各种同工酶的染色方法

1、各种同工酶的染色方法一、淀粉酶(1)、制胶方法：分离胶(6%):分离胶储存溶液：2.95毫升三柠檬酸(ph 8.9):10.95毫升2%硫酸钠：0.4毫升1%过硫酸铵：0.4毫升TEMED:20 L制备方法：分离胶储存溶液(30r-0.8%双储存溶液):30 g Acr 0.8 g双称蒸馏水50毫升(可加热溶解)固定溶液至1000毫升(pH 4.85.1，可在冰箱中储存2-3个月)Tris-柠檬酸(pH 8.9):加入15.5克tris-1g柠檬酸(C6H8O7H2O)溶解在蒸馏水中，并将pH调节至8.9(用1摩尔/升氢氧化钠或1摩尔/升盐酸调节)，最后将溶液固定至1000毫升，用滤纸过滤并储

2、存在冰箱中。2% Na2SO4:将1 g Na2SO4重量的蒸馏水溶解至50毫升，可在冰箱中储存1个月。1%过硫酸铵：将0.5 g过硫酸铵加入蒸馏水中溶解至50毫升，可在冰箱中储存一周。浓缩胶(3%)分离胶储存溶液：2.0毫升三柠檬酸(ph 6.8): 2.0毫升2%硫酸钠：0.2毫升蒸馏水：14.8毫升1%过硫酸铵：0.6毫升TEMED: 30 L制备方法：浓缩胶水原液：与分离胶水原液相同。Tris-柠檬酸(pH 6.8):加入1.55克tris 0.1g克柠檬酸(C6H8O7H2O)溶解于蒸馏水中，调节pH至6.8，最后将溶液固定至100毫升，用滤纸过滤后储存在冰箱中。染色方法：1.1%的

3、可溶性淀粉(确保在沸水中煮沸，直至其无色、透明且无沉淀)，并将其均匀涂抹在塑料板表面。静置1小时。2.用0.15毫升/升HAc缓冲液(pH 5.0)洗掉橡胶板表面剩余的淀粉，然后加入100毫升0.15摩尔/升HAc缓冲液(pH 5.0)，在培养箱中保持温度在371.5小时。3.加入10毫升彩色碘溶液，蓝色背景上出现白色透明、粉红色、红色或棕色条带，称为淀粉酶。制备方法：1%可溶性淀粉：将0.1 g可溶性淀粉溶于ph值为8.9的10ml Tris-柠檬酸缓冲液中，在水浴中煮沸，并搅拌至完全透明，无沉淀：该试剂应与其一起使用。0.15毫升/升醋酸缓冲液(pH 5.0):称取11.9克醋酸，加入蒸馏

4、水溶解，用冰醋酸调节pH5.0，最后加入蒸馏水至1000毫升。显色碘溶液：称取15.8克碘化钾，加入10克碘溶液中(先用95%乙醇溶解)，最后加入蒸馏水至1000毫升，稀释20倍。(3)、保存溶液：固定液：冰醋酸：甲醇：水=40 : 100 : 320(4)、电极缓冲液储存：使用低离子强度的电极缓冲液，称取6.2克Tris，加入2.0克Gly，加入蒸馏水至恒量1000毫升，稀释5倍，酸碱度为8.7。 2%溴酚蓝溶液：称取1.0 g溴酚蓝，加入蒸馏水至50毫升。第二，过氧化氢酶：(1)、制胶方法：分离胶(7%，20毫升)分离胶储存溶液：4.5毫升1摩尔/升三盐酸(pH8.8):7.5毫升重蒸馏水

5、：7.5毫升1%过硫酸铵：0.5毫升TEMED:35微升制备方法：分离胶液：同上1摩尔/升Tris-HCl(pH8.8)缓冲液：称取121.14克Tris，放入1000毫升烧杯中，加入800毫升蒸馏水溶解，用浓盐酸调至pH8.8，倒入1000毫升容量瓶中，定容至1000毫升，用滤纸过滤，在冰箱中储存3个月。胶水浓缩物(4%，10毫升)分离胶储存溶液：1.3毫升1摩尔/升三盐酸(pH6.8):1.3毫升重蒸馏水：6.4毫升1%过硫酸铵：1.0毫升TEMED:10.0微升制备方法：浓缩胶水原液：与分离胶水原液相同。1摩尔/升Tris-HCl(pH6.8):称取12.114克Tris，放入100毫升

6、烧杯中，用蒸馏水溶解，用浓盐酸调至pH6.8，倒入100毫升容量瓶中，定容至100毫升，用定性滤纸过滤，并在冰箱中储存3个月。染色方法：1.用蒸馏水冲洗电泳板1 2次，然后用0.3% H2O2溶液100毫升浸泡1 5分钟，浸泡过程中不断摇动染色板，使其浸泡均匀。2.浸泡后，倒出过氧化氢溶液，用蒸馏水冲洗橡胶板1 2次。然后，用100毫升4%可溶性淀粉溶液(最好在染色前一天制备)浸泡橡胶板1小时。3.浸泡后，倒出淀粉溶液，用蒸馏水冲洗橡胶板1 2次4%可溶性淀粉溶液：将4克可溶性淀粉溶于100毫升pH8.8的三盐酸缓冲液中，在水浴中煮沸至透明无色。2%铁氰化钾：将2 g铁氰化钾溶于100毫升。2

7、%氯化铁：将2克氯化铁(3.33克氯化铁)溶解至100毫升。保存液：重蒸馏水可直接使用。(4)、电极缓冲液：称取141.2克甘氨酸，加入30克Tris，加入蒸馏水至1000毫升的恒定体积，制备储备溶液，将其稀释25倍，pH值为8.3。第三，苹果酸脱氢酶(1)、制胶方法：分离胶(7%)分离胶储存溶液：6.8毫升1摩尔/升三盐酸(pH8.8):22.4毫升1%过硫酸铵：0.8毫升TEMED:40微升制备方法：0.3%过氧化氢：1毫升30%过氧化氢，加入蒸馏水至100毫升。浓缩胶(3%)分离胶储存溶液：4.0毫升1摩尔/升三盐酸(pH6.8):4.0毫升重蒸馏水：30.8毫升1%过硫酸铵： 1.2毫

8、升TEMED:60 L制备方法：0.3%过氧化氢：1毫升30%过氧化氢，加入蒸馏水至100毫升。染色方法：染色溶液：NAD: 0.05克NBT:0.03克经前综合症：0.002克1毫升/升苹果酸钠(ph 7.0):10毫升0.5 Tris-HCl缓冲液(ph 7.1):20毫升水：70毫升制备方法：0.3%过氧化氢：1毫升30%过氧化氢，加入蒸馏水至100毫升。显色：将电泳后凝胶板浸入染料溶液中，在37下保持30-60分钟，显示深蓝颜色区。用去离子水冲洗，然后用7.5%乙酸固定(或使用7.5%乙酸-30%乙醇-15%甘油)第四，乳酸脱氢酶(1)、制胶方法：分离胶(7.5%)分离凝胶缓冲液：3毫

9、升分离胶储存溶液：6 mLl0.14%过硫酸铵12毫升水：3毫升TEMED :15 uL制备方法：0.3%过氧化氢：1毫升30%过氧化氢，加入蒸馏水至100毫升。浓缩胶(2.5%)1.5毫升浓胶缓冲溶液浓缩胶液：3毫升核黄素：1.5毫升蔗糖：6毫升TEMED:18 uL制备方法：0.3%过氧化氢：1毫升30%过氧化氢，加入蒸馏水至100毫升。染色方法：染液：NAD : 0.05g克NBT: 0.03gPMS: 0.002g1摩尔/升乳酸钠溶液(ph 7.0):10毫升0.1摩尔/升氯化钠：5毫升0.5摩尔/升三盐酸缓冲液(ph 7.1):15毫升水：70毫升显色：将电泳后凝胶板浸入染料溶液中，

10、在37下保温30-60分钟，显示蓝紫色带。它可以用去离子水冲洗并用7%的乙酸固定以停止酶促反应。乙醇脱氢酶制胶方法：同乳酸脱氢酶染色方法：NAD: 0.025克NBT:0.015克PMs:0.001g95%乙醇：2毫升0.2M三盐酸缓冲液：7毫升水：41毫升显色：将电泳后的凝胶板浸泡在染色液中，保持温度在37，直至其呈现深蓝色带，用去离子水冲洗，并储存在7.5%的醋酸中。六.酯酶制胶方法：同乳酸脱氢酶染色方法：染液：1% ，-醋酸萘酯：3毫升快速蓝色RR: 0.1g0.5摩尔/升三盐酸缓冲液(pH7.1):10毫升加水至100毫升。显色：将电泳后凝胶板浸泡在染料溶液中，并在37下保持40分钟左

11、右，或在室温下保持40分钟，直到出现棕色带。用去离子水冲洗。它们被固定并储存在7.5%乙酸-30%乙醇-15%甘油中。七.过氧物酶制胶方法：同乳酸脱氢酶染色方法：染色溶液：2%联苯胺：10毫升抗坏血酸：35.2毫克0.6% H2O2: 10毫升水：30毫升注意：在制备联苯胺储存溶液时，加入几滴酒精或微温的冰醋酸有助于溶解。显色：将电泳后凝胶板浸入染料溶液中，室温下1-5分钟后显示蓝色色带。用去离子水冲洗，并将其储存在乙醇乙酸甘油水=5214的混合溶液中八、苹果酸酶制胶方法：分离胶(10%):分离胶储存溶液：6.5毫升1摩尔/升三盐酸(pH8.8):7.5毫升蒸馏水：5.5毫升1%过硫酸铵：0.

12、5毫升TEMED:35 uL浓缩胶(4%):分离胶储存溶液：1.3毫升1摩尔/升三盐酸(pH 6.8):1.3毫升蒸馏水：6.4毫升1%过硫酸铵：1.0毫升TEMED:10 uL染色方法：电泳结束后，用水冲洗橡胶板，并将其倒入50毫升染色溶液(含15毫克NADP15毫克NBT、50毫克PMS1、50毫克氯化镁、5毫升1毫升/升柠檬酸钠(pH 7.0)、10毫升0.2摩尔/升三盐酸(pH 8.0)和35毫升蒸馏水)。在黑暗中保持温度在37，直到出现深蓝色酶带。用水冲洗橡胶板，然后将其放入乙醇甘油水=112的溶液中保存。九、超氧化物歧化酶制胶方法：分离胶(10%)分离胶储存溶液：6.5毫升1摩尔/升三盐酸(pH8.8):7.5毫升蒸馏水：5.5毫升1%过硫酸铵：0.5毫升TEMED:35 uL浓缩胶(4%)分离胶储存溶液：1.3毫升1摩尔/升三盐酸(pH6.8):1.3毫升蒸馏水：6.4毫升1%过硫酸铵：1.0毫升TEMED:10 uL染色方法：电泳后，将凝胶放入染色溶液中，直到酶带清晰。染色后，用水冲洗凝胶柱并储存。步骤：1.将凝胶浸泡在2.4510-4毫升/升NBT溶液中20分钟。小心不要让灯亮着。在黑暗中，温度应该更低，或者放在冰箱里；如果NBT变得无色或沉淀，它需要重新配置2.然后