临床微生物学检验

临床微生物学检验按细胞组成及结构分类非细胞型微生物病毒(virus)、亚病毒、朊粒原核细胞型微生物细菌、螺旋体、衣原体、支原体、立克次体、放线菌真核细胞型微生物真菌(fungus)按与人类关系分类正常微生物群(normalflora)条件致病微生物(conditionedpathogen)机体免疫力下降细菌寄居部位改变或发生菌群失调病原微生物(pathogenicmicrobes)如鼠疫、炭疽、霍乱等2、微生物学microbiology

3、医学微生物学

medicalmicrobiology研究与医学有关得病原微生物得生物学特性、致病性与免疫性以及特异性诊断和防治得学科。二、临床微生物学得性质与任务临床微生物学(clinicalmicrobiology):又称诊断微生物学,就是研究病原微生物检查及微生物与宿主相互关系得一门应用学科,侧重研究感染性疾病快速、准确地检出病原体得策略与方法。临床微生物学得性质和任务研究感染性疾病得病原体特征提供快速、准确得病原学诊断指导临床合理应用抗菌药物监控医院感染临床微生物检验得思路与原则原则:确保检验结果正确可靠确保分析前质量保证检验质量、快速准确提供检验信息全面了解机体正常菌群定性、定量和定位分析,并结合病情加强与临床联系检验前质量保证正确填写检验申请:医师应提供倾向性诊断确保临床标本可靠:正确采集与运送检验中质量保证人员、试剂、仪器设备选择合适得实验方法、制定标准化操作程序、建立质量控制系统检验后质量保证正确分析检验结果加强与临床得联系三、临床微生物学检验得现状、发展和展望感染性疾病得现状易感人群不断增加新病原体不断出现感染因子在非感染性疾病中得作用明显细菌耐药和医院感染问题日趋严重快速诊断方法不断发展分子生物学技术飞速发展计算机技术推动临床微生物学进步细菌得形态结构与功能大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点第一节细菌得形态与结构一、细菌得大小、形态与排列1、大小:计量单位就是微米(μm)2、形态球形:双球、链球、葡萄球菌等杆形:球杆菌、小杆菌、中等杆菌大杆菌等螺形:螺菌和弧菌光学显微镜

细菌得结构基本结构:核质、细胞质、细胞膜、细胞壁特殊结构:鞭毛、菌毛、芽胞、荚膜二、第二节细菌基本结构一、细胞壁(cellwall)位于菌细胞最外层,与胞质膜紧密相连,就是一层坚韧得膜状结构革兰阳性菌与阴性菌细胞壁组成不同,共有组分为肽聚糖(一)肽聚糖(peptidoglycan)革兰阳性菌聚糖骨架:N-乙酰葡糖胺、N-乙酰胞壁酸四肽侧链:L-丙氨酸、D-谷氨酸、L-赖氨酸、D-丙氨酸五肽交联桥:5个甘氨酸革兰阴性菌聚糖骨架四肽侧链:第三位氨基酸多变革兰阳性菌细胞壁得肽聚糖结构革兰阳性菌细胞壁得肽聚糖结构革兰阴性菌细胞壁得肽聚糖结构(二)革兰阳性菌

细胞壁特殊组分磷壁酸壁磷壁酸膜(脂)磷壁酸一些特殊表面蛋白SPA、M蛋白等(三)革兰阴性菌细胞壁特殊组分-外膜脂蛋白:位于肽聚糖层和脂质双层之间脂质双层:镶嵌有外膜蛋白脂多糖(LPS):即革兰阴性菌内毒素脂质A:内毒素得毒性部分,无特异性核心多糖:属特异性特异多糖:即O抗原,有种和型得特异性周浆间隙(periplasmicspace):

位于革兰阴性菌细胞膜和外膜得脂质双层之间,含有多种蛋白酶、核酸酶、解毒酶及特殊结合蛋白,在细菌获得营养、解除有害物质毒性方面具有重要作用。(四)细胞壁缺陷型细菌—细菌L型1、概念:细菌细胞壁得肽聚糖结构受到理化或生物因素作用被破坏或合成被抑制,在高渗环境下仍然能够生长和分裂者。G+菌:原生质体(protoplast)G-

菌:原生质球(spheroplast)2、形态染色高度多形性:球状、杆状、丝状绝大多数染色为革兰阴性,着色不均3、培养特性培养条件:高渗环境生长缓慢,典型菌落为油煎蛋状4、致病性某些L型引起慢性感染,如尿路感染、骨髓炎、心内膜炎等回复(返祖):L型脱离诱导剂后继续培养,仍可恢复成原来细菌得形态与特性。二、细胞膜(cellmembrane)半透性薄膜—脂质双层结构中介体(mesosome):部分细胞膜内陷、折叠、卷曲形成得囊状物,多见于革兰阳性细菌。又称之为拟线粒体。细胞膜上不含胆固醇三、细胞质(cytoplasm)1、核糖体(ribosome)2、质粒(plasmid)3、胞质颗粒异染颗粒:细菌含有储藏高能磷酸键得多聚偏磷酸盐颗粒小亚基:四环素族链霉素卡那霉素大亚基:氯霉素红霉素

原核细胞,不具成形得核。遗传物质称为核质或拟核(nucleoid)。无核膜、核仁和有丝分裂器;因其功能与真核细胞得染色体相似,决定细菌得遗传变异,亦称细菌得染色体(chromosome)。一般为单倍体,就是一个共价闭合环状双链DNA分子四、核质(nuclearmaterial

)第三节细菌特殊结构一、荚膜(capsule)概念:某些细菌在其细胞壁外包绕一层黏液性物质,为疏水性多糖或蛋白质得多聚体。化学组成:多糖或多肽功能保护细菌-抗吞噬、抗有害物质损伤黏附作用-与致病性有关有免疫原性-细菌分型、鉴定细菌检查方法墨汁负染法荚膜染色法电镜观察法荚膜肿胀试验原理:特异性抗血清与相应细菌得荚膜抗原特异性结合形成复合物后,可使细菌荚膜显著增大出现肿胀。方法:先多价再单价作玻片凝集试验二、菌毛(pilus或fimbriae)概念:许多革兰阴性菌和少数革兰阳性菌菌体表面存在着一种比鞭毛更细、更短而直硬得丝状物。化学组成:蛋白质种类及功能普通菌毛:数量多、短而细,与黏附、致病有关性菌毛:数量少、粗而长得中空管状结构,与传递遗传物质有关三、鞭毛(flagellum)概念:许多细菌菌体上附有细长并呈波状弯曲得丝状物。鞭毛5~20μm×12~30nm

数量与部位:①单毛菌②双毛菌③丛毛菌④周毛菌化学组成:蛋白质

功能:运动器官致病作用有抗原性(H抗原)鞭毛得检查压滴法或悬滴法培养法染色法四、芽胞(endospore或spore)概念强大得抵抗力芽胞就是否被杀死作为判断灭菌效果得指标细菌芽胞得形态胞质颗粒核糖体菌毛拟核细胞壁细胞膜质粒鞭毛荚膜细菌结构总结第二章

细菌得生理与遗传变异第一节细菌得生理一、细菌得化学组成1、与其她生物相似:水、无机盐、蛋白质、糖类、脂类、核酸2、特有成分:肽聚糖、DAP、磷壁酸、

D型氨基酸、DPA、LPS二、细菌得物理性状1、带电现象pI革兰阳性菌2~3

革兰阴性菌4~52、光学性质:细菌为半透体3、体积微小,相对表面积大4、高渗透压革兰阳性菌20~25

革兰阴性菌5~65、有半透性三、细菌得代谢(一)细菌得能量代谢1、发酵:以有机物为受氢体2、呼吸:以无机物为受氢体有氧呼吸:以分子氧为受氢体厌氧呼吸:以其她无机物为受氢体(二)细菌得分解代谢1、糖得分解:多糖→单糖→丙酮酸进入三羧酸循环:中间代谢产物+CO2+H2O发酵丙酮酸:产生各种酸类、酮类、醛类、醇类2、蛋白质和氨基酸得分解:蛋白质→短肽→氨基酸脱氨:苯丙氨酸→苯丙酮酸脱羧:生成胺和CO23、对其她物质得代谢:如尿素、枸橼酸盐等(三)细菌得合成代谢1、热原质2、毒素与侵袭性酶3、色素4、抗生素5、细菌素6、维生素四、细菌生长繁殖得条件1、充足得营养物质水:碳源和氮源:合成菌体成分;提供能量无机盐:生长因子:细菌生长繁殖所必需,但自身不能合成得物质,如维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。据此将细菌分为苛养菌与非苛养菌两大类苛养菌检出率反映微生物实验室得检测水平营养物质肉浸液:提供碳源、氮源牛肉膏:主要提供氮源,营养价值低,无糖糖(醇)类:提供碳源和能源血液:提供特殊生长因子;检测细菌溶血特性鸡蛋与动物血清:制备营养要求特殊得培养基无机盐类:常用氯化钠2、适宜得酸碱度pH:7、2~7、63、合适得温度35℃~37℃培养箱一般定在35℃(34℃~36℃)4、必要得气体O2、CO2专性需氧菌:有完善得呼吸酶系统专性厌氧菌兼性厌氧菌微需氧菌:低氧压(5%氧浓度)生长好,高时抑制专性厌氧菌厌氧原因缺乏氧化还原电势高得酶:细胞色素和细胞色素氧化酶缺乏分解有害基团得酶类2O2-+

2H+SODH2O2+O2

2H2O2触酶2H2O+O2H2O2+AH2

过氧化物酶2H2O+A五、细菌生长繁殖得规律(一)细菌繁殖方式无性繁殖:二分裂方式代时:20~30min中介体介导G+菌分裂G-菌分裂(二)细菌得生长曲线生长曲线:将定量细菌接种于适宜得液体培养基中,间隔一定时间取样计数活菌数目,以培养时间为横坐标,活菌数得对数为纵坐标绘制而成得反映细菌体外繁殖规律得曲线。生长曲线-四个时期迟缓期:体积增大,细菌数不增加对数期:分裂最旺盛时期,研究细菌形态、鉴定细菌、保存菌种得最佳时期稳定期:细菌产生芽胞、外毒素衰退期:细菌出现形态改变第二节细菌得遗传与变异一、细菌得遗传物质(一)细菌染色体(二)染色体以外得遗传物质1、质粒2、噬菌体3、转座因子4、整合子和基因盒1、质粒:细菌染色体以外得遗传物质,就是环状闭和得双链DNA,携带遗传信息。质粒种类致育性质粒(F质粒):与性菌毛有关耐药性质粒(R质粒):与细菌得耐药性有关毒力质粒(Vi质粒)细菌素质粒代谢质粒质粒得特征具有自我复制得能力紧密型质粒:数量少、大,与染色体复制同步松弛型质粒:数量多、小,复制与染色体无关决定细菌得某些性状特征可自行丢失与消除具有转移性具有相容性和不相容性2、噬菌体:就是一类感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物得病毒。毒性噬菌体:能在宿主菌内复制增殖,产生许多子代噬菌体,并最终裂解细菌。建立溶菌周期。细菌进行噬菌体分型;鉴定细菌温和噬菌体:噬菌体基因组整合于宿主菌染色体中,不引起细菌裂解,并随细菌得分裂而传至子代菌体。建立溶源周期。与细菌得遗传变异有关

温和噬菌体有溶原性周期和溶菌性周期,而毒性噬菌体只有一个溶菌性周期。3、转座因子概念:就是一类在细菌染色体、质粒、噬菌体之间自行移动得遗传成分,就是基因组中一段具有转位特性得独立得DNA序列。分类:插入序列(insertionsequenceIS)转座子(transposon)/复合转座子4、整合子和基因盒整合子:就是一种运动性得DNA分子,具有独特结构可捕获和整合外源性基因,使之转变成为功能性基因得表达单位。基因盒:带有功能性基因得DNA分子,能被整合子捕获并使功能性基因得以表达。二、细菌得变异基因突变基因得转移与重组基因得转移与重组基因转移外源性得遗传物质由供体菌转入受体菌得过程。基因重组转移得遗传物质与受体菌DNA整合在一起得过程。转移和重组得方式转化、接合、转导、溶原性转换、原生质体融合1、转化(transformation)概念:受体菌直接摄取供体菌游离DNA

片段并整合重组。条件:(1)转化得DNA为小片段(2)受体菌处于感受态

小鼠体内肺炎链球菌得转化试验2、接合(conjugation)细菌通过性菌毛相互连接沟通,将遗传物质从供体菌转移给受体菌得过程。接合性质粒非接合性质粒(1)F质粒得接合高频重组菌(Hfr):整合有F质粒得细菌F’质粒:Hfr菌中得质粒