血脂检测方法及临床意义1

1、血脂检测方法及临床意义,血脂概述 血脂是血浆中的中性脂肪(甘油三酯和胆固醇)和类脂(磷脂、糖脂、固醇、类固醇)的总称，广泛存在于人体中。它们是生命细胞的基础代谢必需物质。一般说来，血脂中的主要成份是甘油三酯和胆固醇，其中甘油三酯参与人体内能量代谢，而胆固醇则主要用于合成细胞浆膜、类固醇激素和胆汁酸。,2020/8/6,1,血浆脂蛋白的分类,超速离心法 1、乳糜微粒（CM） 2、极低密度脂蛋白(VLDL) 3、中间密度脂蛋白(IDL) 4、低密度脂蛋白(LDL) 5、脂蛋白（a）LP(a) 6、高密度脂蛋白（HDL）,2020/8/6,2,血浆脂蛋白的分类,电泳法 分为乳糜微粒，前脂蛋白，脂蛋白

2、和脂蛋白 四条脂蛋白区带,2020/8/6,3,血浆脂蛋白的组成与结构,2020/8/6,4,血浆脂蛋白的组成与结构,大致为球形颗粒，由两大部分组成，即疏水性的内核和亲水性的外壳。内核由不同量的CE和TG组成，表层由载脂蛋白、PL和FC组成，FC及PL的极性基团向外暴露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。,2020/8/6,5,载脂蛋白,血浆脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白，主要分A、B、C、D、E五类，主要在肝(部分在小肠)合成，载脂蛋白是构成血浆脂蛋白的重要组分。基本功能是运载脂类物质及稳定脂蛋白的结构，某些载脂蛋白还有激活脂蛋白代

3、谢酶、识别受体等功能。主要在肝(部分在小肠)合成，按ABC系统命名，各类又可细分几个亚类，以罗马数字表示。,2020/8/6,6,高脂蛋白血症WHO分型,2020/8/6,7,引起继发性高脂血症的病因,1 、糖尿病 常表现为IV型高脂蛋白血症。（胰岛素的缺乏，不仅促使肝脏生成VLDL增加，而且因LPL活性降低，导致VLDL清除减少，主要表现为血清TG、VLDL水平升高，TG严重升高者有发生急性胰腺炎的危险性。） 2、甲减 常表现为IIa或IIb型高脂蛋白血症患者血TC水平升高可同时血TG水平升高（LPL活力降低，IDL代谢障碍、LDL受体功能下降、血浆LDL清除减慢等） 3、肾脏疾病 肾病综合

4、征时的高脂蛋白血症由脂蛋白降解障碍和合成过多双重机制引起。,2020/8/6,8,高脂蛋白血症的因素,4、药物：降压药，利尿剂，受体阻滞剂可TG 和HDL 长期应用糖皮质激素治疗可使TG、TC升高 5、其他：肝胆系统疾病、胰腺炎、长期过量饮酒,2020/8/6,9,低脂蛋白血症表现,1、家族性低-脂蛋白血症 （肝脏LDL受体上调，伴胆汁酸过度合成，使血浆中VLDL在转化为LDL前已被肝脏分解代谢。） 2、-脂蛋白缺乏血症 （ApoB合成分泌缺陷，使含ApoB的脂蛋白如CM、VLDL、LDL合成代谢障碍，伴随脂肪吸收和代谢紊乱，血浆TC也非常低）,2020/8/6,10,血脂检测方法及临床意义,

5、总胆固醇(TC) 甘油三酯(TG) 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 载脂蛋白A1(ApoA1) 载脂蛋白B(ApoB),2020/8/6,11,总胆固醇（TC）测定,化学法,酶法,化学测定法,化学测定法通常需抽提纯化。显色剂主要有两类： 醋酸-醋酐-硫酸 高铁硫酸。 这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确 测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操 作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。,特点：,1Liberman-Burchard反应,1885年Liberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，1890年Burchard用此反应测定胆固醇

6、称为L-B反应。,1953年Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，称为Zak反应。,2Zak反应,酶测定法,特点：,常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，既可以手工操作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了不同程度的基质效应。 采用酶反应原理的干化学法颇为实用，其缺点是价格高，精密度差。胆固醇的酶测定法始于70年代。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固醇的主要方法。,CHE-CHO-PAP法原理,用胆固醇酯酶水解胆固醇酯生成脂肪酸和胆固醇，胆固醇被胆固醇氧化酶氧化生成4-

7、胆淄烯酮和过氧化氢，然后在过氧化物酶催化下，H2O2与4-氨基安替比林及酚结合，生成红色醌亚胺。醌亚胺的最大吸收峰在500nm左右，吸光度与标本中的胆固醇含量成正比。反应方程式如下： 胆固醇酯+H2O 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+O24-胆甾烯酮+H2O2 2H2O2+4-氨基安替比林+酚醌亚胺,CHE,CHO,POD,评价：,主要缺点是：,优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。,某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机 溶剂配制的溶液作为TC分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准， 此校准液（品）相当于三级标准。,表面活性剂，如吐温-40可以干扰胆固醇

8、酯酶的作用，而聚乙烯醇6000 可使结果提高12；,本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。,【参考值】,血清总胆固醇合适范围： 5.22mmol/L (200mg/dl)， 边缘升高：5.235.69mmol/L(201219mg/dl)， 升高：5.72mmol/L (220mg/dl)。,影响TC水平的因素,年龄与性别； 长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高； 遗传因素； 其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。,TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化

9、和冠心病而言，TC是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈正相关。,【临床意义】,高TC血症：原发和继发,低TC血症：原发和继发,相关疾病,高TC血症有原发和继发两类，原发的如家族性高胆固醇血症，家族性apoB缺陷症，多源性高TC，混合性高脂蛋白血症等，继发的见于肾病综合征，甲减，糖尿病，妊娠等。 低TC血症原发和继发，原发如家族性无或低脂蛋白血症，继发如甲亢，营养不良，慢性消耗性疾病等。,2020/8/6,20,血清（浆）甘油三酯测定,化学法,酶法,基本操作：,化学测定法,1、抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷 脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。 2、皂化：

10、甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOH作皂化剂 3、氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4、显色：甲醛的定量主要有两种方法：,甲醛与变色酸(4，5-二羟-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物,甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶,磷酸甘油氧化酶法原理,用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中TG水解成脂肪酸和甘油，甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）将甘油磷酸化，以磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化3-磷酸甘油（G-3-P）产生H2O2，最后以Trinder反应显色，A500nm的值与TG浓度成正比。 TG+H2O甘油+脂肪酸 甘油+ATPG-3

11、-P+ADP G-3-P+O2磷酸二羟丙酮+H2O2 H202+4-AAP+4-氯酚苯醌亚胺非那腙+H2O2,2020/8/6,23,去除FG干扰可用下列方法： 1、外空白法：同时用不含LPL的酶试剂测定FG 作空白。 2、内空白法：又称两步法或双试剂法将LPL和4-AAP组成试剂2，其余部分为试剂1。,乳酸脱氢酶法,原理： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶 丙酮酸 + ATP 丙酮酸+NADH LDH NAD+ + 乳酸,由于反应消耗NADH，故可利用

12、NADH在340nm吸光度降低来 测定甘油三脂的浓度。,评价：,本法结果准确，但灵敏度较低，试剂也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了要做试剂空白外，还要做标本空白,甘油氧化酶法,第一步： FG + O2 甘油氧化酶 甘油醛+ H2O2 H2O2 + EMAE POD 无色物质 消除游离甘油的影响，3-5min后进行第二步反应： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH FG + O2 甘油氧化酶 甘油醛+ H2O2 H2O2 +4-AAP+ EMAE POD 有色化合物 注：EMAE作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。,原理：该法分两

13、步完成。,甘油三酯临床意义,原发性高TG血症多有遗传因素，包括家族性高TG血症与家族性型高脂蛋白血症等。继发性高TG血症见于糖尿病，糖原累积病，甲减，肾病综合征，妊娠，口服避孕药，酗酒等。富含TG的脂蛋白是冠心病的独立的危险因子，TG增加表明患者存在代谢综合征，需进行治疗。甘油三酯降低很少见，甲亢，肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可以见到甘油三酯降低。,2020/8/6,28,甘油三酯的参考范围,TG 0.56-1.70mmol/L 升高：1.70mmol/L,2020/8/6,29,高密度脂蛋白测定,常以测定HDL-C含量代表HDL水平。,参考方法:,超速离心分离HDL，然后用化学法（A

14、LKB法）或酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易常握。,常规方法:,1磷钨酸-镁法,2HDL直接测定法,HDL直接测定法大致分三类，分别是: 聚乙二醇/抗体包裹法 酶修饰法 选择性抑制法，又称掩蔽法，,选择性抑制法原理,分两步：第一试剂用聚阴离子及分散型表面活性剂（反应抑制剂），后者与LDL、VLDL、CM表面的疏水基团有高度亲和力，吸附在这些脂蛋白表面形成掩蔽层，但不发生沉淀，能抑制这类脂蛋白中的胆固醇与酶试剂反应。第二试剂含胆固醇测定酶及具有对HDL表面的亲水基团有亲和力的表面活性剂（反应促进剂），使酶与HDL中的胆固醇起反应,2020/8/6,32,HDL-C合适范围： 1.0

15、4mmol/L (40mg/dl), 0.91mmol/L (35mg/dl)为减低。,【参考值】,【临床意义】,流行病学与临床研究证明，HDL-C与冠心病发病呈负相关，HDL-C低于0.9 mmol/L 是冠心病危险因素。HDL-C大于1.55mmol/L被认为是冠心病的“负”危险因素。 HDL-C下降还多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血症往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-C升高。,低密度脂蛋白测定,1Friedewald公式法 LDL-CTCHDL-CTG/5（以mg/dl为单位时），或LDL-

16、CTCHDL-CTG/2.2（以mmol/L为单位时）。,2聚乙烯硫酸盐沉淀法 本法并非对LDL-C作直接测定，而是用聚乙烯硫酸（PVS）选择性沉淀血清中LDL，再以血清TC减去上清液（含HDL与VLDL）胆固醇即得LDL-C值。,3直接测定法:两类,目前各类方法测定的LDL-C值都包括IDL和LP(a)的chol在内,LDL-C合适范围：3.12mmol/L (120mg/dl)， 边缘升高：3.153.61mmol/L(121139mg/dl) 升高：3.64mmol/L (140mg/dl)。,【参考值】,【临床意义】,LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。由于TC水平

17、同时也受HDL-C水平的影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。美国国家胆固醇教育计划成人治疗专业组规定以LDL-C水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治疗目标。,脂蛋白(a)测定,Lp(a)测定有两类方法,一是以免疫化学原理测定其所含Apo(a)，结果以Lp(a)质量表示，也有以Lp(a)颗粒数mmol/L表示的。 另一类方法测定其所含的胆固醇，结果以 Lp(a)-C表示。目前大都用免疫学方法测定。,正常人群的Lp(a)水平呈明显的正偏态分布，大多在200mg/L以下，平均数在120180 mg/L，中位数约100mg/L。Lp(a)水平高于医学决定水平（300mg/

18、L），冠心病危险性明显增高。,【参考值】,【临床意义】,血清Lp(a)水平是动脉粥样硬化性疾病的独立危险因素,与动脉粥样硬化成正相关。,血清载脂蛋白测定,免疫化学法：,单向免疫扩散（RID） 电免疫分析（如火箭电泳法） 放射免疫分析（RIA） 酶联免疫吸附分析（ELISA）等,早期,目前：,目前比较适合于临床实验室的是免疫浊度法，包括 免疫散射比浊法（INA）和免疫透射比浊法（ITA）。,【参考值】：,Apo AI：1.001.60g/L，Apo B：0.601.10g/L。,【临床意义】,ApoAI是HDL的主要结构蛋白， ApoB是LDL的主要结构蛋白，因此，ApoAI和ApoB可直接反映

19、HDL和LDL的含量。在某些病理情况下，ApoAI与HDL和ApoB与LDL并非成正相关，因此，同时测定载脂蛋白及脂蛋白HDL和LDL对病理发生状态的分析很有帮助。冠心病、肾病综合征和糖尿病等都有ApoAI下降和ApoB升高。临床上常将ApoAI和ApoB比值作为冠心病的危险指标。,载脂蛋白参考值,ApoA1：1.001.5g/L ApoB ：0.81.00g/L,2020/8/6,40,糖的来源与去路,2020/8/6,41,葡萄糖的测定,葡萄糖氧化酶法（首选方法） 己糖激酶法 葡萄糖脱氢酶法,2020/8/6,42,葡萄糖氧化酶法原理,葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖水解为葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶（POD）和色素原性氧受体存在下，将过氧化氢分解为水和氧，同时使色素原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trider反应。其色泽深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。 葡萄糖+O2+H2O葡萄糖酸内酯+H2O2 2H2O2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物,2020/8/6,43,血糖的临床意义,生理性或暂时性增高：餐后，摄入高糖饮食，情绪激动等 病理性高血糖：糖尿病甲亢，肾上腺皮质功能亢进等应激性高血糖，如颅脑损伤，颅内压增高等脱水引起的血液浓缩，如呕吐、腹泻、