热原的基本知识

热原的基本知识第一页，共31页。一、热原的概念、组成与性质热原：是由微生物代谢产生的微量即能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。大多数细菌都能产生热原，霉菌、酵母菌、真菌，甚至病毒也能产生热原。在产生热原的微生物中，致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰氏阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱。（一）热原的概念第二页，共31页。热原反应：含有热原的注射剂注入人体可引起发热反应，使人体产生发冷、寒战、体温升高、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。第三页，共31页。（二）热原的组成热原是微生物的一种内毒素（内毒素：革兰氏阴性细菌细胞壁的组成成分，细菌在生活时不能释放出来，当细胞死亡而溶解或用人工方法破坏菌体时才释放出来）。内毒素是由磷脂、脂多糖和蛋白质所组成的复合物，其中脂多糖是内毒素的主要成分，具有特别强的热原活性，因而可以近似的认为：热原=内毒素=脂多糖脂多糖的化学组成因菌种不同而异（主要含有多种糖类，类脂化合物，有机磷和其它一些成分）；热原的分子量一般为1×106左右。第四页，共31页。（三）热原的性质一般在60℃加热1小时不受影响，100℃会有少量不耐热的热原被破坏，只有在180℃、2小时，250℃、30分钟或650℃、1分钟可使热原彻底破坏。必须引起注意：在通常注射剂的灭菌条件下，往往不足以使热原破坏。1.耐热性第五页，共31页。热原体积小，约在1～5nm之间，故一般滤器、微孔滤膜均不能截留，一些超滤设备可以滤除部分热原。2.可滤过性由于磷脂结构上连接有多糖，所以热原能溶于水，在水或水溶液中呈分子状态。3.水溶性第六页，共31页。热原本身不挥发，但必须注意在蒸馏时，防止随水蒸气雾滴带入药液或注射用水中，因此在配制罐和蒸馏水室的蒸发器上部设隔沫装置，以分离蒸汽和雾滴。4.不挥发性热原能被活性炭吸附，也能被强酸、强碱、强氧化剂破坏，超声波亦能破坏热原。5.其他性质第七页，共31页。二、污染热原的途径（一）生产过程中的污染是热原污染的主要途径，主要指配制注射液用的注射用水，尽管水本身并非使微生物良好的培养基，但易被空气或含尘空气中的微生物污染。虽经蒸馏可将热原除去，但若操作不当或蒸馏设备结构不合理，水蒸气中带有细小的水滴则可将热原带入。另外，注射用水储存不当或储存时间过长被微生物污染也可产生热原。故注射用水应新鲜使用，多效蒸馏水机质量要好，环境应洁净。1.从溶剂中带入第八页，共31页。一些原辅料因包装损坏、受潮而污染微生物可产生热原。另外，用生物方法制备的药品如水解蛋白及中药提取物易带入致热物质。2.从原辅料中带入3.从容器、用具、管道和装置中带入如未按GMP要求认真清洗处理，常易导致热原污染。第九页，共31页。如室内空气、环境、人员卫生条件达不到要求，操作时间过长、产品灭菌不及时或灭菌不合格等均会增加微生物的污染而产生热原。4.制备过程中的污染5.产品密闭不合格，在储存中被污染第十页，共31页。临床使用的器具如输液器、注射针筒针头、配药器具等的污染会带入热原，中心配药室或临床科室配药过程，由于环境、操作、用品、混入的其他药品等因素的污染也可能带入热原。（二）使用过程中的污染第十一页，共31页。三、除去热原的方法耐高温的注射器、针头或器皿，在洗涤干燥后，于250℃加热30分钟以上，可以破坏热原。1.高温法热原能溶于水但不挥发，因此制备注射用水时，需经蒸馏，纯化水中的热原可被除去。2.蒸馏法第十二页，共31页。活性炭对热原有较强的吸附作用，同时有助滤、脱色作用，所以在注射剂中使用较广。常用量为0.1%~0.5%，但应注意吸附可能造成主药的损失。此外，还可用活性炭与白陶土合用除去热原。3.活性炭吸附法第十三页，共31页。玻璃、搪瓷等耐酸容器及用具，可用重铬酸钾硫酸清洁液或稀氢氧化钠液处理破坏热原。4.酸碱法临床使用的一次性注射器、输液器都普遍使用该方法，效果可靠、产品具有较长的有效期。5.环氧乙烷气体杀灭法第十四页，共31页。热原分子量为1×106左右，采用二乙氨基乙基葡聚糖凝胶(分子筛)可去除部分热原。6.凝胶过滤法一般用3.0~15nm孔径的超滤膜除去部分热原。7.超滤法如采用离子交换法、反渗透法等，也可通过吸附或滤过作用除去部分热原。8.其他第十五页，共31页。四、检查热原的方法中国药典现行版本规定热原检查采用：（一）家兔法（二）细菌内毒素检查法第十六页，共31页。（一）家兔法《中国药典》现行版规定热原检查法系将一定量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。家兔法作为热原检查法，仍是目前各国药典法定的方法。因家兔对热原的反应与人基本相似，试验成本相对比较低。对供试家兔的要求、试验前的准备、检查法、结果判断药典均有具体规定。第十七页，共31页。检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、实验室条件和操作的规范性。供试验用家兔应按药典要求进行选择，以免影响结果。家兔法监测内毒素的灵敏度约为0.001mg/mL，试验结果接近人体真实情况。但该法操作繁琐费时，不能用于注射剂生产过程中的质量控制，且不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒性药物制剂。第十八页，共31页。（二）细菌内毒素检查法细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。鲎是节肢动物门、螯肢亚门肢口纲剑尾目的一种海生动物，又称鲎珠。鲎的血细胞溶解物与内毒素之间产生凝聚反应。鲎试剂即鲎的血细胞溶解物。第十九页，共31页。第二十页，共31页。细菌内毒素检查法包括凝胶法和光度测定法两种方法：凝胶法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素；光度测定法包括浊度法和显色基质法，系分别利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来测定内毒素。供试品检测时可使用其中任何一种方法进行试验，当测定结果有争议时，以凝胶法结果为准。第二十一页，共31页。鲎试剂法检查内毒素的灵敏度约为0.0001mg/mL，比家兔法灵敏10倍，操作简单易行，实验费用低，结果迅速可靠，适用于注射剂生产过程中的热原控制和家兔法不能检测的某些细胞毒性药物制剂。但该法对革兰阴性菌以外的内毒素不灵敏，目前尚不能完全代替家兔法。