广东省茂名市五校联考2024-2025学年高四复课班第二学期第一次联考生物试题含解析

广东省茂名市五校联考2024-2025学年高四复课班第二学期第一次联考生物试题注意事项:1．答题前，考生先将自己的姓名、准考证号码填写清楚，将条形码准确粘贴在条形码区域内。2．答题时请按要求用笔。3．请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试卷上答题无效。4．作图可先使用铅笔画出，确定后必须用黑色字迹的签字笔描黑。5．保持卡面清洁，不要折暴、不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．下图为生长素（IAA)对豌豆幼苗茎内赤霉素生物合成影响的示意图。图中GA1、GA8、GA20、GA29是四种不同的赤霉素，只有GA1能促进豌豆茎的伸长。若图中酶1或酶2的基因发生突变，会导致相应的生化反应受阻。据图分析，下列叙述错误的是（）A．酶2基因突变的豌豆，该植株较正常植株高B．用生长素合成抑制剂处理豌豆幼苗的顶芽，该植株较正常植株矮C．对酶1基因突变的豌豆幼苗施用GA20，该植株可恢复正常植株高度D．对去顶芽豌豆幼苗外施适宜浓度IAA，该植株茎内GA1的合成可恢复正常2．为了确定下丘脑在体温调节中的作用，某实验小组做了如下实验：刺激小白鼠下丘脑前部，发现小白鼠有出汗现象，刺激小白鼠下丘脑后部，小白鼠出现寒战现象。据此判断下列叙述正确的是（）A．下丘脑前部是产热中枢所在地，下丘脑后部是散热中枢所在地B．刺激小鼠的下丘脑不同位置出现的变化说明下丘脑通过神经调节发送信息C．刺激小鼠下丘脑的前部，还可观测到的是小鼠毛细血管收缩D．下丘脑是体温调节中枢和体温感觉中枢3．下列关于试管牛和克隆牛的叙述，错误的是（）A．均需卵细胞参与 B．均需胚胎移植技术C．均需进行胚胎体外培养 D．均是无性生殖技术4．下列关于细胞结构与功能的叙述，正确的是（）A．剧烈运动时，哺乳动物成熟的红细胞有氧呼吸速率将加快B．无氧条件下，人蛔虫细胞的细胞质基质中能够产生ATP和乳酸C．人在青春期时，由高尔基体合成的性激素增多D．提高光照强度，水绵的叶绿体类囊体薄膜合成糖类的速率将提高5．中国借用丝绸之路的历史符号积极打造“一带一路”，小麦原产西亚，后来沿着丝绸之路传入我国。下列有关叙述正确的是（）A．传入我国的小麦与原产地小麦的基因库之间有区别B．拓荒种麦，实现了群落的初生演替C．麦田群落与森林群落相比，不存在空间结构D．引入外来物种均会对本地原有物种的生存构成威胁6．下列关于实验的叙述正确的是A．观察人体口腔上皮细胞的线粒体时，用健那绿染色前需要先用盐酸处理B．在“生物体维持pH稳定的机制”的实验中，清水组和缓冲液组都可作为对照组C．不可用绿色植物成熟叶肉细胞进行细胞失水和吸水的观察实验D．可用澄清的石灰水检验CO2的生成，来探究酵母菌的呼吸方式二、综合题：本大题共4小题7．（9分）下表是某微生物培养基的配方。请分析回答下列问题：编号①②③④⑤成分（NH2）2SO2KH2PO2FeSO2CaCl2H2O含量1．2g2．1g1．5g1．5g111mL（1）培养基的配方是要根据微生物的营养需求而设定的，从培养基的营养成分看，此培养基可用来培养的微生物同化作用类型是_________。利用该培养基培养微生物时，微生物所需要的碳源来自_____。为防止杂菌污染，常用____________________的方法对培养基灭菌。（2）若要观察微生物的菌落的特点，培养基中还应添加的成分是_____。鉴定菌种时，可根据菌落的_________（至少答两点）等方面的特征。菌落计数时，一般选取菌落数为_________之间的平板，该方法统计的菌落数量比实际活菌数目少，原因是_____________。（3）如果在上面的配方中加入一定的纤维素，就可以富集培养_________微生物，在筛选该菌种的过程中，通常用_____染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对该菌种进行筛选。为了长期保存该菌种，可以采用_____的方法。8．（10分）已知某种昆虫是XY型性别决定的生物，每一对雌雄个体杂交后代有200个左右，其眼睛的颜色有红眼、粉红眼和白眼三种类型，且受两对等位基因控制(相关基因用A/a、B/b表示，考虑X、Y染色体的同源区段)，A和B同时存在时为红眼，无B但有A时表现为粉红眼，无A时表现为白眼。现有两个纯合的品系甲、乙，甲表现为红眼，乙表现为白眼，每个品系中都有雌雄。某人用一只甲品系的雌性个体与另一只乙品系的雄性个体进行杂交实验，F1无论雌雄都是红眼，然后让F1雌雄个体随机交配，统计F2的表现型及比例为红眼：粉红眼：白眼=9：3：4，仔细观察发现，粉红眼中只有雄性个体，其他眼色雌雄个体都有。回答下列问题：（1）由题中信息可知，这两对基因的遗传遵循________定律。（2）经分析，对于A/a、B/b所在染色体的合理假设是________。（3）亲本中甲品系雌性个体、乙品系雄性个体最可能的基因型分别是________。（4）请根据已有的实验材料，设计实验证明A/a、B/b所在染色体的假设的合理性(要求写出杂交方案、预期实验结果及结论)。________9．（10分）“绿水青山，就是金山银山”，南方某地为了恢复被破坏的常绿阔叶林而停止砍伐一段时间后，该地逐渐得以恢复。请回答以下问题：（1）该地区某植物种群具有的特征有______（填序号）。①出生率②垂直分层现象③年龄组成④空间特征⑤复杂的种间关系⑥丰富度（2）该地区常绿阔叶林的恢复过程中群落的演替类型为_____________，其速度比裸岩上进行的演替要快一些，速度较快的原因除了植物的种子或者繁殖体可能保留外，还可能是原有的______条件得到了基本保留。（3）太阳能输入该生态系统的第一营养级后，以______能的形式在生物群落中流动。输入第一营养级能量的去向，一部分____；一部分____。（4）该地区某养鸡场为了提高家禽产蛋率，在增加营养的基础上延长光照时间，这一过程中光刺激传递的信息属于______信息。生态系统中，各种各样的信息在生命活动的正常进行、生物种群的繁衍、____等方面起着重要作用。（5）与苔原生态系统相比，常绿阔叶林生态系统的抵抗力稳定性更高，原因是___。10．（10分）萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。①这是一种定点的_________技术。②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。11．（15分）蛋白质是生命活动的主要承担者。回答下列与蛋白质相关的问题：（1）从氨基酸分子水平分析，决定蛋白质结构多样性的原因是_______。结构的多样性决定了功能的多样性，例如酶能够通过______的机制催化生化反应高效进行。（2）“分子伴侣”是一类能帮助多肽进行初步折叠、组装或转运的蛋白质，由此推测其主要存在于______（填细胞结构）中。“ATP合成酶”是一类分布于生物膜上催化ADP合成ATP的复合蛋白质，由此推测，在动物细胞中其主要存在于______（填细胞结构）上。（3）利用蛋清做如下实验。实验一：在蛋清中加入食盐，会看到白色的絮状物出现。兑水稀释后絮状物消失，蛋清恢复原来的液体状态。实验二：加热蛋清，蛋清变成白色固体。恢复常温后，凝固的蛋清不能恢复液体状态。从蛋白质结构的角度分析，上述两个实验结果产生差异的原因是______。（4）基因对生物性状的控制也是通过蛋白质来实现的。例如，与圆粒豌豆相比较，皱粒豌豆的DNA中插入了一段外来DNA序列，导致淀粉分支酶不能合成，最终导致细胞内淀粉含量低，游离蔗糖含量高，种子不能有效保留水分而皱缩。由此说明基因、蛋白质与性状的关系是______。

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、C【解析】

分析题图可知，基因1可以通过控制合成酶1促进GA20→GA1的过程，基因2可以通过控制合成酶2促进GA1→GA8和GA20→GA29

的反应过程，而IAA可以抑制GA1→GA8和GA20→GA29

的反应过程。【详解】A、由题意可知，酶2促进GA1→GA8，酶2基因突变的豌豆，酶2减少或没有，GA1→GA8的过程受阻，豌豆体内GA1含量升高，植株较正常植株高，A正确；B、生长素极性运输抑制剂能抑制生长素由形态学上端向下端运输，豌豆幼苗茎内赤霉素GA20→GA1的合成过程受阻，豌豆幼苗茎因缺乏GA1而导致植株较矮，B正确；C、分析图示可知，GA20不能促进豌豆茎的伸长，对酶1基因突变的豌豆幼苗施用GA20，该植株不能恢复正常植株高度，C错误；D、分析题图可知，生长素有促进GA20→GA1的作用，去顶芽豌豆幼苗外施适宜浓度IAA，该植株茎内GA1

的合成可恢复正常，D正确。故选C。2、B【解析】

体温恒定调节：神经-体液调节【详解】A、刺激下丘脑前部，小白鼠出现出汗现象，说明前部是散热中枢所在地；刺激下丘脑后部，小白鼠出现寒战现象，说明后部是产热中枢所在地，A错误；B、刺激小鼠的下丘脑前部、后部等不同位置出现的变化说明下丘脑通过神经调节发送信息调控身体的体温，B正确；C、刺激小鼠下丘脑的前部，小白鼠出现出汗现象，所以还可观测到的是小鼠毛细血管舒张，C错误；D、躯体感觉中枢包括体温感觉中枢都在大脑皮层，D错误。故选B。本题考查体液调节的过程，重点是分析出小鼠下丘脑前部和后部的主要作用是什么。3、D【解析】

试管动物和克隆动物的比较：试管动物克隆动物生殖方式有性生殖无性生殖技术手段体外受精、胚胎移植核移植技术、胚胎移植遗传规律遵循不遵循【详解】A、试管牛体外受精需要卵细胞的参与，克隆牛核移植技术需要去核的卵细胞，A正确；B、试管牛和克隆牛都需要胚胎移植，B正确；C、试管牛和克隆牛均需进行胚胎体外培养，C正确；D、试管牛是经过体外受精和胚胎移植产生的，属于有性生殖，克隆牛是核移植技术、胚胎移植产生的，属于无性生殖，D错误。故选D。4、B【解析】

【详解】A、哺乳动物成熟的红细胞中没有线粒体，只能通过无氧呼吸产生能量，A错误；B、无氧条件下，蛔虫细胞在细胞质基质进行无氧呼吸，产生乳酸，并释放少量的能量，因此有少量的ATP，B正确；C、性激素在内质网上合成，C错误；D、叶绿体类囊体薄膜上进行光反应，产生氧气、ATP和NADPH，暗反应在叶绿体基质中进行，从而合成糖类，D错误。故选B。5、A【解析】

1、群落演替是指一个植物群落被另一个植物群落所代替的现象。群落演替的类型主要有初生演替和次生演替。发生在火山灰、冰川泥和裸露的沙丘上的演替属于初生演替。2、生物多样性包括基因的多样性、物种的多样性和生态系统的多样性。外来物种入侵会导致生物多样性的下降。【详解】A、传入我国的小麦与原产地小麦存在地理隔离，由于基因突变的不定向性和不同自然条件的选择作用，导致它们的基因库之间存在区别，A正确；B、在人们拓荒种麦的过程中发生了群落的次生演替，B错误；C、麦田群落与森林群落一样，都存在空间结构，C错误；D、外来物种引进后若能大量繁殖，才会对本地原有物种的生存构成威胁，D错误。故选A。6、B【解析】健那绿属于活体染色剂，染色前不需要用盐酸处理，A项错误；在“生物体维持pH稳定的机制”的实验中，清水组和缓冲液组相互对照，都可作为对照组，B项正确；绿色植物成熟叶肉细胞的叶绿体位于原生质层中，可根据细胞中绿色的位置判断质壁分离及复原，C项错误；酵母菌有氧和无氧条件下均可以产生二氧化碳，不能用澄清石灰水检验CO2是否生成来探究酵母菌的呼吸方式，但可以用澄清石灰水的浑浊情况判断二氧化碳生成的多少，进而判断酵母菌的呼吸方式，D项错误。二、综合题：本大题共4小题7、自养型空气中的二氧化碳高压蒸汽灭菌琼脂形状、大小、隆起程度、颜色、透明度31-311统计的一个菌落可能来自两个或两个以上细胞分解纤维素刚果红甘油管藏【解析】

培养基为微生物提供生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质；营养物质归纳为碳源、氮源、生长因子、无机盐和水；根据化学成分分为合成培养基、天然培养基等根据用途分选择培养基、鉴别培养基；根据性质分为液体、半固体和固体培养基。【详解】（1）据表分析，该培养基的配方中主要的营养物质有氮源硫酸铵、无机盐和水，缺少碳源，所以此培养基可用来培养的微生物同化作用类型是自养型；该培养基培养的微生物的碳源来自于空气中的二氧化碳；对微生物培养基灭菌通常用高压蒸汽灭菌。（2）微生物的菌落需要在固体培养基的表面生长，因此培养基中需要添加凝固剂—琼脂，使液体培养基凝固成固体培养基；鉴定菌种时，可根据菌落形状、大小、隆起程度、颜色、透明度特征进行鉴定；菌落计数时，常用稀释涂布平板，一般选取菌落数为31-311之间的平板；用该方法统计时，由于一个菌落可能来自两个或两个以上细胞繁殖而成，所以统计的菌落数量往往比活菌的实际数量少。（3）可以根据微生物对营养物质的需求，选择培养特定的微生物，所以在上面的配方中加入一定的纤维素，就可以富集培养分解纤维素的微生物；通常利用刚果红染色法来筛选纤维素分解菌，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物；长期保存菌种，可以采用甘油管藏的方法，即将菌液转移到甘油中，与甘油充分混合后，放在-21℃的冷藏箱中保存。解答此题要求考生识记无菌技术，掌握微生物培养的一般条件和分离微生物的方法，能结合所学的知识准确答题。8、基因自由组合(或基因分离和基因自由组合)A/a位于常染色体上，B/b可能只位于X染色体上，也可能位于X染色体和Y染色体的同源区段AAXBXB、

aaXbY

或AAXBXB、aaXbYb杂交方案：选择甲品系的雄性个体与多只乙品系的雌性个体进行杂交，单独统计每个杂交组合中子代的表现型。预期结果及结论：若部分杂交组合的子代中出现粉红眼雄性个体，则B/b只位于X染色体上；若所有杂交组合的子代全部为红眼，则B/b位于X染色体和Y染色体的同源区段。【解析】

由题意知；F2的表现型及比例为红眼：粉红眼：白眼=9：3：4，类似于9：3：3：1，说明该昆虫的眼色受两对等位基因控制，遵循基因的自由组合定律，又因为粉红眼中只有雄性个体，说明控制眼色有一对等位基因位于性染色体上。【详解】（1）由题中信息可知，该昆虫眼色有红眼、粉红眼和白眼三种类型，且受两对等位基因控制，由F2的表现型及比例为红眼：粉红眼：白眼=9：3：4，可推知这两对基因的遗传遵循自由组合定律。（2）根据亲本的表现型和F2的表现型及比例可知，这两对基因位于两对同源染色体上，且F2中粉红色全为雄性，说明性状与性别有关，所以A/a位于常染色体上，B/b可能只位于X染色体上，也可能位于X染色体和Y染色体的同源区段。若B/b只位于X染色体上，则亲本基因型为AAXBXB、aaXbY；若B/b位于X染色体和Y染色体的同源区段，则亲本的基因型为AAXBXB、aaXbYb。（3）由上问解析可知：A/a位于常染色体上，B/b可能只位于X染色体上，也可能位于X染色体和Y染色体的同源区段，则甲品系的雌性个体的基因型可能为AAXBXB，乙品系的雄性个体的基因型可能为aaXbY或aaXbYb。（4）若要验证基因的位置，通常设计的杂交组合为显性雄亲本×隐性雌亲本，即红眼雄性和白眼雌性。当B/b只位于X染色体上时，亲本组合为AAXBY和aaXbXb，子代为AaXBXb和AaXbY，表现型为红眼雌性和粉红眼雄性，或亲本为AAXBY和aaXBXB，子代为AaXBXB和AaXBY，表现型全为红眼；当B/b位于X染色体和Y染色体的同源区段时，亲本组合为AAXBYB和aaXbXb，子代为AaXBXb和AaXbYB，表现型全为红眼，或亲本组合为AAXBYB和aaXBXB，子代为AaXBXB和AaXBYB，表现型全为红眼。本题考查基因自由组合的特殊情况，解题关键是根据题干信息和9：3：4的比例，分析出基因和性状的对应关系。验证基因的位置时，通常设计的杂交组合为显性雄亲本×隐性雌亲本。9、①③④次生土壤化学生产者呼吸作用以热能的形式散失用于生产者的生长发育、繁殖等物理调解种间关系以维持生态系统稳定常绿阔叶林生态系统组分多、食物网复杂【解析】

1.种群的数量特征包括：种群密度、出生率和死亡率、迁入率和迁出率、年龄结构、性别比例等。2.初生演替是指在一个从来没有被植物覆盖的地面或者是原来存在过植被，但被彻底消灭的地方发生的演替；次生演替是指在原有植被虽已不存在，但原有土壤条件基本保留，甚至还保留了植物的种子或其它繁殖体的地方发生的演替。3.生态系统中的能量流动是指能量的输入、传递、转化散失的过程。流经生态系统的总能量是生产者固定的太阳能总量。能量流经每个营养级时的去向包括：以呼吸热的形式散失，用于自身的生长、发育和繁殖。4.信息传递包括物理信息、化学信息和行为信息。生态系统中生物的活动离不开信息的作用，信息在生态系统中的作用主要表现在：①维持生命活动的正常进行；②有利于种群的繁衍；③调能够节生物的种间关系，以维持生态系统的稳定。【详解】（1）种群的特征包括④空间特征和数量特征，其中数量特征包括死亡率和①出生率、③年龄组成、性别比例、迁入率和迁出率等；而②垂直分层现象和⑤复杂的种间关系属于群落水平研究的问题，⑥丰富度属于物种丰富度。综上所述，某植物种群具有的特征有①③④。（2）根据以上分析可知，该地区常绿阔叶林的恢复过程中群落的演替类型为次生演替，由于植物的种子或者繁殖体可能保留和原有的土壤条件条件得到了基本保留，使得其速度相对于裸岩上进行的演替要快一些。（3）太阳能输入该生态系统的第一营养级后，能量以化学能形式储存在有机物中，伴随着物质循环在生物群落中流动的，输入第一营养级能量的去向，一部分在细胞呼吸过程中以热能的形式散失了，一部分用于自身的生长、发育和繁殖。（4）光刺激传递的信息属于物理信息，生态系统中，各种各样的信息在生物的正常生命活动的进行、种群的繁衍、调节种间关系维持生态系统稳定性等方面起着重要作用。（5）与苔原生态系统相比，常绿阔叶林生态系统的物种丰富度较丰富，生态系统的组分多、营养结构较复杂、自我调节能力较强，抵抗力稳定性更高。本题考查种群、群落和生态系统的知识点，识记种群的数量特征和空间特征以及生态系统信息传递的种类及作用，能够区分种群的特征和群落的特征，把握群落水平上研究的问题和群落的演替类型，掌握生态系统能量流动的过程和途径，理解生态系统稳定性的原因，这是该题考查的重点。10、限制酶和DNA连接CaCl2基因突变引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）抗原-抗体杂交抑菌圈对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2、“分子缝合针”——DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3、PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2、常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。【详解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PC