HIV检测及临床意义.ppt

1、HIV检测及临床意义,中国每年新发现的HIV/AIDS病例数（19852002）,HIV的检测,HIV感染可通过两种途径检测,直接检测病毒或其组成部分 检测人体HIV免疫反应HIV特异性抗体 从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为1-3个月，有一小部分HIV感染者出现延迟反应,HIV感染后抗原和抗体的变化及其与疾病关系,HIV感染人体后出现一过性病毒血症，6-8周后血清抗体阳转，病毒滴度降低，在随后的5-8年无症状带毒期里HIV抗体一直存在，但病毒难查到。进入AIDS期后血浆中病毒再次出现。 故诊断HIV感染多数时间用抗体检测诊断，极早期（窗口期）用抗原检测。,HIV抗体诊断,目前临床上实际

2、应用的是测定特异性HIV抗体，包括初筛和确认实验。,一、检测试剂,筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。 目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用酶联免疫试剂。 自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。,2、确认试剂必须经国家药品监督管理局注册批准。确认试剂包括免疫印迹试验、条带免疫试验及免疫荧光试验试剂。目前以免疫印迹试剂最为常用。,ELISA方法： 目前最常用的初筛实验，自19

3、85年首次检测HIV-1抗体的试剂盒供市以来，已从第一代的全病毒抗原间接法发展到第四代的以重组的多肽抗原及抗P24抗体包被的双夹心法，使窗口期缩短了2-3周。,四代艾滋病酶联免疫试剂比较,第四代,病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 Ab,IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O p24 抗原,病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体,检测结果的报告和处理 阴性反应出具HIV抗体阴性报告， 如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，可以进行HIV-1

4、 P24抗原或HIV核酸检测，或23个月以后再做抗体检测。 筛查实验呈阳性发现反应，可出具“HIV抗体待复查”的报告，不能出阳性报告。,HIV抗体初筛检测流程图,快速诊断试剂： 采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理 快速、不需特殊仪器 敏感度、特异度低于ELISA，且价格贵 适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊手术前检查 快速诊断阳性结果还需经ELISA方法验证,HIV抗体确认,常用的确认实验方法是免疫印迹法（WB）。 免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型。一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测,蛋白印迹实验（WB） 广泛使用的确认实验 用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的HIV蛋

5、白抗原分开后转移到硝酸纤维膜上。标本中存在的HIV抗体与条带上的抗原结合，再加入酶偶联的抗人IgG抗体和底物，在抗原抗体结合的部位会出现有色条带 其可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体，故被用做确认试剂。 不同的研究机构有不同的判定标准,HIV抗体确认检测流程图,免疫印迹法(HIV1/2混合型),HIV-1阳性反应,可疑反应,出现HIV-2指带,HIV-1阳性报告,可疑反应,阳性反应,阴性反应,报告HIV-2血清学阳性反应报告必要时测核酸,阴性报告,免疫印迹法（HIV-2）,每3个月随访一次，共2次，仍属可疑，则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性,阴性反应,阴性报告,P24抗原测定 （

6、一）适用范围,HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。 HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。 第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应， 但HIV-1抗体确认阴性者的诊断。 监测病程进展和抗病毒治疗效果。,（三）结果报告和解释,1、HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认。 2、HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊。 3、HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染。,HIV核酸检测,PCR对与缩短窗口期,1、辅助诊断 某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供非常有用的证据。 单纯使用

7、RNA测定不能完全确定感染与否，但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时（1000）提示感染发生的可能性非常大。 使用此指标应综合其他检测数据和样品背景情况进行综合分析与判断。,2、窗口期辅助诊断,在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒RNA测定具有特殊的意义。 目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的RNA检测以降低窗口期传播的残余危险度。,3、病程监控,由于HIV感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。 通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与AIDS发病时的症状区别，病

8、毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发生的症状是否与HIV感染有关。,4、指导治疗方案及疗效测定,并非在任何情况下感染者都应该进行抗病毒治疗，这不但是经济上的原因，更重要的是在于抗病毒药物的副作用和疗效。通常在病毒载量达到一定水平后（如35000-50000拷贝/毫升）才具有良好的效果。 只有通过治疗后病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通常治疗后病毒水平降低50%才被认为临床有效。,艾滋病免疫指标的检测,随着政府加速对国产抗艾滋病药物上市的批准，我国艾滋病人的治疗已经出现了曙光。 艾滋病临床治疗中各种免疫指标(CD4+、CD8+T细胞 等)对于确定感染状态、预测发病、评价药物疗效及新药开发具有重要的作用。,CD4 T淋巴细胞：（流式细胞术） CD4 T细胞是HIV的主要靶细胞,感染后随着病程进展，CD4 T细胞不断下降 500/mm3有临床诊断意义 200/mm3AIDS病程进展， AIDS诊断和疗效观察的指标,HIV感染几周内，出现类流感症状，也称为血清阳转期， CD4细胞的数量降低。随之出现的免疫应答可以控制急性症状