DB22T 3678-2024普通级实验用猫 金黄色葡萄球菌检测PCR法

22法DetectionofconventionalexperimentalcatStaphylococcusaureusPCRmethod2024-12-31发布DB22/T3678—2024I本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的DB22/T3678—20241普通级实验用猫金黄色葡萄球菌检测PCR法本文件描述了普通级实验用猫金黄色葡萄球菌的PCR检测方法，给出了试验原理、材料、样品、试NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范a)高速离心机，离心速度：1000r/min～20000r/min；a)阳性对照品：金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC259232j)70%乙醇溶液(用无RNase去离子水配制);k)核苷酸混合物(dNTPs)。7.1.1.2用灭菌接种环挑取适量7.1.1.1样品，加入4mL7.5%氯化钠营养肉汤，均质后置于(36℃±1℃)培养箱中培养18h～24h,取上清液，注明编号后备用。7.1.2.1采集中段粪便，干粪便加入7.5%氯化钠营养肉汤均质后进行接种，稀便直接接种培养。置于培养箱中36℃培养18h～24h,取上清液，注明编号后备用。7.1.2.2无菌采集分泌物或浓汁接种在7.5%氯化钠营养肉汤中，置于培养箱中36℃培养18h~采集或处理的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24h;如需长期保存，应放置在-80℃冰箱中。按照NY/T541的规定操作。DB22/T3678—20243用量/µLDNA模板（20ng/µL～50ng1123451注：可使用其他等效PCR检测试剂盒进与适合的DNA标准标志物做对比；电压60V～100V进行电泳，当溴酚蓝移动到距离胶板下缘1cm处时，停止电泳。将琼脂糖凝胶置于凝胶成像系统中，观察P8.3.1阴性对照和空白对照未出现目的条带，阳性对照出现423bp特异性目的条带，试验成立；否8.3.2检测样品未观察到423bp处有扩增条带，样品检测结果为阴性；检测样品观察到423bp处有扩增条带，样品检测结果为阳性，应符合图DB22/T3678—20244A.17.5%氯化钠营养肉汤室温冷却至50℃~55℃时，向其中加入DNA染料，轻轻晃动混匀，避免产生气泡，将电泳梳子置入制胶板中，然后将琼脂糖溶液倒入制胶板，凝胶适宜厚度为3mm～5mm，需确认在梳齿下或梳齿间没称取1g水溶性钠型溴酚蓝放入烧杯中，再向烧杯中加入100mL双蒸水，搅拌加入800mL双蒸水，充分搅拌均匀；加入55DB22/T3678—2024GCTTGCTATGATTGTGGTAGCCATCATTATTGTAGGTGTATTAGCATTTCAATTTATGAATCATACGGGTCCACAAATCATGAAACTGTACAAGATTTAAATGGTAAAGATAAAGTACATGTTCAAAGAGTTGTGGATGGTGATACATTTATAAATGGTAAAGAAATTAAAGTTAGGCTTATAGGGGTTGATACGCCAGAAACGGTGAAACCGAATACGCCTGTACAACCATAAGCATCAAATTATAGTAAGAAGACATTAACAAATCAAGATGTTTATTTAGAATATGATAAAGAAAAGCAAGACCGCTATGTTGGCGTATGTAT