广西《芒果细菌性角斑病综合防治技术规程》（编制说明）

PAGEPAGE10广西地方标准《芒果细菌性角斑病综合防治技术规程》（征求意见稿）编制说明一、任务来源及起草单位根据广西壮族自治区市场监督管理局文件“广西壮族自治区市场监督管理局关于下达2021年第二批广西地方标准制修订项目计划的通知”（桂市监函［2021］2199号），广西地方标准《芒果细菌性角斑病综合防治技术规程》（编号：2021-2091）已获立项。本标准由广西壮族自治区农业农村厅提出，广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所负责起草。二、目的意义芒果是广西最具特色的水果之一，目前广西已成为我国芒果第一大主产区，种植面积达150多万亩，仅百色市就有130多万亩；芒果是革命老区农民增收最主要的水果品种之一。芒果细菌性角斑病是芒果上最重要病害之一，既为害叶片，也为害果实，在广西芒果产区，病叶率一般为30%～90%，一些果园则达100%，严重影响芒果叶片的光合作用和果实的商品价值，致使芒果产量损失高达30%～60%，经济产值可降低80%以上。我区果农在防治芒果细菌性角斑病上主要存在以下问题：（1）对芒果细菌性角斑病发生规律认识不足芒果细菌性角斑病属于细菌性病害，主要为害嫩叶，嫩枝和嫩果，病害爆发的时间短，突发性强，预防用药才能有效防控该病害。但是在生产实践上，果农对芒果细菌性角斑病发生规律认识不足，往往看到了为害的症状才去采取防治措施，为时已晚。因而有必要制定统一的规程，指导果农防控该病害。（2）防治技术单一，过度依赖化学农药据调查研究，生产实践上果农主要依靠化学药剂防治芒果细菌性角斑病。由于缺乏前期的预防和综合防控的措施，一旦出现了突发情况，果农往往多打药，打高毒药剂，导致果实农药残留不合格、残留量超标等问题，影响了外销，降低了果实的品质，还会对人民的健康造成严重的威胁，破坏生态环境等。过多依赖化学药剂往往会加速病菌的抗药性产生，对新药的开发研究造成很大的压力。一旦新药开发的速度赶不上病原菌抗药性产生的速度，将会出现病无药治的状况，届时对芒果细菌性角斑病有效防治将面临极大的危机。（3）芒果细菌性病害发生逐年加重，防治效果不甚理想广西芒果细菌性病害发生逐年加重，防治效果不甚理想，推测广西芒果细菌性病害的病原种类包括优势病原发生了变化。目前没有关于芒果细菌性角斑病综合防治技术的相关规程。2016～2020年，本标准编制所在的研究团队承担了《国家现代农业产业技术体系广西杧果创新团队病虫害防治岗位》（合同编号：nycytxgxcxtd-06-03）的科研项目。经过多年的调查研究，本研究团队发现广西芒果细菌性角斑病的病原种类和优势种群发生了变化，掌握了芒果细菌性角斑病的流行因素，研究了不同化学药剂对芒果细菌性角斑病菌的抑菌效果。在此基础上，本研究团队通过广泛查阅文献，依据该病害的为害特点，制定《芒果细菌性角斑病综合防治技术规程》，以提高防治水平，节约资源、减少农药使用量，延缓抗药性产生。同时向农民推广操作性强的防治技术，为有效防治芒果细菌性角斑病提供技术依据，保障芒果产业持续健康发展。三、国内外标准对比情况据查阅，目前国内外还没有关于芒果细菌性角斑病综合防治技术的相关规程。四、与现行法律法规强制性关系本标准的内容与现行的法律、法规及强制性标准无冲突。五、标准编制过程（一）组成编制小组，制订工作计划项目下达后，承担单位成立了编制工作小组，制定工作计划，并进行人员分工（见表1）。表1主要编制人员与责任分工黄穗萍女助理研究员植物病理学广西农科院植物保护研究所全面统筹各项工作李其利男研究员植物病理学广西农科院植物保护研究所资料收集、标准编写唐利华女副研究员植物病理学广西农科院植物保护研究所科研数据收集、验证陈小林女副研究员植物病理学广西农科院植物保护研究所资料收集、标准校对郭堂勋男副研究员植物病理学广西农科院植物保护研究所科研数据收集、验证黄辉晔男助理研究员植物昆虫学广西农科院植物保护研究所科研数据收集、验证莫贱友男研究员植物病理学广西农科院植物保护研究所科研数据收集、验证（二）资料收集整理编制小组确定后，随即开展资料收集整理工作。资料收集包括国内、区内已颁布的相关标准、国内公开发表的相关技术性资料。同时收集整理本编制团队成员近年来的试验研究成果、经验及推广应用技术资料。收集资料力求全面性，整理资料力求科学性，应用资料力求实效性。（三）确定编写原则在资料收集整理的基础上，确定编写原则。本规程的编写原则是：严格遵循国家有关方针、政策、法规，严格执行强制性地方标准和行业标准，与配套使用的系列标准及相关标准相衔接，做到协调统一。技术上具有先进性、适用性，充分体现地方特点；实施上具有易操作性和适用性。（四）制定项目进度计划表表2项目进度计划表时间主要完成内容2021年11-12月完成工作组讨论稿。2022年1-3月形成征求意见稿及编制说明，发函给相关科研单位和企业征求意见。2022年6-7月收集汇总专家意见，修改征求意见稿及编制说明。2022年8-9月形成送审稿和编制说明。2022年10月向区市场监督管理局申请组织标准审定会。2022年11-12月修改送审稿，形成报批稿，提交材料。（五）编写编写过程中主要注重：①与已有或相近标准衔接；②为国内、区內和市现行技术；③释义准确，操作性强；④格式和形式规范。（六）集体修改，形成征求意见稿初稿编制完成后，编制小组依据编制原则和注重点认真讨论修改完善，最后形成征求意见稿。六、标准关键技术指标依据和来源(一)按照《GB/T1.1-2020标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则》的要求和规定编写标准内容。与本标准相关的国家或行业标准有《GB1.1-2020标准化工作导则》、《GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则》、《DB45/T903-2013芒果高产优质生产及采后处理技术规程》等，这些标准是本标准将要引用或作为重要参考的标准，不存在任何冲突。（二）编制的内容、关键技术指标主要源于《国家现代农业产业技术体系广西芒果创新团队》项目的研究结果、田间调查观察结果、相关的文献资料、田间科学技术人员的新经验和同行专家的意见等。（三）规程中关键指标参数的依据及来源1、芒果细菌性角斑病为害特点及发生规律据多年的调查发现，细菌性角斑病造成芒果早期落叶、落果和采后果腐（图1），其中果实受害对其产量和商品价值影响较大。该病的侵染源来自带病菌的苗木及田间的病残体和老叶。病菌在受侵染的枝梢或病残组织上越冬。次年当温、湿条件适宜时，病部溢出菌脓，通过风雨或昆虫传播，从寄主的伤口或自然孔口侵入。高温、多雨、潮湿的天气，尤其是暴风雨后，有利于该病的发生和传播。植于风口处或山顶处的芒果园易发生该病。而在避风、地势较高的果园地区发病较轻，但在降雨或露水较大的情况下也会发病。图1芒果细菌性角斑病为害芒果叶片和果实的田间症状。左图为害叶片，右图为害果实。2.广西芒果细菌性角斑病病原研究人们普遍认为黄单胞菌芒果致病变种（Xanthomonascitripv.mangiferaeindicae）引起的芒果黑斑病是芒果细菌性病害的主要病原种类。但是项目组在研究中发现，与芒果黑斑病田间症状及其相似的芒果细菌性溃疡病菌泛菌属（Pantoeasp.）亦是广西芒果细菌性角斑病的优势病原种类，可见广西主要细菌性病害种类已发生改变。详细的研究数据如下：在百色芒果产区采集了26份芒果细菌性病害样本，采用组织液梯度稀释技术，分离病害样本中的病原细菌（见表3）。共分离获得46份菌株，其中泛菌属Pantoeasp.21个菌株（优势），黄单胞杆菌属Xanthomonassp.4个菌株，Curtobacteriumsp.4个菌株，Gluconobactersp.4个菌株，Acinetobactersp.2个菌株和Enterobactersp.2个菌株（见表4）。室内病原菌接种试验发现，泛菌属Pantoeasp.、黄单胞杆菌属Xanthomonassp.、Enterobactersp.均能引起芒果叶片产生病斑，是芒果细菌性病害的病原菌。对泛菌属Pantoeasp.21个菌株的GyrB和RpoB基因序列进行PCR扩增，通过多基因联合建树发现，21个泛菌属菌株属于Pantoeavagans、Pantoeadispersa、Pantoeaagglomerans三个种(见表5)。表3芒果细菌性角斑病病样采集信息及病原菌分离频率编号地点品种叶子果实1田阳祥洲台农Y-1-1(84/92)Y1-2(8/92)G1-1(52)2田东林逢东养村台农Y2-1(48)G2-1(63/82)G2-2(19/82)3田阳祥洲紫花Y3-1(83/96)Y3-2(13/96)G3-1(3)4右江区核心示范区桂七Y4-1(142)G4-1(42/59)G4-2(17-59)5芒果庄园玉纹Y5-1(8)G5-1(20)6田林高山芒果核心示范区金煌Y6-1(42/99)Y6-2(32/99)Y6-3(19/99)Y6-4(6/99)G6-1(16)7玉凤懂立台农没有叶子样本G7-1(18/29)G7-2(11/29)8芒果庄园台牙Y8-1(28)G8-1(51/77)G8-2(21/77)9田阳玉凤金煌Y9-1（16）G9-1(61/68)G9-2(7/68)10田阳玉凤懂立贵妃Y10-1(33/41)Y10-2(6/41)Y10-3(2/41)G10-1(32/55)G10-2(8/55)G10-3(5/55)11右江区核心示范区金煌Y11-1(65/73)Y11-2(8/73)G11-1(128)12右江区芒果核心示范区台农Y12-1(45/50)Y12-2(5/50)G12-1(128)13右江区芒果核心示范区金煌Y13-1(134/229)Y13-2(95/229)G13-1(53)G13-1A(9/11)G13-1B(2/11)表4芒果细菌性角斑病病原的分子鉴定编号(分离频率）DescriptionQueryCoverPer.IdentG9-1(61)Acetobacterghanensis98%99.78%G7-2(11/29)Acinetobactersp.99%99.86%G8-2(21/77)Bacillussubtilis99%99.86%Y3-1(83/96)Cellulomonasdenverensis99%99.36%G3-1(3)Cronobactersakazakii99%99.86%G4-1(42/59)Curtobacteriumalbidum100%99.51%Y4-1(142)Curtobacteriumsp.99%99.79%Y6-2(32/99)Curtobacteriumsp.99%99.86%Y6-3(19/99)Curtobacteriumsp.99%99.79%G4-2(17/59)Enterobactersp.99%99.79%Y6-1(42/99)Enterobactersp.99%99.79%Y11-2(8/73)Erwiniasp.99%99.79%G13-1B(2/11)Escherichiacoli99%98.95%G14-2(4/33)Escherichiacoli99%99.72%Y8-3(2/5)Gluconobacterjaponicus98%100%Y8-2(3/5)Gluconobacteroxydans98%99.85%G8-1(51/77)Gluconobactersp.98%100%Y8-1(23)Gluconobactersp.98%100%Y10-3(2/41)Moraxellaosloensis99%99.79%G10-2(8/55)Pantoeaananatis98%97.60%G2-1(63/82)Pantoeaanthophila99%91.75%G5-1(20)Pantoeaanthophila98%95.60%G10-3(5/55)Pantoeacypripedii99%98.88%Y11-1(65/73)Pantoeacypripedii98%99.08%G11-1(128)Pantoeacypripedii99%98.95%G2-2(19/82)Pantoeacypripedii99%98%G13-1A(9/11)Pantoeadispersa98%100%Y12-2(5/50)Pantoeaeucalypti99%99.51%G1-1(52)Pantoeasp.99%96.25%G7-1(18/29)Pantoeasp.96%92.19%Y1-2(8/92)Pantoeasp.99%98.39%G6-1(16)Pantoeasp.99%97.89%Y10-1(33/41)Pantoeasp.99%97.68%G13-1(53)Pantoeasp.99%99.58%G14-1(29/33)Pantoeasp.99%99.58%Y1-1(84/92)Pantoeasp.99%98.24%G10-1(32/55)Pantoeasp.98%99.30%Y5-1(8)Pantoeasp.99%99.30%G12-1(128)Pantoeavagans98%99.65%Y2-1(48)Pantoeavagans99%97.85%Y6-4(6/99)Sphingomonassp.98%93%Y9-1（16）Staphylococcusepidermidis100%99.72%Y12-1(45/50)Xanthomonasaxonopodis99%99.65%Y10-2(6/41)Xanthomonascampestris99%99.65%Y3-2(13/96)Xanthomonascampestrispv.99%99.72%Y13-1(134)Xanthomonassp.98%99.79%表5泛菌属特定基因扩增结果（GyrB、RpoB）编号Description（RpoB)QueryCoverPer.IdentDescription(GyrB)QueryCoverPer.IdentY12-2Pantoeavagans99%98.32%Pantoeavagans99%97.98%G10-2Pantoeavagans97%95.68%Pantoeaagglomerans96%91.26%G10-3Pantoeasp.At-9bchromosome,completegenome98%97.42%Pantoeasp.97%93.33%Y10-1Pantoeavagans98%98.90%Pantoeavagans99%98.02%Y1-1Pantoeavagans97%99.40%Pantoeavagans99%98.32%G2-1Pantoeavagans97%95.96%Pantoeasp.99%91.13%G5-1Pantoeavagans97%95.76%Pantoeaagglomerans98%91.11%G1-1Pantoeavagans97%96.06%Pantoeavagans99%90.69%G6-1Pantoeavagans98%95.60%Pantoeavagans99%90.61%G7-1Pantoeavagans97%98.99%Pantoeavagans98%97.72%Y1-2Pantoeavagans97%99.40%Pantoeavagans99%98.47%Y2-1Pantoeavagans97%99.40%Pantoeavagans99%98.17%G12-1Pantoeasp.At-9bchromosome,completegenome98%97.73%Pantoeavagans99%98.47%G13-1Pantoeadispersa99%99.21%Pantoeadispersa99%98.48%G2-2Pantoeasp.At-9bchromosome,completegenome98%97.51%Pantoeasp.At-9bchromosome,completegenome99%93.29%G13-1APantoeadispersa98%99.30%Pantoeadispersa99%98.02%Y5-1Pantoeavagans98%98.91%Pantoeavagans99%98.32%G10-1Pantoeasp.CCBC3-3-1chromosome,completegenome98%92.75%Pantoeasp.At-9bchromosome,completegenome99%93.44%G14-1Pantoeasp.At-9bchromosome,completegenome98%97.70%SiccibactercolletisgyrBgeneforDNAgyrasesubunitB,typestrain1383T99%87.65%Y11-1Pantoeavagans98%98.53%Pantoeasp.At-9bchromosome,completegenome96%93.95%Pantoeadispersa98%87.21%3、广西芒果细菌性角斑病病原对杀菌剂敏感性试验采用琼脂扩散抑菌圈法测定了13种广西芒果细菌性角斑病病原对12种杀菌剂的敏感性，结果发现12种杀菌剂中，丙硫唑药剂的抑菌谱较广，对多种病原菌有很强的杀菌作用，除此之外，噻霉酮、四霉素、乙蒜素及中生菌素也有较好的杀菌作用（见表6）。表613种病原细菌对12种杀菌剂的敏感性病原菌杀菌剂EC50(mg/L)氢氧化铜琥胶肥酸铜王铜噻唑锌氯溴异氰尿酸辛菌胺醋酸盐中生菌素春雷霉素乙蒜素四霉素噻霉酮丙硫唑Acinetobactersp.79765431814836257127333443155033811790Agrobacteriumsp.9717425611276641694871271560324081Cellulomonassp.552038431559314584184211250311228163644Curtobacteriumsp.4427846510314119051684511512653412165166E.papayae35389314222488190998715183116239938502350P.anthophila116198971877649969124632458257939783390P.cypripedii2788912923517574975312669373286285550512970P.dispersa2568212507299173821011770432265347442312460P.vagans14975705682723656910959235148413834902360X.citripv.mangiferaeindicae55814170956433600712413025422320534P.p