫杂合子的胎儿（胎儿的实际 基因型可能为纯合子或双重杂合子）或进行HbH病的 产前诊断，那就必须只能择机重新抽取羊水或胎儿脐带血 复验了，无其他办法弥补。,事例及教训两则,早在1993年，国内某知名诊断机构将本应是重型的-地贫诊断为轻型-地贫，赔偿患者1万。 1994年，我单位开始作地贫产前诊断时，羊水标本被母血污染，胎儿的实际基因型可能为-SEA/- SEA ，但我们的诊断结果是 - SEA /，孕24周时出现胎盘增厚，胎儿水肿等症状，导致引产。,总结,1、产前筛查是基础，产前诊断是决定性的步骤，两者同等重要，没有准确的产前筛查，就