皮蛋的微生物菌相检测

1、鸡蛋的微生物菌相检查摘要：本实验的目的是检验各种品牌鸡蛋中的微生物菌落是否符合国家食品卫生标准。 结果表明，卵主要含酵母菌、细菌、乳酸菌和放线菌，其中湖北洞庭湖皮蛋、光阳皮蛋、鲁星皮蛋、鸟王皮蛋、荆门蛸龙皮蛋为1克符合国家标准的三湖松花皮蛋，湖鸭松花皮蛋和福庆成皮蛋中细菌数量超标，每克不符合国家食品卫生标准的湖鸭关键词：皮蛋细菌； 酵母菌。 放线菌。 蚁群总数目录前言11实验方法11.1设备和材料21.1.1实验材料21.1.2试剂21.1.3主要实验器具21.2牛肉糊蛋白胨培养基制备21.2.1处方及配合量31.2.2调制步骤31.3操作步骤31.3.1标本稀释及培养31.3.2浇注平板31

2、.3.3倒立培养31.4蚁群计数原则31.5集群的订正计算方法42结果和分析42.1不同品牌鸡蛋中酵母菌的菌落检测结果42.2从不同品牌的鸡蛋中怀疑乳酸菌菌落的检查结果52.3不同品牌鸡蛋中细菌菌落的检测结果52.4不同品牌鸡蛋中放线菌菌落检测结果52.5不同品牌鸡蛋中菌落总数的检验结果63结论6参考文献7谢谢9前言皮蛋有很多名称，如松花蛋、变蛋等，是中国历史悠久的风味蛋制品，不仅受到国内消费者的欢迎，而且在国际市场上也很有名。 皮蛋不仅可以作为好吃的食品，也可以作为药用。 中医认为皮蛋性凉，可用于眼痛、牙痛、高血压、耳鸣眩晕等疾病的治疗。 为检测是否符合国家食品卫生标准，我们采用最简单的方法

3、对卵微生物菌群进行生物检测1。检查微生物菌群最常见的方法是浇注平板法2，它将分离的试样用缓冲液系列稀释后，在无菌环境下将适当稀释度的少量菌悬浮液放入无菌培养皿中，立即注入溶解的培养基中，充分搅拌后，在适当的温度下培养。 最后从其内层和表面出现的多个菌落中，根据菌落的形态进行修正，有进一步精制的方法。 该方法不仅可用于菌种的分离纯化，也可用于菌落校正数3。菌落形态是判断微生物种类的主要依据4。 固体培养基表面形成的酵母菌菌落一般具有容易区别的特点，如菌落表面光滑透明、湿润、易抬高、颜色均匀、菌落质量均匀等，但因酵母菌具有细胞体积大、固体培养基不能移动等特点而培养另外，酵母菌的菌落颜色一般单一，大

4、部分呈乳白色。利用乳糖、葡萄糖等发酵性糖将这些发酵性糖转化为乳酸的无芽胞、革兰氏染色呈阳性的细菌称为乳酸菌。 常见的乳酸菌反应在宏观上表现为个体小的圆形菌落，具有直径约13 mm，稍隆起，表面光滑等特点，颜色多呈乳白色，生长缓慢6。霉菌是一种真核生物，菌落由分枝菌丝体组成，形成的菌落在培养基上主要外观干燥、不透明、大、稀疏、形态多样，不易引起菌落7。 有些霉菌丝体生长迅速，随着年龄增长形成一定的形状、结构、颜色的孢子，因此很容易鉴别霉菌。由于细菌是单细胞生长，细胞小，所形成的菌落一般也小，湿润，薄，透明，容易引起，细腻。 不同的细菌生成不同的色素，形成不同颜色的菌落。 根据细菌的不同，在生长过

5、程中也会产生很多有机酸和蛋白质分解物，集群中有很多酸味和腐烂的臭味。放线菌菌落均形态小，菌丝细致，表面呈粉状。 色彩丰富，具有不易引起和菌落边缘培养基出现凹陷状等特点。1实验方法1.1设备和材料1.1.1实验材料实验材料表品牌名称制造商福庆成皮蛋太原市福庆成食品有限公司鸟王松花皮蛋湖北神丹健康食品有限公司湖北特产洞庭湖皮蛋湖北洞庭湖湖鸭松花皮蛋湖北荆江蛋业有限公司三湖松花皮蛋高邮市三湖蛋品有限公司鲁星皮蛋鲁星蛋业有限公司荆门蛸龙松花鸭皮蛋荆门蛟龙食品有限公司光阳皮蛋福建光阳蛋业股份有限公司1.1.2试剂试剂时间表试剂名称制造商琼脂粉郑州郑亚化工产品有限公司盐酸成都化工试剂厂氯化钠成都化工试剂厂

6、胰蛋白胨杭州微生物试剂有限公司牛肉膏山东梁山科鑫生物制品有限公司氢氧化钠上海恒邦化工技术有限公司1.1.3主要实验器具主要实验器具表修正器型号制造商洁净工作台新加坡足球甲级联赛上海博信实业有限公司电热送风干燥机箱9070毫贝上海博信实业有限公司立式压力蒸汽灭菌锅日本航空上海博信实业有限公司恒温水槽HH-S6战斗机常州恒和仪器设备制造有限公司恒温恒湿孵化器LHP-160L飞弹常州恒和仪器设备制造有限公司1.2牛肉糊蛋白胨培养基的制备1.2.1处方及配合量牛肉膏0.3 g、琼脂粉1.5 g、蛋白酶1g、NaCl 0.5 g、水100 mL、pH 7.27.4。1.2.2调制步骤根据培养基配方及其必

7、要使用量分别称量各药品。 在烧杯中加入少量的水，将各培养基成分(琼脂粉除外)各加入水中溶解。 将烧杯放在石棉网上，用弱火加热电炉。 用玻璃棒继续搅拌，使各药品迅速溶解后，添加蒸馏水直至培养基的配制所需量。此时配合有微酸性的培养液，因此以1mol/L NaOH将培养液的pH调节为7.27.4。取几个三角瓶250 mL，分别加入上述制备的培养液150 mL，然后，在每个瓶中加入琼脂粉2.22.3g，进行灭菌。 将上述应灭菌的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中，将温度调节到121 灭菌20分钟5。1.3操作步骤1.3.1标本稀释及培养在无菌洁净操作台，取25 g鸡蛋，切碎放入装有少量生理盐水的研钵，充分研磨

8、后，配制1:10的均匀稀释液。 用1001000 L灭菌移液管吸引上述1:10稀释液1 mL后，将其沿着试管壁慢慢注入含有9 mL生理盐水的试管中，充分混合，制备1:100的均匀稀释液。 按照上述操作步骤，再次进行10倍增稀释液，最后稀释成1:1000的均匀稀释液。 根据对鸡蛋污染情况的估计，选用1:10皮蛋稀释液、1:100皮蛋稀释液、1:1000皮蛋稀释液作为实验适宜的稀释度。 增量稀释10倍时，将1 mL样品均匀稀释液放入无菌板中，每稀释度平行2个。 各样品实验为2个空白对照，分别取1 mL生理盐水放入2个无菌平皿即可8。1.3.2浇注平板冷却至约46 的牛肉糊培养基(放入461 恒温水

9、浴箱保温) 15 ml20 ml注入培养皿中，轻轻摇动与菌液混合。1.3.3倒置培养琼脂凝固后，翻转平板，放入温度控制在361 的恒温培养箱中培养482 h。1.4蚁群计数原则由于菌落大小不同，大的菌落可以直接用肉眼观察，肉眼无法辨别的菌落可以用菌落计数器和放大镜观察。 观察时需要记录菌液稀释倍数和相应的菌落数。 菌落校正数用菌落形成单位(colony-forming units，CFU )表示。选择生长没有扩展的菌落的平板、平板菌落数在30 CFU300 CFU之间的平板，计算菌落总数。 菌落数少于30 CFU的平板可以记录菌落总数，大于300 CFU的平板可以记录为不可数。 每个稀释度的菌

10、落数必须用两个平板的平均数记录。片状菌落生长的平板的菌落数应该是相应稀释度的菌落数，如果在培养皿上生长大片状菌落时不能采用的板状菌落的大小不到平板的一半，剩下的一半的菌落均匀生长，则可以将一个平板上的菌落数在平板上出现菌落间的模糊界线的链状生长的情况下，将每一个作为一个菌落计算。1.5集群的订正计算方法在适当的菌落总数的修正数范围内只有一个稀释度平板一致时，修正两个平板菌落数的平均值，乘以与该平均值对应的稀释倍数，将其作为每g样本的菌落总数的结果。如果菌落数都在30 CFU300 CFU之间的2个稀释度，则由其比例决定，如果两者之比大于2，则用小的数进行修正，相反，用两者的平均数进行修正。如果

11、所有稀释度的平均菌落总数小于30 CFU，则将稀释度最低的菌落总数乘以稀释倍数进行计数。如果所有稀释度的平均菌落总数大于300 CFU，则将稀释度最高的菌落总数乘以其稀释倍数进行计数。如果所有稀释度平板都没有出现菌落，则用小于1的最小稀释倍数乘以表示。 稀释倍数为10倍时，显示10。如果所有菌液的稀释度的菌落平均数不在30300之间，其中一部分小于30或大于300，则最接近的30或300的平均数乘以稀释倍数得出结论。2结果和分析2.1不同品牌鸡蛋中酵母菌的菌落检测结果不同品牌鸡蛋中酵母菌的菌落检测结果如表1所示。表1不同品牌鸡蛋中酵母菌的菌落数表1 thenumberofyeastsinall

12、brands皮蛋品牌洞庭湖皮蛋三湖松花皮蛋湖鸭松花皮蛋光阳皮蛋鲁星皮蛋福庆成皮蛋鸟王彼得荆门蛸皮蛋酵母菌的数量20520535015025015030100从表1可知，湖鸭松花皮蛋中所含酵母菌最大为350 CFU/g，其次鲁星皮蛋、洞庭湖皮蛋、三湖松花皮蛋、光阳皮蛋、福庆成皮蛋即鸟王皮蛋中所含酵母菌最小为30 CFU/g。2.2从不同品牌的鸡蛋中怀疑乳酸菌菌落的检查结果不同品牌鸡蛋中乳酸菌菌落的可疑检测结果如表2所示。表2不同品牌鸡蛋中的模拟乳酸菌菌落数表2 thenumberoflactobacillusinallbrands皮蛋品牌洞庭湖皮蛋三湖松花皮蛋湖鸭松花皮蛋光阳皮蛋鲁星皮蛋福庆成皮

13、蛋鸟王彼得荆门蛸皮蛋乳酸菌的数量2304002852001602408080从表2可知，三湖松花皮蛋中的可疑乳酸菌最多为400 CFU/g，其次湖鸭松花皮蛋、福庆成皮蛋、洞庭湖皮蛋、光阳皮蛋即鸟王皮蛋和荆门蛸龙皮蛋中的可疑乳酸菌最少为80 CFU/g。2.3不同品牌鸡蛋中细菌菌落的检测结果不同品牌鸡蛋中细菌菌落的检测结果如表3所示。表3不同品牌鸡蛋中的细菌菌落数thenumberofbacterialinallbrands表格3皮蛋品牌洞庭湖皮蛋三湖松花皮蛋湖鸭松花皮蛋光阳皮蛋鲁星皮蛋福庆成皮蛋鸟之王彼得荆门蛸皮蛋细菌数495630525445425625210240由表3可知，三湖松花皮蛋中

14、的模拟细菌最大为630 CFU/g，其次福庆成皮蛋、湖鸭松花皮蛋、洞庭湖皮蛋、光阳皮蛋、鲁星皮蛋即鸟王皮蛋中的模拟细菌最低为210 CFU/g。 并且GB 96941988表明，由于每克细菌数不高于5009，三湖松花皮蛋、湖鸭松花皮蛋、福庆成皮蛋中细菌数超过标准，不符合国家食品卫生标准。2.4不同品牌鸡蛋中放线菌菌落检测结果不同品牌放线菌菌落检测结果如表4所示。表4不同品牌卵中放线菌菌落数表4 thenumberofactinomycetesinallbrands皮蛋品牌洞庭湖皮蛋三湖松花皮蛋湖鸭松花皮蛋光阳皮蛋鲁星皮蛋福庆成皮蛋鸟之王彼得荆门蛸皮蛋放线菌数706014010140130508

15、0表4显示，湖鸭松花皮卵和鲁星皮卵中放线菌最多为140 CFU/g，光阳皮卵中放线菌数最少为10 CFU/g。2.5不同品牌鸡蛋中菌落总数的检验结果不同品牌鸡蛋中菌落总数的检测结果如表5所示。表5不同品牌鸡蛋中菌落的总数表5 thenumberofcoloniesinallbrands皮蛋品牌洞庭湖皮蛋三湖松花皮蛋湖鸭松花皮蛋光阳皮蛋鲁星皮蛋福庆成皮蛋鸟王彼得荆门蛸皮蛋蚁群总数7708951015605835905290420由表5可知，湖鸭松花皮卵中的菌落总数最大为1015 CFU/g，鸟王皮卵中的菌落总数最大为290 CFU/g。 根据GB4789.2-2010，每克鸡蛋菌落总数为100010，湖鸭松花蛋每克菌落总数超过国家食品卫生标准，不符合规