脂质体课件.ppt

1、脂质体制造技术、药剂教室吴琳华、内容提要、脂质体的概念脂质体的组成、结构、理化性质和分类脂质体的制造方法脂质体的质量研究特殊性能脂质体的作用机制脂质体的特征，第一节概要、脂质体(liposomes )是将药物封入类脂双分子层内而形成的脂质体的研究进展，1965年，英国邦汉提出了生物膜的研究模型。 上世纪70年代初期，Gregoriadis首先提出以脂质体为半乳糖苷酶载体治疗糖原积累疾病。脂质体研究进展，第一药用脂质体制剂(1988年，瑞士)益康唑脂质体凝胶第一脂质体注射剂(1990年美国)阿霉素b脂质体第一抗癌药脂质体(1995年，美国)软双星脂质体第二节脂质体的组成、结构、理化性质和分类、两

2、个脂肪酸链、(10-24个c原子、0-6个双键)、磷脂图像、脂质体组成、胆固醇结构图、脂质体材料、中性磷脂、负电荷磷脂(。 鞘脂(SM )、磷脂酸(PA )磷脂酰甘油(PG )磷脂酰肌醇(PI )磷脂酰丝氨酸(PS )、硬脂酰胺(SA )胆固醇衍生物、大豆甾醇糖苷(SG )大豆天然脂质体的主要组成部分b .从蛋黄、大豆、牛的心脏和脊髓中提取c .是混合物，各个PC具有长度和饱和度不同的脂肪链。 植物性PC的具有脂肪链高度不饱和性动物性PC的脂肪链的大部分饱和而合成的PC二棕榈胆碱(DPPC )、二硬脂胆碱(DSPC )二肉豆蔻基磷脂酰胆碱(DMPC )、脂质体的组成(中性磷脂)、脂质体的组成(

3、中性磷脂)、(b ) 非饱和磷脂(不能紧密排列)、磷脂脂肪链饱和度对磷脂膜序列的影响、脂质体的组成(中性磷脂)、磷脂酰乙醇胺(phosphatid ethanolamine，PE )特性头基小； 非饱和的PE为非双重结构型的六角相形成(特殊脂质体制作)、六角相、磷脂酰乙醇胺(PE )、神经鞘氨醇(sphingomyelin，SM )特性：由于酰胺键和羟基之间容易形成氢键相互作用， 形成比PC有序的胶体相，脂质体的组成(中性磷脂)、SM、脂质体的组成、磷脂酸(phosphatidic acid，PA )、磷脂基肌醇(phosphatidyl inositol，PI )、磷脂存在：动物细胞在质膜中

4、含量高，在植物中含量少。 性质：中性脂质，也是两亲性分子，但亲油性大于亲水性。 脂质体中的状态：作为两性分子可以嵌入膜，羟基团朝向亲水面，脂肪族的链朝向磷脂双中心的烃链，并且平行。 胆固醇本身形成脂双层结构，但可以高浓度地配合磷脂膜。 在脂质体中的作用：主要与磷脂结合，阻止磷脂凝集结晶结构。 减弱膜中脂质与蛋白质复合体的联系，像“缓冲剂”一样调节膜结构，发挥“流动性”的作用。脂质体组成、脂质体组成、胆固醇和磷脂序列图像、4、正电荷脂质硬脂酰胺(sterylamine，SA )、胆固醇衍生物。 基因传递系统5、大豆甾醇及其糖苷为纯天然产品，比较安全、廉价。 大豆甾醇糖苷(SG )是从精制大豆油残

5、渣中分离的甾醇糖苷的混合物。 可以提高脂质体的肝指向性。 大豆甾醇(soybean sterol，SS )是SG脱葡萄糖残基的水解产物。与Ch结构类似，可以提高脂质体的稳定性，其膜稳定作用大于Ch。 脂质体的组成，二、脂质体的结构二分子结构：磷脂分子的亲水端呈弯曲弧形，看起来像“拐杖”，与胆固醇分子的亲水基团结合，形成“u”形的结构。 两个“u”形结构相对排列形成双分子结构。 第二节脂质体的组成、结构、理化性质和分类、卵磷脂和胆固醇在脂质体中的排列形式、脂质体的结构类似于生物膜，在脂质体的水相和脂质双分子层组成的膜内可以包含多种物质。 包衣物质、脂溶性药物位于双分子层脂质膜之间，两性化合物位于

6、水相和膜内部的边界磷脂中，水溶性药物包裹在水相中，不能包裹物质，不溶于水相和有机溶剂两者的物质，在两种介质中溶解性非常好的物质，脂质体的结构，单室脂质体，多室脂质体第2节脂质体的组成理化性质和分类、理化性质、相变温度、膜渗透性、膜流动性、脂质体带电性、1、相变温度(phase transition temperature，Tc )、脂质双分子层中酰基侧链的排列改变有序排列，相变温度Tc、 磷脂均具有特定的Tc值。 (2)极性基团的性质。 (3)酰基侧链的长度和不饱和度。 酰基侧链长Tc的高链饱和度Tc高，脂质体的理化性质(相变温度)高， Tc以下为“胶体状态”(脂肪链全反式，序列密集且刚性和厚

7、度增加) Tc以上为“液晶状态”(脂肪链的伸缩、弯曲、弯曲、脂质体的理化性质(相变温度)、相变温度和脂质体膜的稳定性、脂质体的理化性质(相变温度)、2、膜的透过性(1)半透过(2)膜两侧的渗透压：会导致分子量小的物质漏出和磷脂膜破裂；(3)对于在水和有机溶剂中溶解度非常高的分子，磷脂膜是非常弱的屏障。脂质体的理化性质、3 .膜的流动性Tc时膜的流动性增加：脂质体中包含的药物具有最大释放速度。 胆固醇可调节膜的流动性： a .高于Tc时，膜的流动性减少；b .低于Tc时，膜的流动性增加；4、含带电酸性脂质的脂质体为负含碱的脂质体为正电不含离子的脂质体显着的中性、脂质体的理化性质、脂质体单室(层)

8、脂质体小单室(层)脂质体(SUVs )、大单室(层)脂质体(LUVs )、1，按结构类型分类的单室(层)脂质体是由一层双分子膜构成的小泡。 小单室(层)脂质体(SUVs )最小粒径20 nm 80nm -纳米脂质体封入容积低体内循环时间长单室(层)脂质体(LUVs )一般粒径100nm 1000nm对水溶性药物的封入率高，封入容积大。 粒径大(500nm )时，膜变得不稳定。 脂质体的分类(按结构类型分类)、2多室(层)脂质体(MLVs )、双分子脂质膜和水交替形成的多层结构的小泡。 一般由5层以上的同心板构成。 少层数(24层)的也称为寡层脂质体。 粒径一般为100nm5m。 封入容积相对较

9、低。 脂质体的分类(按结构分类)，3多囊脂质体(multivescular liposomes，MVLs )由许多异心囊泡组成，每个囊泡都包含药物水溶液。 粒径是550米。 适于包裹水溶性物质。载体量比单层脂质体和多层脂质体具有更高的缓释作用。脂质体的分类(按结构)、多囊脂质体的结构、脂质体的分类、结构性能分类、特殊性能脂质体(特殊脂质材料制)、一般脂质体(一般脂质材料制)、热敏性脂质体pH敏感性脂质体包复多糖类的脂质体免疫脂质体长循环脂质体光敏性脂质体磁性脂质体； 脂质体的分类负电荷脂质体、中性脂质体、脂质体的分类、给药路径分类、静脉给药脂质体口服给药脂质体肺部吸入给药脂质体眼部给药脂质体粘

10、膜给药脂质体外用脂质体和经皮给药脂质体局部注射用脂质体(肌注、关节腔、脊髓腔、肿瘤内免疫诊断用脂质体基因工程和生物工程用脂质体、第三节脂质体的制备薄膜分散法、制造方法、反相蒸发法、溶剂注入法、冷冻干燥法、pH梯度法、前体脂质体法、干膜超声波法薄膜振动分散法薄膜均匀化法薄膜挤出法、乙醇注入法醚注入法、1 .薄膜分散法缓冲液(水溶性药物加入振荡、大多层脂质体、多层脂质体、各种机械方法分散、脂质体的制造方法、1干膜超声波校正(探针型和水浴型)超声波处理脂质体悬浮液右旋凝胶柱色谱(分离除去未包含的药物)的脂质体悬浮液2薄膜振动分散法干膜该方法是工业脂质体的制造方法(薄膜法)、脂质体的制造方法、片材、W

11、/O型乳剂、溶解于有机溶剂(氯仿、醚)、封入药物的水溶液*、胶体状态、经短时间的大单层脂质体、工艺流路、二、反相蒸镀法、三、溶剂注入法1、乙醇注入法脂质(用透析法除去残留的乙醇)优点：简单快捷，脂质浓度有限。 缺点：水相包封率极低，不易除去乙醇。 2 .乙醚注入法脂质二乙醚液细孔针逐渐向5560的缓冲液中注入二乙醚蒸发单层脂质体(直径50200nm )。 优点：脂质浓度不受限制，水相封入率高的缺点：制造时间长。 脂质体的制备方法、四、冷冻干燥法磷脂在缓冲盐溶液中高度分散的超声波处理冷冻干燥(干燥物)在含药水性介质中分散的脂质体的冷冻温度、速度及时间等因素影响脂质体的包封率和稳定性。 加入冻结保

12、护剂可以减少冻结融解过程对脂质体的损伤。 除甘露醇、d -葡萄糖外，还有pH梯度法和前体脂质体法等。 脂质体的制备方法、一、脂质体的粒径和分布脂质体的粒径的大小和分布的均匀性直接影响着脂质体在生物组织中的行为和处置。 粒径100nm、血液循环时间长的粒径200nm，血液循环时间短(容易被巨大嗜细胞作为外来异物食用)。 只适用于第四节脂质体的质量研究、检查方法、1、光学显微镜法2、电子显微镜法3、激光散射法(尘粒修正数法) 4、电感响应法(扭矩计数器) 5、光感应法(例如粒度测定器)、负染法冷冻蚀刻法、大的脂质体。 2 .电镜法采用负染法和冻蚀法用于小脂质体的分析。负染法：用溶液悬浮脂质体，样品

13、滴入有支持膜的铜网，用滤纸吸收多馀液体，滴入重金属染料，用滤纸吸收多馀液体，自然干燥30分钟，用电子显微镜观察脂质体的结构和粒径分布。 脂质体的质量研究(粒径和分布)，3，激光散射法(尘粒修正数法)将脂质体悬浮液稀释雾化，定量喷洒到修正数器散射室，自动修正数器记录各阶段粒子的粒径、数量，修正分布概率，绘制粒径分布图。 另外，电感应答法(扭矩计数器)、光感应法(粒度测定器)等脂质体的品质研究(粒径和分布)、二、脂质体的封入率(重量封入率) 1、封入率：封入脂质体内的药物量和装料量的重量百分率。 方法：测定脂质体中药量，通过色谱柱或离心分离测定不包在介质中的药量，并进行纠正。 脂质体的质量研究(包

14、封率)、包封率、脂质体中包封的药量、脂质体中包封和未包封的总药量、=、100%、2、影响脂质体包封率的因素脂质体的结构型脂质体的结构型不同，其包封率也不同。 顺序：制备用于制备LUVs (大单位) MLV (多层) SUVs (小单位)脂质体的方法的配方后，制备方法可以确定结构类型。 因此，制造方法也与包封率有关，依次通过醚注入法、反相蒸镀法、干膜法、乙醇注入法、超声波冷冻干燥法的冷冻过程使包封率降低。 脂质体的质量研究(包封率)、脂质膜的组成和电膜的组成与脂质体的结构密切相关，因此影响包封率。 在PC中加入Ch可提高包封率的脂质材料和脂质体表面的电性质对离子性药物的包封率影响很大：水相离子性

15、药物的电性质和脂质体表面的电性质相反时，由于静电键，包封率可能很高。 脂质体的质量研究(影响包封率的因素)、药物的性质和浓度膜材料的固定、制造方法固定的脂质体，其包封率由包封的药物的性质决定。 溶解性：脂溶性的药物封入率高的电气性：药物的电气性与脂质体膜的电气性相反时，药物封入率高的分子量：分子量大，小于分子量，药物封入率高的一般情况下，药物浓度增加，封入率降低。 脂质体的质量研究(影响包封率的因素)、三、脂质体的包封容积包封容积是每摩尔脂质形成脂质体后包封的溶液的体积。 测定方法：用脂质体封入水溶性荧光标记物，直接测定水相体积。 四、脂质体封入药脂的比例是指一定重量脂质中封入药物重量的比例。 脂质体质量研究、药脂包封比率、=、100%、脂质体包封剂量、处方中脂质总量、五、脂质体渗漏率显示了脂质体贮藏期间包封率的变化，是脂质体不稳定性的重要指标。 膜材中加入一定量的胆固醇