生物竞赛南京大学夏令营分子生物学

基因突变

DNA分子很“脆弱”大多数DNA损伤可以被修复其它生物大分子损伤后则被降解原因：细胞内DNA分子的拷贝数少DNA的结构决定其容易被修复内在因素：DNA结构本身的不稳定；DNA复制中的碱基错配；氧自由基；环境因素：化学因素---各种化学诱变剂，如黄曲霉素、烷基化试剂等物理因素---紫外辐射和离子辐射（X射线和γ射线）碱基损伤：碱基丢失碱基转换碱基修饰碱基交联碱基错配

损伤类型：DNA链的损伤：链的断裂DNA链的交联DNA与蛋白质之间的交联一些烷基化试剂EMS(Ethylmethanesulfanate)甲基磺酸乙酯

CH3—S—O--CH2CH3OOMMS对甲基甲磺酸

CH3—S—O--CH3OOSM(SulfurMustardsgas硫芥子气)HSCH2CH2ClCH2CH2Cl发生在DNA上的可遗传的永久性结构变化统称为突变。大多数DNA损伤可以被各种修复机制修复，不能修复或者修复出错就导致突变。点突变(pointmutation)移码突变(frameshiftmutation)突变的类型：突变是否一定产生表型变化？中性突变突变是否能遗传给后代？单细胞生物多细胞生物

点突变：碱基对置换点突变的结果：同义突变错义突变无义突变移码突变：显性突变(dominant)隐性突变(recessive)突变发生机理：自发突变(spontaneousmutation)诱发突变(inducedmutation)诱发突变：碱基类似物烷基化试剂脱氨基试剂羟胺DNA嵌入试剂例题如果基因中4种脱氧核苷酸的排列顺序发生改变，这一突变一定导致：A.遗传性状改变B.遗传密码改变C.遗传信息改变D.遗传规律改变B2007江苏高考题基因突变是生物变异的根本来源。下列关于基因突变特点的说法正确的是：A.无论是低等还是高等生物都可能发生突变B.生物在个体发育的特定时期才可发生突变C.突变只能定向形成新的等位基因D.突变对生物的生存往往是有利的A基因重组DNA重组技术基因工程目的基因获取从基因文库中获取通过化学方法人工合成利用PCR技术体外扩增重组体制备选择载体条件：自主复制、多克隆位点、筛选标记限制性内切酶酶切DNA连接酶连接限制性核酸内切酶限制性内切酶的命名1973年H.OSmith和D.Nathans提议的命名系统，命名原则如下：1.用属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个字母的略语表示寄主菌的物种名。大肠杆菌（Escherichiacoli）用Eco表示；流感嗜血菌（Haemophilusinfluenzae）用Hin表示。2.用一个右下标的大写字母表示菌株或型。如Ecok,EcoR（现在都写成平行，如EcoRI）。3.如果一种特殊的寄主菌内有几种不同的限制与修饰系统，用罗马字母表示。如EcoRI，EcoRV。首先由H.O.Smith和K.W.Wilcox在1970年从流感嗜血菌中分离。分离的第一个酶是HindⅡ（1）识别位点序列未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列（多数是回文序列）。与DNA的来源无关。（2）切割位点切开双链DNA，形成粘性末端或平齐末端。（3）粘性末端（stickyends，cohensiveends）II型限制性内切酶重组体的转化植物细胞：农杆菌转化、基因枪法、花粉管通道法动物细胞：显微注射法、脂质体法、腺病毒法微生物细胞：CaCl法、电转化克隆鉴定抗性筛选PCR扩增筛选酶切筛选连接逆转录mRNAcDNA限制性酶切dsDNA粘性末端PCR克隆载体线性载体限制性酶切转化大肠杆菌含有抗生素的平板PCR筛选阳性重组子培养扩增目的质粒因转入载体DNA而具有抗性2007全国高考题下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是：A.一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B.限制性内切酶的活性受温度影响C.限制性内切酶能识别和切割RNAD.限制性内切酶可从原核生物中提取C例题（多选）人们利用基因工程的方法，用大肠