2025年山东省邹城市第一中学高考仿真卷（生物试题）（三）含解析

2025年山东省邹城市第一中学高考仿真卷（生物试题）（三）考生须知：1．全卷分选择题和非选择题两部分，全部在答题纸上作答。选择题必须用2B铅笔填涂；非选择题的答案必须用黑色字迹的钢笔或答字笔写在“答题纸”相应位置上。2．请用黑色字迹的钢笔或答字笔在“答题纸”上先填写姓名和准考证号。3．保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，在草稿纸、试题卷上答题无效。一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1．下列对内环境稳态的表述错误的是（）A．高等动物体内绝大多数组织细胞与组织液进行物质交换B．组织液可以通过毛细血管壁与血浆进行物质交换C．高等动物可以依赖血清中的血红蛋白为全身细胞运送氧D．肝脏的活动除了可以维持血糖浓度稳定，还可维持整个组织液中糖浓度的稳定2．下列关于ATP的叙述，正确的是（）A．高能磷酸键的断裂需要消耗水和能量B．吸能反应所需要的能量都由ATP直接提供C．ATP中的“A”与ATP彻底水解后生成的“A”不同D．ATP中的五碳糖也是参与DNA组成的重要成分3．血液中氧气含量降低时，肾脏的某些细胞会加速分泌一种促进红细胞生成的激素（EPO），红细胞数量增多有利于机体适应低氧环境。下列相关叙述错误的是（）A．人从平原进入高海拔地区生活，EPO分泌增加B．EPO及其功能类似物可能是运动比赛的禁药C．EPO参与体液调节，作用的靶细胞是肾脏细胞D．血氧含量的降低会引起脑干中呼吸中枢的兴奋4．如图表示桑基鱼塘生态系统部分能量流动示意图，图中字母代表相应的能量。下列叙述错误的是（）A．b表示桑树呼吸作用散失的能量B．d表示桑树用于生长、发育、繁殖的能量C．如果g表示蚕传递给分解者的能量，则f表示未被利用的能量D．d/a×100%可以表示第一营养级到第二营养级的能量传递效率5．在细胞内，有许多由膜构成的囊泡就像深海中的潜艇，在细胞中穿梭往来，繁忙地运输着“货物”。下列有关囊泡的叙述，错误的是（）A．内质网可以“出芽”形成囊泡，其囊泡膜可以成为高尔基体膜的一部分B．内质网在囊泡运输中起重要的交通枢纽作用C．高尔基体分泌的囊泡可能形成溶酶体D．突触小体中的突触小泡，可以是高尔基体分泌的囊泡形成的6．下列不符合生态工程基本原理的说法是（）A．超载放牧导致草地退化，主要违背协调与平衡原理B．矿区生态环境的恢复工程中，关键是土壤微生物群的构建和植被恢复C．城市生活垃圾实现废物资源化利用依据的是物质循环再生原理D．退耕还湿地和建立自然保护区的主要目的是为了给人类提供游览胜地7．图甲中曲线a、b表示物质跨（穿）膜运输的两种方式，图乙表示细胞对大分子物质“胞吞”和“胞吐”的过程。下列相关叙述中，错误的是（）A．甲图中a表示自由扩散，b表示协助扩散或主动运输B．甲图中b曲线达到最大转运速率后的限制因素可能是载体蛋白的数量C．被胞吞或胞吐的物质一定是大分子物质D．乙图中的胞吞和胞吐过程都需要消耗ATP8．（10分）研究表明某些肿瘤细胞中MDR基因高度表达后，会使这些癌细胞对化疗药物的抗性增强。MDR(多耐药基因1)的表达产物是P-糖蛋白(P-gp)，该蛋白有ATP依赖性跨膜转运活性，可将药物转运至细胞外，使细胞获得耐药性。而P-gp转运蛋白低水平表达的癌细胞内，某些化疗药物的浓度明显升高。结合上述信息，分析下列叙述正确的是A．P-gp转运蛋白转运物质的方式属于协助扩散B．P-gp转运蛋白可将各种化疗药物转运出癌细胞C．化疗药物可提高P-gp转运蛋白基因高度表达的癌细胞比例D．提高癌细胞P-gp转运蛋白的活性为癌症治疗开辟了新途径二、非选择题9．（10分）番茄红素具有一定的药用价值，但普通番茄合成的番茄红素易发生转化（如图甲），科学家设计了一种重组DNA（质粒三），该DNA能表达出双链RNA（发卡），番茄细胞能识别侵入的双链RNA并将该双链RNA及具有相同序列的单链RNA一起降解，从而提高果实中番茄红素的含量（如图乙）。请分析回答下列问题：（1）在体外快速大量获得目的基因或含有目的基因的“片段A”可以采用___________技术，该技术的原理是________________________。

（2）根据图甲推知，转录出“发卡”的DNA片段实际上是两个反向连接的________________基因，上述过程通过阻止该基因在细胞内的_______________（填“转录”或“翻译”），提高了果实中番茄红素的含量。（3）为保证图中的片段A反向连接，处理已开环质粒所用的两种限制酶是______________________。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外侧游离的磷酸基团。对已开环的质粒二两端去磷酸化的主要作用是阻止其_____________，该DNA分子仍可以和目的基因连接，形成缺少___________个磷酸二酯键的重组质粒，随后在细胞中被修复。（5）可利用___________________法将质粒三导入植物细胞。10．（14分）为提高粮食产量，科研工作者以作物甲为材料，探索采用生物工程技术提高光合作用效率的途径。（1）图1是叶肉细胞中部分碳代谢过程______________的模式图。其中环形代谢途径表示的是光合作用中的反应。（2）如图1所示，在光合作用中R酶催化C5与CO2形成2分子3-磷酸甘油酸。在某些条件下，R酶还可以催化C5和O2反应生成1分子C3和1分子2-磷酸乙醇酸，后者在酶的催化作用下转换为______后通过膜上的载体（T）离开叶绿体。再经过代谢途径Ⅰ最终将2分子乙醇酸转换为1分子甘油酸，并释放1分子CO2。（3）为了减少叶绿体内碳的丢失，研究人员利用转基因技术将编码某种藻类C酶（乙醇酸脱氢酶）的基因和某种植物的M酶（苹果酸合成酶）基因转入作物甲，与原有的代谢途径Ⅲ相连，人为地在叶绿体中建立一个新的乙醇酸代谢途径（图2中的途径Ⅱ）。①将C酶和M酶的编码基因转入作物甲，能够实现的目的是：利用途径Ⅱ，通过_______，降低叶绿体基质中该物质的含量，减少其对叶绿体的毒害作用。②转基因操作后，途径Ⅲ能够提高光合作用效率的原因是_______。（4）在图2所述研究成果的基础上，有人提出“通过敲除T蛋白基因来进一步提高光合作用效率”的设想。你认为该设想是否可行并阐述理由___________。11．（14分）回答下列与生态系统有关的问题：（1）西双版纳热带雨林是我国保存最完整的热带雨林之一。白天有各种蝶类、蜂类和蝇类活动，而到晚上只能看到夜蛾类和螟蛾类昆虫，这是群落的__________随时间发生变化，体现了群落的时间结构。该群落_______复杂，抵御外力干扰的能力强。该群落与当地气候和土壤条件处于最终平衡状态，此时群落称为____________。（2）热带雨林中动植物种类多，营养级数目多，营养级的位置越高，归属于这个营养级的生物种类、数量和_____越少。可用________来表示各营养级之间的个体数量关系，通过计算动物的_______，可以推测各类动物在生态系统中的重要性。（3）南方的桑基鱼塘生态工程，实现了桑叶养蚕、蚕沙养鱼、塘泥作为桑树的肥料回到桑园。这主要体现了农业生态工程的______技术。12．萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。①这是一种定点的_________技术。②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。

参考答案一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1、C【解析】

内环境稳态是在神经系统和体液的调节下，通过各个器官、系统的协调活动，共同维持内环境相对稳定的状态。【详解】A、组织液是绝大多数组织细胞直接生活的内环境，高等动物体内绝大多数组织细胞与组织液进行物质交换，A正确；B、组织液与血浆被血管壁阻隔，故两者要进行物质交换需通过毛细血管壁，B正确；C、高等动物可以依赖红细胞中的血红蛋白为全身细胞运送氧，C错误；D、肝脏可以通过合成或分解肝糖原来维持血糖浓度稳定，血浆和组织液可以进行过物质交换，故可组织液中血糖浓度的稳定，D正确。故选C。本题考查稳态的相关知识，要求考生识记内环境稳态的概念、调节机制及意义，能结合所学的知识准确判断各选项。2、C【解析】

ATP的中文名称叫三磷酸腺苷，其结构简式为A-P～P～P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基团，-代表普通磷酸键，～代表高能磷酸键。ATP为直接能源物质，在体内含量不高，可与ADP在体内迅速转化，ATP与ADP的相互转化的反应式为：ATP⇌ADP+Pi+能量，反应从左到右时能量代表释放的能量，用于各种生命活动。【详解】A、高能磷酸键的水解断裂需要消耗水，但释放能量，A错误；B、吸能反应所需要的能量主要由ATP直接提供，B错误；C、ATP中的“A”是腺苷，ATP彻底水解后生成的“A”是腺嘌呤，二者不同，C正确；D、ATP中的五碳糖是核糖，而DNA的五碳糖是脱氧核糖，D错误。故选C。3、C【解析】

题意分析：血液中氧气含量降低时，会刺激肾脏的某些细胞会分泌分泌一种促进红细胞生成的激素（EPO），该激素会作用于骨髓造血干细胞，使得红细胞数目增多，使氧气运输增多，以缓解机体缺氧的状态，这是机体的自我调节性的适应。【详解】A、高海拔地区氧气稀薄，致使体内EPO分泌增加，红细胞数量增多有利于机体适应低氧环境，A正确；B、运动比赛会导致机体血氧浓度降低，使用EPO及其功能类似物会增加红细胞数量，进而增强运动员耐受低血氧的能力，提高比赛成绩，B正确；C、EPO作为激素，参与体液调节，其分泌细胞（而非靶细胞）是肾脏细胞，C错误；D、血氧含量的降低是引起脑干中呼吸中枢的有效刺激，会引起脑干中呼吸中枢的兴奋，D正确。故选C。4、B【解析】

根据题意和图示分析可知：图示为桑基鱼塘生态系统局部的能量流动，其中a为总光合作用量；b为生产者呼吸消耗量；c为净光合作用量；d为蚕的同化量，且d=e+f+g+h；h为蚕流向下一个营养级的能量。【详解】A、总光合作用=净光合作用+呼吸作用，因此图中b表示桑树呼吸作用散失的能量，A正确；B、各营养级同化的能量，一部分用于呼吸作用消耗，还有一部分用于该营养级生长、发育和繁殖等，即图中的c可表示桑树用于生长、发育、繁殖的能量，B错误；C、如果g表示蚕传递给分解者的能量，则f表示未被利用的能量，h为蚕流向下一个营养级的能量，C正确；D、蚕的同化量为d，桑树的同化量为a，d/a×100%可以表示第一营养级到第二营养级的能量传递效率，D正确。故选B。5、B【解析】

分泌蛋白合成与分泌过程:核糖体合成蛋白质内质网进行粗加工内质网“出芽”形成囊泡高尔基体进行再加工形成成熟的蛋白质高尔基体“出芽”形成囊泡细胞膜。【详解】A、内质网可以“出芽”形成囊泡，包裹着要运输的蛋白质到高尔基体中进一步加工，囊泡膜与高尔基体膜融合，成为高尔基体膜的一部分，A正确；B、高尔基体起交通枢纽作用，而不是内质网，B错误；C、溶酶体是单层膜组成的、内含多种水解酶，初级溶酶体是高尔基体分泌形成的，C正确；D、突触小泡是含有神经递质的膜泡结构，是由高尔基体分泌的囊泡形成的，D正确。故选B。6、D【解析】

生态工程依据的基本原理：（1）物质循环再生原理：物质能在生态系统中循环往复，分层分级利用；（2）物种多样性原理：物种繁多复杂的生态系统具有较高的抵抗力稳定性；（3）协调与平衡原理：生态系统的生物数量不能超过环境承载力（环境容纳量）的限度；（4）整体性原理：生态系统建设要考虑自然、经济、社会的整体影响；（5）系统学和工程学原理：系统的结构决定功能原理：要通过改善和优化系统结构改善功能；系统整体性原理：系统各组分间要有适当的比例关系，使得能量、物质、信息等的转换和流通顺利完成，并实现总体功能大于各部分之和的效果，即“1+1＞2”。【详解】A、超载放牧导致草地退化，主要违背协调与平衡原理，A正确；B、土壤微生物群的构建和植被恢复是矿区生态环境的恢复工程中的关键的措施，B正确；C、城市生活垃圾实现废物资源化利用依据的是物质循环再生原理，C正确；D、退耕还湿地和建立自然保护区的主要目的是为了保护野生动植物，D错误。故选D。7、C【解析】

分析曲线甲图：方式a只与浓度有关，且与浓度呈正相关，属于自由扩散；方式b除了与浓度相关外，还与载体数量有关，属于协助扩散或主动运输。图乙是对胞吐和胞吞的过程的考查，分析题图可以知道，a是细胞的胞吞过程，b是细胞的胞吐过程，不论是细胞的胞吞还是胞吐都伴随着细胞膜的变化和具膜小泡的形成，因此胞吐与胞吞的结构基础是膜的流动性。【详解】A、分析曲线甲图：方式a只与浓度有关，且与浓度呈正相关，属于自由扩散；方式b除了与浓度相关外，还与载体数量有关，属于协助扩散或主动运输，A正确；B、甲图中方式b除了与浓度相关外，还与载体数量有关，其最大转运速率与载体蛋白数量有关，B正确；C、被胞吞或胞吐的物质不一定是大分子物质，如神经递质，C错误；D、胞吞和胞吐是耗能过程，需要细胞内部提供能量，D正确。故选C。8、C【解析】

根据题意该蛋白的转运依赖于ATP，说明需要消耗能量。【详解】由题意可知，P-gp转运蛋白转运化疗药药物要消耗能量，不属于协助扩散，A错误；P-gp转运蛋白主要影响某些化疗药物的浓度，B错误；化疗药物会对癌细胞起到选择作用，P-gp转运蛋白基因高度表达的癌细胞的抗药性强，生存下来的比例高，C正确；提高癌细胞P-gp转运蛋白的活性即提高了癌细胞的抗药性，不利于癌症的治疗，D错误本题的解题关键是分析出P-gp转运蛋白于癌细胞之间的关系。二、非选择题9、PCRDNA双链复制番茄红素环化酶翻译Ecl和BamH1自身成环2农杆菌转化（或基因枪、花粉管通道）【解析】

分析图一：番茄红素可以转化为胡萝卜素。分析图二：图二位重组DNA（质粒三）的构建过程，该质粒能表达出双链RNA（发卡），番茄细胞可以识别侵入的双链RNA并将该双链RNA及具有相同序列的单链RNA一起降解，提高了果实中番茄红素的含量。【详解】（1）在体外快速大量获得目的基因或含有目的基因的“片段A”可以采用PCR技术，该技术的原理是DNA双链复制。（2）根据图二可知，目的基因是番茄红素环化酶基因，因此表达出“发卡”的DNA片段实际上是两个反向连接的番茄红素环化酶基因；“发卡”能导致双链RNA、mRNA被降解，而mRNA为翻译的模板，因此“发卡”阻止了其在细胞内的翻译过程，所以提高了果实中番茄红素的含量。（3）为保证第二个目的基因片段反向连接，应该用两种限制酶切割。由图可知，第二个目的基因片段两侧的限制酶识别序列为Ecl和BamHⅠ，因此处理已开环质粒所用的两种限制酶是Ecl和BamHⅠ。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外侧游离的磷酸基团。对已开环的质粒二两端去磷酸化的主要作用是阻止其自身成环（自身环化）；构建重组质粒三时，要用限制酶Ecl和BamHⅠ切割，这样会去除黏性末端最外侧缺少磷酸基团的脱氧核苷酸，因此形成的重组质粒缺少2个磷酸二酯键。（5）将目的基因导入植物细胞，采用最多的方法是农杆菌转化法，因此可利用农杆菌转化法将质粒三导入植物细胞。解答第（5）题，关键能理清将目的基因导入受体细胞的方法，总结如下：1、将目的基因导入植物细胞，采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。2、将目的基因导入动物细胞，最常用的方法是显微注射技术。3、将目的基因导入微生物细胞，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为

感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。10、碳（暗）乙醇酸将乙醇酸转换为苹果酸由于途径Ⅱ提高了苹果酸的含量，使叶绿体基质内CO2的浓度增加，直接增加了碳（暗）反应的反应（底）物该设想可行。理由是：叶绿体膜上的载体T仍有可能输出部分乙醇酸，造成叶绿体中碳的丢失。找到并敲除载体T的基因，即可减少这一部分碳的丢失，进一步提高光合作用效率。【解析】

1.叶绿体是进行光合作用的场所，光合作用分为光反应和暗反应，联系见下表：项目光反应碳反应（暗反应）实质光能→化学能，释放O2同化CO2形成（CH2O）（酶促反应）时间短促，以微秒计较缓慢条件需色素、光、ADP、和酶不需色素和光，需多种酶场所在叶绿体内囊状结构薄膜上进行在叶绿体基质中进行物质转化2H2O→4[H]+O2↑（在光和叶绿体中的色素的催化下）ADP+Pi+能量→ATP（在酶的催化下）CO2+C5→2C3（在酶的催化下）C3+【H】→（CH2O）+C5（在ATP供能和酶的催化下）能量转化叶绿素把光能先转化为电能再转化为活跃的化学能并储存在ATP中ATP中活跃的化学能转化变为糖类等有机物中稳定的化学能2.根据题意和图示可知，如图1叶绿体中所示的环形反应的生理过程为卡尔文循环，该循环过程中发生的反应为：在光合作用中R酶催化C5与CO2形成2分子3-磷酸甘油酸，3-磷酸甘油酸转化成C3，然后C3接受来自光反应产生的NADPH的还原剂氢以及酶的催化作用下形成有机物和C5。除外在某些条件下，R酶还可以催化C5和O2反应生成1分子C3和1分子2-磷酸乙醇酸，后者在酶的催化作用下转换为乙醇酸后通过膜上的载体（T）离开叶绿体。再经过代谢途径Ⅰ最终将2分子乙醇酸转换为1分子甘油酸，并释放1分子CO2。结合题意分析图2可知，通过转基因技术人为地在叶绿体中建立一个新的乙醇酸代谢途径，即将乙醇酸通过C酶和M酶的催化作用转化为苹果酸的途径Ⅱ，由于途径Ⅱ提高了苹果酸的含量，苹果酸通过代谢途径Ⅲ，使叶绿体基质内CO2的浓度增加，有利于提高光合速率。【详解】（1）根据以上分析可知，图1是叶肉细胞中部分碳代谢过程表示暗反应的过程图。（2）根据以上分析可知，图1中在某些条件下，R酶还可以催化C5和O2反应生成1分子C3和1分子2-磷酸乙醇酸，后者在酶的催化作用下转换为乙醇酸后通过膜上的载体（T）离开叶绿体。（3）①根据以上对图2的分析可知，通过转基因技术将C酶和M酶的编码基因转入作物甲，增加了途径Ⅱ，通过该途径将乙醇酸转换为苹果酸，降低叶绿体基质中乙醇酸的含量，减少其对叶绿体的毒害作用。②转基因操作后，通过途径Ⅱ提高了叶绿体中苹果酸的含量，然后苹果酸经过途径Ⅲ代谢产生了CO2，从而使叶绿体基质内CO2的浓度增加，提高暗反应所需的底物浓度，有利于提高光合速率。（4）根据题意和识图分析可知，T蛋白是膜上的将乙醇酸运出叶绿体的载体，乙醇酸运出叶绿体造成叶绿体中碳的丢失。因此找到并敲除载体T的基因，即可减少这一部分碳的丢失，进一步提高光合作用效率。所以“通过敲除T蛋白基因来进一步提高光合作用效率”的设想是可行的。本题考查光合作用的知识点，要求学生掌握光合作用的过程，特别是掌握光合作用中暗反应的过程以及物质变化。能够正确识图分析图1和图2中的代谢途径以及与光合作用之间的关系，结合图示获取有效信息，结合光合作用的知识点解决问题，这是该题考查的重点。11、组成和外貌食物链/食物网/营养结构顶极群落能量数量金字塔生物量物质的良性循环技术【解析】

生态系统的结构包括生态系统的组成成分和营养结构，组成成分又包括非生物的物质和能量，生产者、消费者和分解者，营养结构就是指食物链和食物网；生态系统的功能包括物质循环、能量流动和信息传递。【详解】（1）白天有各种蝶类、蜂类和蝇类活动，而到晚上只能看到夜蛾类和螟蛾类昆虫，这属于自然环境因素的时间节律所引起的群落的组成和外貌在时间结构上相应的周期变化，属于群落的时间结构；西双版纳热带雨林的动植物种类繁多，营养结构复杂，抵抗力稳定性高；该群落与当地气候和土壤条件处于最终平衡状态，为顶级群落。（2）生态系统中能量是单向传递、逐级递减的，因此营养级越高，能量越少，生物种类和数量一般也越少；各营养级之间的个体数量关系可以用数量金字塔表示，通过计算动物的生物量，可以推测各类动物在生态系统中的重要性。（3）南方的桑基鱼塘生态工程，实现了桑叶养蚕、蚕沙养鱼、塘泥作为桑树的肥料回到桑园，主要体现了农业生态工程的物质的良性循环技术。解答本题的关键是掌握生态系统的结构与功能的相关知识点，能够识记时间结构、顶级群落等概念，明确能量流动的特点是单向传递、逐级递减，进而利用所学知识结合题干要求分析答题。12、限制酶和DNA连接CaCl2基因突变引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）抗原-抗体杂交抑菌圈对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2、“分子缝合针”——DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3、PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2、常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最