最终灭菌注射剂的质量控制.ppt

1、最终灭菌注射剂质量控制,污染微生物的来源,内源性的影响因素 空气净化系统 水 工艺过程 物料 外源性的影响因素 人员,芽孢是关键控制点,G+,G-,微生物无处不在 气源性微生物革兰氏阳性菌较多它们可形成芽孢，难以杀灭 因此，药品生产需要HVAC 水源性则革兰氏阴性菌居多 不会生成孢子 但会形成细菌内毒素,一、什么是芽孢？,当某些细菌遇到不良生存环境条件时，为保护自身，在细胞内形成一外壁厚而坚硬的体眠体，该体眠体即称芽孢（Spore）或孢子。 由于其对不良环境的耐受性远高于生长态细胞，常被用于挑战灭菌工艺，以确认被灭菌物品无菌的可靠性。,芽孢的特性,主要产生于Gram+ 细菌的两个属 芽孢杆菌属

2、 Bacillus 梭菌属 Clostridium 能抵御各种恶劣环境，可存活上百万年，因为它 有厚的皮层结构 仅含核酸及少量萌发必需物 含水量极低 休眠体，内生孢子，不可再生（每个细胞只产生一个芽孢）；真菌孢子属于分生孢子，不具上述特性。,细菌芽胞（孢）的形成及其特性,热对活细胞的作用,有一种可引发克雅氏综合症 (Creutzfekldt- Jakob）的普里昴 ( prion）病原体，在132下加 一小时才可完全杀灭（克雅氏综合症：俗称人体疯牛病） 需氧菌中的芽孢杆菌属(Bacillus)和厌氧菌中的梭状芽孢杆菌属(Clostridium)，耐热性较强 它们能产生内源性孢子/芽孢，或胞间休

3、眠体，对热、干燥及化学消毒剂的耐受性大大增强 这类芽孢的干热灭菌温度一般在100 170，湿热灭菌的温度则在80 129之间。,从“欣弗”事件谈灭菌工艺,欣弗事件的发生 2006年7月 安徽华源 克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液 不良事件报告81例，涉及10个省份,欣弗到底怎么了？,克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查,克林霉素磷酸酯氯化钠注射（100ml:0.6g） 采用半无菌工艺生产 灭菌条件100、7分钟 贮存条件阴凉 有效期1年 有些企业的处方中含有苯甲醇 稳定性考察有一批留样的有关物质为7.9 有关物质总杂不得过8.0 单杂不得过5.0,克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查,克林霉素磷酸酯注射液（2m

4、l:0.3g） 灭菌条件100、310分钟 贮存条件遮光、密闭保存 有效期2年 处方中含有苯甲醇 有关物质总杂不得过6.0（2004年底改为8.0） 单杂不得过4.0,从上述调查看国内灭菌注射剂生产的缺陷,对灭菌的认识不正确 产品研发未考虑灭菌工艺的可行性 忽视工艺的可行性，盲目跟风报批 注射剂用原料药的杂质控制不严 忽视产品的安全性,中国医药报 2007年1月4日 A6版,无菌药品常用灭菌工艺的比较,影响湿热灭菌效果的因素,待灭菌产品中含有微生物的种类和数量 待灭菌产品的包装形式 待灭菌产品的装载方式和装载数量 湿热灭菌工艺条件 湿热灭菌设备,无菌保证水平SAL,无菌保证水平（Sterili

5、ty Assurance Level） 表示物品被灭菌后的无菌状态 按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。,灭菌工艺验证的必要性,灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的无菌保证体系 灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件 灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产,国内企业灭菌工艺验证常见缺陷,无包装规格 无装载方式 未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证 采用留点温度计监测温度 无温度探头校准记录 验证的灭菌工艺与实际工艺不一致 未验证最差灭菌条件 设定的验

6、证合格标准达不到无菌保证水平（SAL）10-6 生物指示剂使用不规范,灭菌工艺检查要点,生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控 待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量 灭菌工艺条件 灭菌设备 关键控制参数的控制和记录仪表的校准 设备维护和维修 灭菌的记录 灭菌工艺的验证 选用的生物指示剂 热分布试验，找出最冷点位置 无菌检验样品的取样,无菌检查,无菌检查的局限性,无菌的定义 理论上：无菌没有任何活的微生物 实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在 无法对整批产品进行100%检验 无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断 无菌检验用培养基有其局限性 只进行细菌和真菌的检验

7、对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长” 培养条件（如温度和时间）是有限的 我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态,美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果,试验目的：不合格的可能性(%) 试验批量：60,000支 试验方法：按美国药典无菌测试方法,上述无菌测试结果的启示,含有少量微生物污染产品的批次也有可能“通过”无菌检验 一批产品的染菌率越低，根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，其风险就越大,如何用无菌检验来证明整批产品无菌,要求有一个取样计划来涵盖整个批号 有足够的取样量和检验量 选择适用的培养基 采用经验证的无菌检验方法 良好的环境监控,检验标准制定依据,2003验证指南 QC-7

8、51E注射剂药液过滤前含菌量测定 M-00 061A 注射剂灭菌前药液污染水平及耐热性检查,大容量注射剂举例,灭菌前药液的含微生物的计算过程： 根据2003版药品上产验证指南 lgP=lgN-F0/D121 P:灭菌后产品内微生物存活概率 N:灭菌前药液的含耐热孢子的量 D121:微生物耐热参数，系指一定温度下将微生物杀灭90%或使之下降一个对数单位所需的时间（分） lgN = lgP+F0/D121= lgP+FT/DT(N值与FT成正比，与DT成反比) 该产品（葡萄糖）采用115灭菌32min,产品灭菌的F08,为更严格的控制灭菌前产品的生物负载，F0取8计算。,大容量注射剂举例,DT与生

9、产环境，以及过滤截留得到的微生物有关，需要确认污染微生物的耐热性，在未检测到耐热微生物时，DT通常按1计算。为更严格的控制灭菌前产品的生物负载， 取DT 为1计算。 lgN =lg10-6 +8/1 N=100CFU/袋（产品规格为250ml） N=40CFU/100ml,检测重点,污染水平 微生物耐热性,取样,灭菌前药液直接取样，每个样品取样大容量注射剂（两个最小包装，最少各 100mL）。小容量注射剂两份，最少各100mL。 灭菌后取样大容量注射剂各约50mL。,检测方法,污染水平检查 先用灭菌的含5吐温80的pH7.0氯化钠蛋白胨润湿0.45m滤膜，然后过滤100mL灭菌前药液，有抑菌性的药液需用已验证量的缓冲液冲洗滤膜，以消除药液的抑菌性），再以无菌方式将滤膜菌面朝上贴于准备好的胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）上，同时做1个阴性对照。胰酪胨大豆琼脂培养