第二章 紫外可见分光光度法.ppt

1、紫外可见分光光度法,刘晓燕,主要内容：, 根据Ax的值在工作曲线上查处cx的大小。 适用范围 大批重复试样的分析。,（2）标准曲线法(工作曲线法),未知物的吸光度,未知物的浓度,2、多组分的定量方法,三种情况： （1）两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自max下不重叠分别按单组分定量 令E=b,（2）两组分吸收光谱部分重叠 1测A1b组分不干扰可按单组分定量测Ca 2测A2a组分干扰不能按单组分定量测Ca,19:30:17,步骤：,（3）两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定,物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收

2、强度等都可能发生变化。,63,第四节 紫外可见分光光度法的条件选择,浓度测量的相对误差与T(或A)的关系,实际工作中，应控制T在1070, A在0.151.0之间 (调c, b, ),一、试样浓度的选择：,最佳值,最佳读数范围,二、入射光的波长的选择,“吸收最大max ，干扰最小”,三、显色条件的选择,1.显色剂的选择 1.灵敏度高，选择性好。（一对一） CuNH3 e 620=1.2102 Cu双硫腙 e 533=5.0104 2.显色产物组成恒定,性质稳定。 3.显色产物与显色剂色差大,显色 时颜色变化明显.试剂空白值小。 4.显色条件要易于控制，以保证其有较好的在线性。,2.显色剂的用量

3、（由实验确定）,M + R = MR (被测组分) (显色剂) (有色化合物) R过量,反应完全, MR稳定,A值稳定.,选择曲线变化平坦处。显色剂用量过量、适量、定量。,3 显色温度、时间,适宜的显色时间和温度由实验确定（曲线平坦部分对应的时间和温度就是测定吸光度的最适宜时间）,四、酸度的选择,OH-,酸度的影响,副反应,M + nR = MRn,H+,存在型体的变化,RH = R- + H+,生成不同配比的络合物,例，磺基水杨酸(ssal) Fe 3+,pH = 2 3,FeR,紫红色,pH = 4 7,FeR2,橙色,pH = 8 10,FeR3,黄色,pH12 Fe(OH)3,沉淀,p

4、H1pHpH2,选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区,五.干扰离子的影响及其消除方法,A、控制溶液酸度 B、加入掩蔽剂 C、利用氧化还原反应，改变干扰离子的价态 D、利用校正系数 E、利用参比溶液 F、选择适当的波长 G、增加显色剂用量 H、采用适当的分离方法，分离干扰离子,E.参比溶液(空白溶液),在测定时用空白溶液调节仪器A=0(T =100%),以消除溶液中其它物质的干扰,抵消比色皿对光反射、吸收. 1)溶剂参比 试液、试剂、显色剂均无色(无吸收) 则可用溶剂如纯水作参比溶液.,2)试剂参比 试液无色, 显色剂或其它试剂有色(有吸收), 则应选试剂空白. 3)试液参比 试剂、显色剂均无色(

5、无吸收),试液中其它组分有色, 则应采用不加显色剂的试液作参比溶液. 选择参比溶液的总原则是:使试液的吸光度能真正反映待测组分的浓度.,19:30:17,例1取咖啡酸，在165干燥至恒重，精密称取10.00mg，加少量乙醇溶解，转移至200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶 液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中，在323nm处测定吸光度为0.463，已知该波长处的 ，求咖啡酸百分含量。,解：,1、双光束分光光度计与单光束分光光度计相比，其突 出优点是 ( ) (1) 可以扩大波长的应用范围 (2) 可以采用快速响应的检测系

6、统 (3) 可以抵消吸收池所带来的误差 (4) 可以抵消因光源的变化而产生的误差,1、双光束分光光度计与单光束分光光度计相比，其突出优点是 ( ) (1) 可以扩大波长的应用范围 (2) 可以采用快速响应的检测系统 (3) 可以抵消吸收池所带来的误差 (4) 可以抵消因光源的变化而产生的误差,2、双波长分光光度计的输出信号是 ( ) (1) 试样吸收与参比吸收之差 (2) 试样在 1和 2处吸收之差 (3) 试样在 1和 2处吸收之和 (4) 试样在 1的吸收与参比在 2的吸收之差,3、物质的颜色是由于选择性地吸收了白光中的某些波 长所致，CuSO4 溶液呈蓝色是由于它吸收了白光中的 （ ）

7、(1) 蓝色光 (2) 绿色光 (3) 黄色光 (4) 红色光,2、双波长分光光度计的输出信号是 ( ) (1) 试样吸收与参比吸收之差 (2) 试样在 1和 2处吸收之差 (3) 试样在 1和 2处吸收之和 (4) 试样在 1的吸收与参比在 2的吸收之差,3、物质的颜色是由于选择性地吸收了白光中的某些波 长所致，CuSO4 溶液呈蓝色是由于它吸收了白光中的 （ ） (1) 蓝色光 (2) 绿色光 (3) 黄色光 (4) 红色光,2、双波长分光光度计的输出信号是 ( ) (1) 试样吸收与参比吸收之差 (2) 试样在 1和 2处吸收之差 (3) 试样在 1和 2处吸收之和 (4) 试样在 1的

8、吸收与参比在 2的吸收之差,3、物质的颜色是由于选择性地吸收了白光中的某些波 长所致，CuSO4 溶液呈蓝色是由于它吸收了白光中的 （ ） (1) 蓝色光 (2) 绿色光 (3) 黄色光 (4) 红色光,5、KO4法氧化Mn2+到MnO4，然后用分光光度法测定，选择合适的空白为（ ） (1) 蒸馏水 (2) 试剂空白 (3) 除K 外的试剂空白 (4) 不含KO4的溶液空白,6、现有紫外可见吸收光谱相互干扰的A和B两组分，它 们的最大波长分别为A和B，若用双波长测定A组分的含 量，则下面哪一种选择1和2的方法是正确的？( ) （1）使1和2分别等于A和B （2）选1等于A，选2使B组分在2的吸

9、光度和它在1处 的吸光度相等 （3）选1等于A，选2为A，B两组分吸收峰相交处的波 长 （4）选1等于B，选2使A组分在2的吸光度和它在1处 的吸光度相等,5、KO4法氧化Mn2+到MnO4，然后用分光光度法测定，选择合适的空白为（ ） (1) 蒸馏水 (2) 试剂空白 (3) 除K 外的试剂空白 (4) 不含KO4的溶液空白,6、现有紫外可见吸收光谱相互干扰的A和B两组分，它 们的最大波长分别为A和B，若用双波长测定A组分的含 量，则下面哪一种选择1和2的方法是正确的？( ) （1）使1和2分别等于A和B （2）选1等于A，选2使B组分在2的吸光度和它在1处 的吸光度相等 （3）选1等于A，选2为A，B两组分吸收峰相交处的波 长 （4）选1等于B，选2使A组分在2的吸光度和它在1处 的吸光度相等,5、KO4法氧化Mn2+到MnO4，然后用分光光度法测定，选择合适的空白为（ ） (1) 蒸馏水 (2) 试剂空白 (3) 除K 外的试剂空白 (4) 不含KO4的溶液空白,6、现有紫外可见吸收光谱相互干扰的A和B两组分，它 们的最大波长分别为A和B