NFkB信号通路简介ppt课件.ppt

1、文献综述,NF-B信号通路,1,主要内容,背景介绍 IKK复合物的上游信号 IB激酶的结构和激活方式 IB蛋白的作用 NF-B的转录调节,2,一.背景介绍,1. NF-B信号通路 2. NF-B家族 3. IB蛋白家族 4. IB激酶复合物 NF-B信号通路激活对肿瘤发生 发展的影响,3,背景1,NF-B信号通路,最基本的NF-B信号通路，包括受体和受体近端信号衔接蛋白， IB激酶复合物， IB蛋白和NF-B二聚体。 当细胞受到各种胞内外刺激后，IB激酶被激活，从而导致IB蛋白磷酸化，泛素化，然后IB蛋白被降解， NF-B二聚体得到释放。然后NF-B二聚体通过各种翻译后的修饰作用而被进一步激活

2、，并转移到细胞核中。在细胞核里，它与目的基因结合，以促进目的基因的转录。,4,NF-B经典和非经典通路,NF-B的 经典信号通路和非经典信号通路的主要区别就在于： 在NF-B的 经典信号通路中， IB蛋白的降解使NF-B二聚体得到释放。 而在NF-B非经典信号通路中，则是通过P100到P52的加工处理，使信号通路激活。,5,NF-B家族,背景2,NF-B家族由P50、P52、P65、c-Rel和RelB五个成员组成。它们分别由NFKB1, NFKB2, RELA, REL和RELB基因进行编码。 它们都具有一个N端Rel同源结构域（RHD），负责其与DNA结合以及二聚化。 另外,在P65、c-

3、Rel和RelB中，存在着转录激活区域TAD，对基因表达起正向调节的作用。 P50和P52不存在转录激活区域，它们的同型二聚体可以抑制转录。,6,NF-B二聚体的存在方式,NF-B二聚体与IB蛋白结合 NF-B二聚体与DNA结合 NF-B二聚体结构 氨基末端为免疫球蛋白相似区域，对某一种形式的B位点具有选择性。 C-末端疏水区域提供NF-B各亚基之间的连接。,一般， NF-B是以二聚体的形式存在的，而它的二聚体又有两种存在方式。,7,背景3,IB蛋白家族,IB蛋白家族包括七个成员：IB、IB、 IB 、IB、Bcl-3、p100和p105 。 作用：在细胞质中与NF-B二聚体结合，并对信号应答

4、具有重要作用。 IB蛋白的结构特点：存在锚蛋白重复区域（即多个紧密相连的钩状重复序列，每个重复序列含有33个氨基酸 ）。,8,背景4,IB激酶复合物,IKK/IKK1 (CHUK) IKK/IKK2(IKBKB) 调节亚基 NEMO 在特定的NF-B 信号通路中，IKK和IKK是选择性需求的。,9,背景5,NF-B信号通路激活 对肿瘤发生发展的影响,1. NF-B信号通路激活对肿瘤发生发展的促进作用。 NF-B 所致的GADD45和（生长抑制DNA损伤基因）联合表达下调是很多肿瘤细胞逃逸凋亡机制的关键步骤。 NF-B 还可上调CyclinD1（CCNDI） 等基因的表达, 促进细胞生长。 NF

5、-B 激活对肿瘤的转移具有明显的促进作用。 2.NF- B信号通路激活对肿瘤发生发展的抑制作用。 RelA(p65) 亚基在p53- 介导的凋亡过程中具有重要作用,10,很多胞外刺激信号都可以引起NF-B 信号通路的激活,如：促炎症细胞因子TNF-、白介素IL-1 ,细菌脂多糖(LPS) ,T 细胞及B 细胞有丝分裂原,病毒双链RNA 以及各种物理和化学压力等。虽然这些胞外刺激所产生的胞内早期信号途径各不相同，但一般认为,大多数此类胞外刺激起始的信号传递反应将最终激活IKK复合物。在这个传递过程中，衔接蛋白起着重要的作用。,二. IKK复合物的上游信号,11,在很多NF-B信号通路中，许多的信

6、号中间物都是共有的，特别是IKK复合物的上游信号。不同的信号通路可利用一些共有的信号元件激活和抑制通路。 TRAFsTNF受体相关因子 IKK复合物的上游信号衔接蛋白 RIPs受体作用蛋白 TAK1TGF-激活性激酶1 IKK复合物的激酶 NIKNF-B诱导激酶,12,1. TRAFsTNF受体相关因子, TNF受体相关因子TRAFs家族成员是一大类胞内接头蛋白，能直接或间接与多种TNF 和IL-1/Toll-like 受体家族成员结合。介导多种下游信号通路的信号传导 ，其中包括NF-B 信号通路。从而影响细胞的生存、增殖、分化和死亡，并参与多个生物学过程的调控。 在几乎所用的NF-B信号通路

7、中， TRAFs都是关键的信号中间 物。 TRAF蛋白家族： TRAF蛋白家族一共有7个成员，分别是TRAF1、 TRAF2、 TRAF3、TRAF4、 TRAF5、 TRAF6、 TRAF7。,13,TRAF蛋白质在结构上具有很高的同源性，同源性一般大于30%，其特征性的结构是所有成员在羧基端都有一个C-末端TRAF结构域，即包括一个卷曲螺旋结构，介导同型和异型蛋白之间的相互作用。 另外，TRAF2-7的N-末端存在一个RING指结构，其可以作为E3泛素连接酶起作用，即将泛素转移到目的蛋白上。RING 指结构后还有5 到7 个锌指结构域,TRAF蛋白的结构,14,TRAFS的功能,1,通过T

8、RADD，TRAF2和 TNF-的受体TNFR1结合，向下传递信号，激活IKK。在此过程中，其RING指区域作为E3连接酶是必须的。但是其具体作用机制还需要深入研究。 在TNFR1信号通路中，单一的敲除TRAF2或TRAF5， NF-B信号通路的激活仍会出现。但是双敲除TRAF2和TRAF5，则会造成 NF-B信号通路中，IKK复合物的激活出现缺陷。因此，在TNFR1信号通路中，需要TRAF2和TRAF5的共同作用。,15,在Toll-likeIL-1信号通路中， TRAF6可与受体复合物发生作用，激活IKK。但是， TRAF6的E3连接酶作用机制也是需要进一步证明的。 因此，在NF-B信号通

9、路中， TRAF2、TRAF5和TRAF6在激活IKK复合物方面起着重要的作用。,2,16,另外， TRAF蛋白家族成员中， TRAF3也是较广泛的研究成员。 TRAF3是既可以介导NF-B经典信号通路，也可以介导非经典信号通路。在经典信号通路中， 其可以与受体直接作用激活IKK复合物。而在非经典信号通路中， TRAF3通过NIK（NF-B诱导激酶）激活IKK，从而激活信号通路。 在一些情况下， TRAF3可以诱导NIK的泛素化和降解，抑制信号通路的激活。但是这时候，其他 TRAF家族成员可以介导TRAF3的降解，结果造成NIK的积累和活化，促进非经典信号通路正向激活。 因此，不管在经典还是非

10、经典信号通路中， TRAF蛋白在诱导IKK激活方面发挥着很重要的作用。,17,2. RIPs受体作用蛋白, RIPs是经典NF-B信号途径中的关键的衔接蛋白。 RIPs既可以通过蛋白结合区域直接作用于信号通路的上游，也可以通过与NEMO结合激活IKK复合物。并且，在大多数的TRAF依赖型信号通路中， RIPs都被牵涉其中。 RIP蛋白家族一共有7个成员，分别为RIP1-7。 RIP蛋白的结构特征是：都具有保守的丝氨酸/苏氨酸激酶区域。,18,RIP1, RIP1具有一个死亡结构域，可以介导其他衔接蛋白和受体的死亡结构域之间的相互作用。 RIP1不仅可以招募IKK复合物，其更重要的作用是激活IK

11、K复合物。 RIP1激酶区域对IKK的激活并不是必需的，一般的作用是集合一个信号复合物元件，通过NEMO的寡聚化，和IKK的自磷酸化，诱导IKK复合物的激活。 RIP1只出现在NF-B经典信号通路中，而对于CD40或LTR介导的非经典信号通路中是不需要RIP1的。,19,RIP2, RIP2包括一个C-末端半胱天冬酶活性和招募区域（CARD），可介导受体和衔接蛋白之间的相互作用。这个CARD区域，也使RIP2在一个特殊的NF-B信号通路中起着重要的作用，即抗原受体信号通路。在抗原受体信号通路中，有着显著的CARDS作用，由于，BCL10和CARD11属于CARD包含蛋白，在抗原受体信号通路中对

12、于激活IKK有着决定性的作用。这个信号通路是需要RIP2。同样，细胞内结构识别受体NOD-LRR家族成员也属于CARD包含蛋白，也需要RIP2来激活IKK。 与RIP1相似， RIP2的激酶区域对IKK的激活也不是必需的， 在NF-B经典信号通路中， RIP2与TAK1和TRAFS作用，直接诱导NEMO的泛素化，和下游信号通路激活。,20,RIP3 在NF-B信号通路中， RIP3由于和RIP1具有同型作用基序 （RHIM），所以与RIP1具有同等功能。但是在信号通路中， RIP3的重要性远远比不上RIP1，因为当RIP3缺失时，大多数的NF-B信号通路是正常的。在特殊情况下， RIP3可能影

13、响和阻碍RIP1诱导的NF-B信号通路的激活。 RIP蛋白总结： RIP1（作为一个死亡结构域和NEMO的衔接蛋白）与RIP2（作为一个CARD到NEMO的衔接蛋白），在一些NF-B经典信号通路中扮演着类似的角色。 通过与NEMO结合，RIP蛋白招募IKK复合物。通过NEMO的寡聚化或泛素化依赖机制直接介导IKK复合物的激活。,21,3. TAK1/NIKTGF-激活性激酶1/ NF-B诱导激酶,TAK1和NIK作为IKK激酶出现在NF-B信号通路中。其中，在经典信号通路中， TAK1被涉及。而在非经典信号通路中， NIK有诱导IKK激活和P100磷酸化的作用。 TAK1 TAK1一般在RIP

14、蛋白激活IKK的信号通路中（例如：抗原受体和NOD-LRR信号通路），都要被涉及。但是其作用机制并不明确。主要表现在： 在不同的经典信号通路中， TAK1的基因被敲除， NF-B信号通路的激活会出现不同程度的缺陷。 TAK1是否作为一个IKK-K直接或通过一个媒介激酶（如：MEKK3）介导IKK的激活，这是不清楚的。 通过许多相同的信号中间物，LTR介导的IKK的激活是不需要TAK1的。 因此，对于TAK1的作用机制我们还需要更深入的研究。,22,NIK, 在RIP蛋白缺失的情况下， NIK主要负责激活NF-B的非经典信号通路。 NIK可直接磷酸化，激活IKK。 NIK受到结合的TRAF蛋白，

15、CIAP1和CIAP2（E3连接酶）的调节，当TRAF蛋白，CIAP1和CIAP2发生降解时，可导致NIK的积累和IKK的激活。 小结 在NF-B非经典信号通路中，TRAF和NIK可以不通过NEMO，充分激活IKK，从而使信号通路激活。 在NF-B经典信号通路中， TRAF和RIP蛋白，和TAK1都是必需的。,23,对于NF-B信号通路的激活，IKK是非常重要的。因此，了解IKK活性的调节已经成为掌握NF-B信号通路激活的核心。 1. IKK复合物 2. IKK的激活 3. IKK的酶作用底物,三.IB激酶的结构和激活方式,24,1.IKK复合物,IKK（又称IKK1），85kD IKK（又称

16、IKK2），87kD NEMO（又称IKK），48kD,具有较高的序列同源性和相似的结构。 在N-末端均含有蛋白激酶区,靠近中间区域的亮氨酸拉链区(LZ) 及螺旋-环-螺旋(HLH),包括大段的卷曲螺旋(coiled-coil) 及靠近C-末端的亮氨酸拉链区,虽然一些实验证明在IKK复合物中，可能会含有一些其他成分，,如IKK关联蛋白1( IKKAP1) 、促分裂原活化蛋白激酶1 (MEKK1) 、NF-B 诱导激酶(NIK) 及调节蛋白IKAP 等，但是需要进一步的证明。,IKK复合物的组成：,25,IKK复合物各组分的作用,IKK：在经典的NF-B信号途径中， IKK并不是必需的。 它在N

17、F-B 受体活化因子( receptoractivator of NF- B ,RANK) 引起NF-B 活化转导途径及NF-B 活化 变更途径中是必需的。IKK的缺失可导致许多发育 上的缺陷。 IKK：IKK是促炎症反应因子刺激诱导NF-B 的激活的主 要激酶。IKK缺陷的细胞对TNF和IL-1 等刺激不会 引起NF-B 的活化。IKK的活化是避免因局部缺血或 充血引起严重炎症反应而导致多组织功能丧失所必需的。 NEMO：在经典的NF-B信号通路中， NEMO是必需的。 NEMO 可能通过与IKK和IKK的直接作用而介导IKK复合物的 组装, 并且还能促进IB 蛋白与IKK激酶复合物的相互作

18、 用。,26,IKK复合物的组装,IKK、 IKK和 NEMO共同组成了IKK复合物(NEMO2IKK1IKK1)2。 IKK和 IKK可通过亮氨酸拉链区域形成二聚体，即IKK：IKK异型二聚体。其实IKK和 IKK也具有其同型二聚体，但是在正常情况下很难存在。 通过IKKC-末端的NBD区域，IKK和 IKK可与NEMO结合，结合的部位是第一个卷曲螺旋结构的47-80残基。其中， IKK与NEMO结合的亲和力要高于IKK。,27,虽然， IKK复合物的核心构成只包括IKK/ IKK/ NEMO，但是其中还有两个很重要的特征需要我们注意： 激酶伴侣蛋白HSP-90/Cdc37。研究证明，伴侣蛋

19、白HSP-90是与IKK复合物结合的，同时伴侣蛋白HSP-90的抑制物会抑制IKK复合物的激活，因此，可以说IKK复合物的激活是需要HSP-90的。由于HSP-90还与NF-B信号通路中的其他激酶结合，Cdc37已经渐渐取代了HSP-90在IKK复合物的激活中发挥作用。 ELKS（转录激活因子ETS样蛋白）。其作为一个IKK复合物的调节成分。但是其对IKK复合物的重要性还需要进一步证明。,28,2.IKK的激活,IKK复合物的激活首先是需要IKK亚基的T环丝氨酸的磷酸化。但是目前这种磷酸化的机制并不明确。其中，IKK的磷酸化位点是丝氨酸177和181， IKK的磷酸化位点是丝氨酸176和180

20、。另外，激活的T环丝氨酸如果突变成谷氨酸则会产生IKK激活，而突变成丙氨酸则会取消信号应答。 IKK复合物的激活中一个普遍的元素是：对TRAF家族成员的需要和诱导TRAF的寡聚化从而向下传递信号。这说明信号复合物的集合对于IKK的激活的重要性。 NEMO的C-末端区域介导IKK的激活。被RIP1介导的NEMO的可诱导的寡聚化被认为可以激活IKK，并且这一点已经得到了证明。 但是，根据以上的发现，我们并不能得到IKK激活的具体机制。,IKK激活需要的条件,29,最近的一些发现为我们在研究IKK的激活的机制上提供了线索： ,在 酵母中，野生型的IKK表达的激酶活性被NEMO的共表达所提高，而那些T

21、环被突变成谷氨酸的IKK，其活性也很高，但是其活性不会随着NEMO 的共表达发生变化。,说明：IKK的激酶活性被NEMO所提高，是通过IKK的T环磷酸化促进而发生的。,研究发现，反式自磷酸化作为NEMO和IKK的一种本能的高次结构构成结果而发生，其展开的分子量近似激活的IKK。,说明：反式自磷酸化可能是IKK激活的主要机制。,IKK的NBD区域的丝氨酸残基的磷酸化，可以抑制IKK的活性，和阻止通过与NEMO的共表达而发挥作用的IKK活性的增加。,说明：NBD/NEMO之间的作用对于NEMO介导的IKK激活很重要。,IKK激活机制的探索,因此，我们可以知道在IKK激活中，反式自磷酸化是主要的作用

22、机制。,30,IKK激活途径可能是一个反馈调节的重要机制。接受刺激后，NEMO与IKK的结合区域被磷酸化，磷酸化位点为丝氨酸68。这个磷酸化可诱导NEMO二聚体的分离，和阻碍IKK与NEMO之间的相互作用，从而终止信号通路。这种构象的变化可被伴侣分子HSP-90或IKK复合物的磷酸化酶所识别，通过HSP-90或者NEMO在丝氨酸68的脱磷酸化的作用，可以使IKK复合物恢复活性。 根据以上的研究发现，IKK的激活模型被提出。（见下页）,IKK激活的反馈调节,31,IKK的激活模型,1.在静息状态下，(NEMO2IKK1IKK1)复合物中，IKKs通过与NEMO相互作用而被抑制。 2.在有刺激物的

23、情况下，NEMO结合一个RIP蛋白（NEMO泛素化），使IKK的蛋白激酶区域暴露，诱导T环丝氨酸残基的反式自磷酸化或者由IKK-K磷酸化T环丝氨酸残基。 3.被激活的IKK可磷酸化下游的酶作用底物（如IB s），从而激活NF-B信号通路。 被激活的IKK还可磷酸化IKK的丝氨酸740和NEMO的丝氨酸68,使得NEMO二聚体与IKK的分离,阻止激酶的反复激活。 4. Cdc37/HSP-90（伴侣分子）和 PP2A/PP2C（磷酸化酶）可以介导IKK复合物的重组。,32,小结,在NF-B信号通路中，寡聚化的出现是一个共有的主题。 TRAF蛋白的寡聚化使其可以顺利向NF-B信号通路下游传递信号。

24、 RIP蛋白的寡聚化在NF-B经典信号通路中是必需的。其与NEMO相互作用诱导IKK复合物的积聚。 NEMO的寡聚化/泛素化在激活NF-B信号通路中也是很重要的。 同时，NEMO的泛素化在DNA损伤反应中也很重要。,33, 一个复杂的NF-B信号通路中，对于IKK的激活，是需要上游信号元件的寡聚化和泛素化。 但是，在非经典信号通路中，RIP介导的NEMO的寡聚化不会发生，IKK是通过NIKS直接介导T环磷酸化所激活的。IKK对于NEMO的低亲和力也促使NIK进入IKK的T环发挥作用，而不是IKK。 IKK的激活是一个短暂事件，其从属于反馈调节机制。 多数的反馈调节机制作用于上游信号元件，其中作

25、用最显著的是脱泛素化酶A20和CYLD。 IKK的C-末端NBD的磷酸化也是一种重要的反馈调节环的元件。 蛋白磷酸酶2A（PP2A），也可以通过转移T环磷酸化来阻碍IKK的激活。,34,3.IKK的酶作用底物, 自由的IB家族成员： IKK、IKK可磷酸化IB丝氨酸32、36和 IB的丝氨酸19、23。其中，作为IKK的酶作用底物， IB要优于IB。大多数情况下，IB降解速度比IB慢。 IKK可以磷酸化P100的丝氨酸672。 与NF-B结合的IB： 是一种更好的IKK的酶作用底物。,35,IB蛋白的主要作用是掩盖NF-B的核定位信号，阻止其入核，及其与DNA的结合，使NF-B以非活化形式存在

26、于细胞的胞质中 。因此，对于研究NF-B信号通路来说， IB蛋白的研究很重要。 典型的IB蛋白IB, IB和IB 前体IB蛋白p100 和 p105 非典型的IB蛋白IB 和 Bcl-3,四.IB蛋白的作用,36,IB IB IB,1.典型的IB蛋白,三种经典的IB蛋白，它们有其各自唯一的功能特征。另外，在应激反应引起的经典NF-B信号通路中，这三种类型的IB蛋白都是必需的。,在三种经典的IB蛋白中，IB是NF-B活化过程中最强的负反馈因子,保证NF-B 活化的迅速发生和关闭;而IB和IB则能缓冲系统活化的波动趋势从而使NF-B 保持一个相对较长的响应时间。 IB、IB专一性抑制含有RelA和

27、c-Rel的二聚体。,37,IB蛋白家族最广泛的研究成员：IB,IB是IB蛋白家族最经典的成员。 在NF-B信号通路中， IB可以与最普遍的NF-B二聚体P65：P50结合，防止其入核及与DNA结合。因此，在IB缺失的情况下，已激活的NF-B信号通路的终止是显著推迟的。 IB与P65:P50异源二聚体结合后，只掩饰P65的核定位序列（NLS），而P50的NLS则暴露。P50的NLS与IB的核导出序列（NES）结合，使IB与NF-B二聚体的复合物在细胞质和细胞核之 间穿梭运动。 当经典信号通路激活的时候， IB迅速降解，释放出多个NF-B二聚体。 在非经典信号通路中， IB一般不是必需的。,38

28、,IB和IB, IB的表达最初是在造血细胞中发现的，与IB相比，其降解和再合成具有明显的延迟现象。它的降解依赖于IKK复合物，它的表达受到NF-B的调节。 IB的功能目前还没有确定，它的缺失并不能显著影响NF-B信号通路。最近的研究表明， IB可能在细胞核中起调节NF-B二聚体与B位点结合的作用。但是这一结果需要进一步验证。,39,2.前体IB蛋白p100 和 p105,p105 p105作为一个IB蛋白，可以被已激活的IKK复合物诱导降解。 p105通过20s蛋白酶体加工处理后形成p50，在此过程中，发生在翻译阶段。不需要SCF -TRCP。 另外， p105基因3端也可以编码一个独立的调节

29、因子IB。,SCF复合物（ Skp1、Cdc53/Cullin和F-box蛋白质）是泛素-蛋白酶系E3中的组成之一。-TRCP（-transducin repeat-containing protein，转导重复相容蛋白）作为F盒蛋白的一员，特异识别磷酸化的IB和-catenin，介导后者经泛素-蛋白酶复合体途径降解。,40,p100, p100主要出现在非经典通路中，在其加工过程中需要IKK和 SCF -TRCP，最后被降解成p52 。因此，p100加工处理成p52的过程是一个包括磷酸化和泛素化的受调控的过程。 p100是RelB的唯一调节因子，因为包含RelB的NF-B二聚体只结合p100

30、。 p100也可以作为传统的IB蛋白，调节p65包含的IKK下游复合物的活性。同时，其也可以限制p65的NF-B活性，起反馈调节的作用。 因此， p100可以对NF-B的活性有正向和反向的调节。,41,因此， p100对于NF-B信号通路的调节是很重要的。 P100具有选择性调节特殊的NF-B复合物的功能。 p100作为IB蛋白，在特殊的NF-B信号通路的下游区域发挥作用。 p100具有特殊NF-B二聚体的基础活性的调节功能。,P100加工处理成p52的过程,P100： RelB异源二聚体,IKK,SCF -TRCP,导致P100的泛素化,使P100磷酸化，磷酸化位点:丝氨酸866、870、8

31、72,形成P52：RelB异源二聚体，从而激活NF-B信号通路。,42,3.非典型的IB蛋白IB 和 Bcl-3,Bcl-3 Bcl-3伴随着p50和p52构成的同型和异型二聚体在细胞核中被发现 的。 p50同型二聚体可以与目标DNA的B位点结合，从而抑制NF-B 信号通路。Bcl-3有两种作用方式：可以通过从B位点转移p50同型二聚体的方式，介导转录抑制物的释放， B位点暴露，从而激活NF-B 信号通路。 也可以稳定p50同型二聚体，和阻止p65、p50或者其它含有TAD的二聚体进入B位点的方式，抑制信号通路。 Cyclin D1是一种Bcl-3调节基因。 去泛素化酶CYLD，可以通过阻止B

32、cl-3在细胞核积累，及其与p50，p52同型二聚体的共激活作用，来反向调节Bcl-3功能。 Bcl-3也可以通过在正常或者癌细胞中增强Hdm2基因的表达，来调节p53。,43,IB, IB与Bcl-3较为相似，与其他的IB蛋白只有较弱的同源性。 IB在IL-1 和 TLR4诱导的NF-B反应中表达上调，并且其表达主要集中在细胞核中。 NF-B激活的通路中， IB可以被诱导表达。其一旦表达，会直接和p50同型二聚体结合。可以说， IB是作为p50同型二聚体的一个共激活因子起作用的。 IB也可以反向调节包含p65的NF-B复合物。 因此，可以说， IB也可以选择性的抑制和激活NF-B信号通路。,

33、44,小结,通过对IB蛋白的深入讨论，我们感觉，仅仅把IB蛋白作为NF-B信号通路的抑制因子已经不太恰当了，因为IB蛋白也可以作为NF-B信号通路的辅助因素，选择性的与各种NF-B二聚体发生作用。尤其是非典型的IB蛋白，这种作用更加明显。 所以说，对于经典的IB蛋白的作用主要是与NF-B二聚体结合，阻止其入核，与DNA结合，从而抑制NF-B信号通路。而对于非典型的IB蛋白来说，其可以选择性的激活或者抑制NF-B信号通路。,45,随着NF-B信号通路的深入研究，人们渐渐将重点转移到NF-B的转录调节是怎么样开始和终止的。 1. 共激活因子的调节 2. NF-B信号通路的终止,五.NF-B的转录调

34、节作用,46,1.共激活因子的调节,现以P65：P50为例，来说明NF-B的转录调节。 NF-B转录调节中的激酶： PKA（蛋白激酶A），存在在一个带有细胞溶质NF-B： IB的复合物中，随着IB的降解，其在细胞质中磷酸化P65，磷酸化位点是丝氨酸276。这个磷酸化可以促进P65和转录辅助激活因子CBP（-cAMP反应元件结合蛋白）/P300的相互作用。 MSK1和MSK2（分裂素和压力激活激酶 ），可在细胞核中磷酸化P65的丝氨酸276. MSK1、MSK2与PKA享有共同的酶作用底物，即特异性的P65。但是其具体作用机制还需要进一步证明。,47,P65的磷酸化调节, PKA在细胞质中磷酸化

35、P65的丝氨酸276。 MSK1和MSK2在细胞核中磷酸化P65的丝氨酸276。 IKK和IKK可磷酸化P65的丝氨酸536。 P65的丝氨酸529可以被CK2（蛋白激酶）诱导磷酸化。 PKC能磷酸化P65的丝氨酸311。 由此看来， P65的磷酸化位点主要发生在两个区域：一个是RHD的二聚体化的功能域（包括丝氨酸276和311），一个是C-末端TAD区域（包括丝氨酸529和536）。 这些磷酸化中的每一种都可能有助于通过诱导构象变化促进CBP/P300与P65的结合。从而完成P65的激活。,48,P65的乙酰化调节,P65的乙酰化发生在细胞核中，可能被CBP/P300和结合的HATS（组蛋白

36、乙酰转移酶 ）诱导，乙酰化的位点是P65的赖氨酸310。P65的乙酰化使其和IB的结合作用大大减弱，促进转录活性。但是其在核内可以被HADC3（组蛋白去乙酰化酶）脱去乙酰基，从而促进P65和IB的有效结合，形成的复合物在CRMI（核质运输蛋白）的协助下被排出核外，终止转录活性。 因此，P65的乙酰化可增强目的基因转录活性。,49,P65的乙酰化需要两个基本条件：, P65的磷酸化对于赖氨酸310的乙酰化是必需的。 丝氨酸276磷酸化的缺乏或过表达具有催化活性的PKAC，会阻碍赖氨酸310的乙酰化。 丝氨酸536的磷酸化也可以显著增加赖氨酸310的乙酰化。 IKK通过SMRT的磷酸化促进赖氨酸310乙酰化，导致HDAC3从SMRT辅阻碍物复合物的转移。 另外， IKK还可以磷酸化CBP共激活因