生化实验绪论.ppt

1、生化教研室文建雷,文建雷：生命学院生化教研室 备课室：生命学院楼436 电话邮箱：W,生化教研室文建雷,生化实验技术,理论部分：(8学时) 1、离心技术 2、层析技术 3、电泳技术 4、核酸及蛋白质研究技术,生化教研室文建雷,实验部分：（32学时） 1、表达GFP质粒的提取及双酶切 2、琼脂糖电泳 3、化学转化法感受态细胞的制备、转化及GFP表达菌的筛选 4、表达菌的扩大培养和诱导表达 5、细胞的超声波破碎及硫酸铵分级沉淀 6、透析、柱层析分离GFP 7、SDS-PAGE测定GFP分子量,生化教研室文建雷,实验课的考核方式：考查 实验课成绩评定：平时成绩占30%，包括

2、课堂知识掌握情况等；实验成绩占70%，包括实验操作、实验报告等。,生化教研室文建雷,实验课报名要求： 将你的姓名、学院、学科专业、实验课时间发到 实验课安排在北校区8号楼7层，从第3周开始，每周15下午，根据你的情况选择上实验课时间。,生化教研室文建雷,生物化学实验技术是生物化学的基本组成部分，也是生物化学建立和发展的基础。 生物化学技术促进了生物学科的建立和发展。揭示了许多生命现象的本质；推动了工业、农业和医疗等的发展。,生化教研室文建雷,生物化学实验中，生物分子在溶液进行的生物化学过程与生物化学变化不能直接被观察，需用各种技术和方法来监测生物化学过程。,生化教研室文建雷,生物化学技术的发展

3、趋势：仪器分析技术趋向综合化；分离提取技术趋向快速高效和超微量；生物大分子结构分析趋向高精确度、高分辨率。 技术发展迅速：离心技术、层析技术、电泳技术、同位素示踪、HPLC、红外、紫外、圆二色等光谱技术、核磁共振技术、氨基酸分析仪、DNA序列测定仪、DNA合成仪、高效毛细管电泳技术、PCR等。,生化教研室文建雷,基本内容： 生物化学实验方法和技术原理，如：生化分离方法、生化分析方法和生化制备方法等。 生化实验：基本实验和综合实验。,生化教研室文建雷,课程要求：掌握生化实验方法和技术原理；熟练生化实验的基本操作规程。 目的：获得实验知识和实验技能，为将来的毕业论文和科研奠定基础。,生化教研室文建

4、雷,通过生物化学实验应该做到 学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，合理地组织安排实验步骤和时间。 学会使用各种生物化学实验仪器。分光光度计、离心机、核酸蛋白检测仪、酸度计、电泳装置等。,生化教研室文建雷,观察记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，培养严谨细致的科学作风。 掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术。,生化教研室文建雷,实验记录,实验前应预习实验，在记录本上写好实验预习报告， 包括详细的实验操作步骤和数据记录表格等。 及时准确地记录所观察到的现象和数据，做到公正客观。 详细记录实验条件、生物材料的来源、形态特征、选用的组织及其重量等；试剂的规格等。,生化

5、教研室文建雷,实验报告,实验报告是实验的总结和汇报，通过实验报告的写作可以分析总结实验的经验和问题，学会处理各种实验数据的方法，加深对有关生物化学与分子生物学原理和实验技术的理解和掌握，同时也是学习撰写科学研究论文的过程。,生化教研室文建雷,实验报告格式 实验目的 实验原理 仪器、试剂和实验材料 实验步骤 数据处理 结果讨论,生化教研室文建雷,为了使实验结果能够重复，必须详细记录实验现象的所有细节，仔细观察实验现象常常引起意外的发现，报告并注意分析实验中的真实发现，这是非常重要的科学研究训练。,生化教研室文建雷,实验报告使用的语言应简明清楚，实验数据尽可能整理成表格并作图表示。 实验结果的讨论

6、要充分，尽可能多查阅一些有关的文献，运用己学过的知识和生化原理进行深入探讨，提出自己独特的分析和见解，可对实验提出改进意见。,生化教研室文建雷,实验室规则,实验前应预习实验内容，明确实验原理、目的和要求，写出实验预习报告。 按照实验步骤和操作规程进行实验。若有改进和设计新的实验方法，需经教师同意。 保持实验台面、水池和所用实验仪器的整洁。试剂取完后立即放回原处。节省使用试剂和无离子水。如Sephadex凝胶和DEAE纤维素等，用后必需回收。,生化教研室文建雷,做好实验记录，及时整理数据，按时上交实验报告。 仪器使用应遵守操作规程，仪器发生故障或损坏应立即报告教师，不得自己随意检修。,生化教研室

7、文建雷,实验过程中注意安全。可能存在的危险：着火、爆炸、中毒、化学灼伤、触电和割伤。实验室内严禁吸烟、吃喝。 值日生做好实验室的清洁工作。检查并关好水、电、门、窗。,生化教研室文建雷,仪器清洗 移液器 缓冲液 纯水,生化教研室文建雷,磷酸盐缓冲液 磷酸钠盐在低温时难溶，但配制SDS-PAGE的缓冲液时，只能用钠盐。 优点：易配制成各种浓度的缓冲液；适用的pH范围宽；pH受温度的影响小；缓冲液稀释后pH变化小。 缺点：易与Ca2+、Mg2+及重金属离子生成沉淀；会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。,生化教研室文建雷,Tris-HCl缓冲液的优点：对生物化学过程干

8、扰小，不与Ca2+、Mg2+及重金属离子发生沉淀。 缺点：缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大；温度效应大。易吸收空气中的CO2。对某些pH电极发生一定的干扰作用。,生化教研室文建雷,无离子水是通过聚苯乙烯磺酸型强酸性阳离子交换树脂和聚苯乙烯季胺型强碱性阴离子交换树脂进行离子交换生产的。 树脂中的低分子有机化合物可能溶于水造成有机物污染，有可能干扰生化实验中的某些反应，也会使水的紫外吸收增加。对紫外吸收要求严格的实验，应选用蒸馏水。,生化教研室文建雷,蒸馏水制备多采用石英管加热的硬质玻璃蒸馏水器。在蒸馏水器中加入高锰酸钾1g/L和85的磷酸1ml可除去有机物。制备不含金属离子的水需用亚沸蒸馏水。 实验中按照排除干扰物质的类型选用水的种类，如：无离子水、普通蒸馏水、二次蒸馏水、亚沸