许SLE的开题报告.ppt

1、凉血化瘀方治疗系统性红斑狼疮的实验研究,导 师：金实教授 汪悦教授 研究生：许 文 亚,一课题的研究背景 二课题研究的目的及主要内容 三完成课题的条件及预期结果 四 课题研究的进度和具体安排,课题的研究背景,SLE是以全身免疫异常而致多器官受累为特征的疾病，发病机制复杂，免疫紊乱严重。目前西医治疗主要使用激素及免疫抑制剂，长期或大剂量使用可能会带来严重副作用。而中药有增效减毒的作用。本研究中药凉血化瘀方以“瘀热相搏”为理论基础组方，切合狼疮急性期的关键病机，临床疗效确切。本实验将进一步研究其治疗机制，并寻找“瘀热”相关的临床客观指标。,课题研究的目标,通过MRL/lpr狼疮鼠模型，进一步了解清

2、热化瘀方药对系统性红斑狼疮的疗效，治疗机制及毒副作用。 寻找与瘀热相关的实验室指标.,课题研究的主要内容,理论研究 1.什么是瘀热相搏证 2.瘀热相搏是狼疮急性期的病机关键 实验研究 凉血化瘀方对狼疮鼠免疫学指标及病理改变的影响。,什么是瘀热相搏证,瘀热相搏证的概念 瘀热相搏证的界定 瘀热相搏证病理机制 瘀热相搏证的临床表现,瘀热相搏与系统性红斑狼疮,瘀热是系统性红斑狼疮活动期的关键病理机制 系统性红斑狼疮“瘀热”的临床表现及现代研究,研究的优势条件 及可行性,查阅文献及临床实践可知中医药对系统性红斑狼疮的治疗有增效减毒的作用。 狼疮活动期“瘀热”是其关键的病理机制，凉血化瘀方治疗系统性红斑狼

3、疮临床疗效确切。 南京中医药大学实验室及江苏省中医院具备课题实施的必要设备及条件。 本研究具备一定科研经费。,实验研究基本思路 动物造模,给药,资料汇总与统计分析,相关指标测定,研 究 如 何 实 践 ？,实验目的,通过MRL/lpr狼疮鼠模型，进一步了解凉血化瘀方药对系统性红斑狼疮的疗效，治疗机制及毒副作用 寻找与瘀热相关的实验室指标.,实验小鼠及分组,购置MRL/lpr种鼠36只，均雌性。由上海史克莱公司从美国Jackson实验室引种。根据随机数字表随机分为中药组9只，西药组7只，中西医结合组7只，模型组7只。阴性组6只。,实验药物,.中药基本方：水牛角15g、制大黄6g、赤芍10g、紫草

4、10g、生地15g、玄参12g等共12味中药，中药煎剂来自南京中医药大学第一临床医学院科研中心。每毫升含生药0.73g。,. 西药: 强的松 C T X,实验方法,实验动物造模后,观察各组小鼠每日的生命体征变化. 各组小鼠12周龄时开始灌药。中药根据每只老鼠的体重计算给药剂量，平均0.6ml/d。1次/日。疗程为50天。 西药予相当于成人剂量强的松0.5mg/KG/d,CTX10mg/Kg/d腹腔注射连用两天。模型组每日灌生理盐水0.6ml,阴性组不灌药。 用药前检测24小时尿蛋白定量（以后每3周查一次）。灌药50天后，查尿常规，大便常规， 24小时尿蛋白定量,眼眶取血，并做肝肾功能,血沉,

5、及ANA, 抗dsDNA及IL-1，IL-6，TNF-，抗C1q抗体及PDGF检查。处死小鼠，取肾脏及血管作病理检查并取肾组织做免疫荧光检查（IgG、IgA、IgM）。,小鼠与人用药量换算：动物与人体的每公斤体重剂量折算系数表示20g小鼠是60kg成人的9.01倍。,标本采集及检验,血标本 病理标本,血标本采集及检验,摘眼球取血。血液静置1小时后，3000转/分离心6分钟。取血清。血清ANA ,抗dsDNA, TNF-，IL-1，IL-6,抗C1q抗体水平及PDGF的检测,采用小鼠检测EL ISA 试剂盒,检测步骤按说明书进行。,病理标本采集及检查,病理检查：将小鼠脱臼处死,迅速取出肾脏,固定

6、于10%的甲醛溶液中。对肾脏石蜡切块进行常规HE 染色和Masson 特殊染色,观察不同组别肾脏的病理改变。参照2003年ISN /RPS的LN病理分型标准对光镜所见肾脏病变的活动性及慢性化程度依Austin肾脏病理评分表标准计算半定量积分。,免疫荧光病理方法：肾组织经OCT包埋后,采用低温冰冻切片,切片厚为4m ,用4 丙酮固定10 min ,PBS 洗3 次,滴加异硫氰荧光素标记的兔抗人IgG、IgA、IgM等荧光抗体 ,置于37 孵育30 min , PBS 洗3次,甘油封片,置于4 冰箱内待检。由专人在荧光显微镜下观察IgG、IgA 、IgM，C3等荧光抗体在肾脏中沉积的部位和特点,并

7、根据荧光强度进行半定量分析。,统计处理：,SPSS14.0统计软件 计量资料用均数加减标准差（xs）两组间计量资料比较采用t检验，计数资料采用X2检验，等级资料用Ridit分析。,预期结果,比较中药组或中西药组与模型组及单用西药组在狼疮鼠体重下降,蛋白尿，尿常规,ESR,肾功能,抗C1q抗体及肾脏与血管病理等方面指标的差别,显示本方剂对狼疮的治疗作用。根据大便常规，尿常规，肝功能等了解本方毒副作用。观察抗C1q抗体及PDGF等的变化以初步了解本方部分作用机制。 通过对中药组及模型组各指标的统计分析，治疗后有明显差别的指标初步考虑与“瘀热”相关。,课题研究进度和具体安排,200912009.5 收集古典医籍及现代论著，学术论文。对文献资料进行研究分析，完成理论研总结。 2009.