植物细胞工程课件高二下学期选择性必修3

第二章细胞工程第一节植物细胞工程（第1课时）

除了传统的栽培方式，草莓和香蕉是否可以通过其他方式培养？

它们可以通过植物组织培养生产。植物组织或细胞培养的理论基础是细胞全能性。科学家如何证实植物细胞具有全能性呢？一、细胞的全能性（一）全能性的发现过程1．1902年，哈伯兰特的预言：离体的植物细胞具有全能性，在合适的条件下，能够发育成为完整的植物体。2．1937年，用胡萝卜根的小块组织，在人工培养条件下成功地诱导出分化程度低、具有分裂能力的愈伤组织，但未诱导出芽和根。3．1958年，斯蒂瓦特等人用胡萝卜韧皮部的组织块培养出完整植株，该植株可以开花结果。证实了哈伯兰特的预言。（二）全能性的概念和原因1．概念

细胞分裂和分化后，仍然具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。2．原因

生物体的细胞中都含有该物种的全套遗传物质，都有发育成完整个体所必须的全部遗传物质。（二）全能性的概念和原因

生物体内细胞为什么不能表现全能性呢？

在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达，从而形成生物体的不同组织和器官。易错辨析（1）细胞具有全能性≠细胞体现全能性

细胞的全能性指的是细胞的一种潜在能力，理论上，几乎所有的细胞都具有全能性，但是只有在某些条件下发育为完整个体或分化成其他各种细胞，才能体现其全能性。易错辨析（2）植物细胞的全能性较容易表现出来，高度分化的动物细胞的细胞核也具有全能性，但是动物体细胞的全能性目前仍难以得到验证。

从遗传物质的角度思考植物的花粉具有全能性吗？（3）因为一个染色体组携带着控制一种生物生长发育、遗传和变异的全套遗传信息，配子中至少含有一个染色体组，所以从理论上讲配子也具有全能性。易错辨析

植物的种子发育成完整植株，是否体现了细胞的全能性？（4）种子的发育不能体现细胞全能性。因为种子中的胚已经完成了早期发育，相当于新植物体的幼体，没有体现出细胞具有发育成完整植株的潜能。（果皮）种皮子叶胚芽胚轴胚根胚胚乳（贮存营养）拓展细胞全能性大小（1）植物细胞＞动物细胞（2）受精卵＞生殖细胞（精子、卵细胞）＞体细胞（3）体细胞分化程度低的＞体细胞分化程度高的（4）幼嫩的组织细胞＞衰老的组织细胞（5）细胞分裂能力强的＞细胞分裂能力弱的二、植物组织培养技术（一）植物组织培养技术的概念

植物组织培养技术是利用细胞全能性，在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体等，在培养基上培养，使其发育成部分或完整植株（目的）的技术。原理保证外植体营养目的（二）植物组织培养技术的过程1．选材

植物体的所有部位都可以作为植物组织培养的材料吗？

植物的茎尖、根尖、幼嫩的叶片、花药是植物组织培养中常用的外植体，因为它们分裂能力强，分化程度低。因此，在利用不同的外植体进行培养时，需要对材料进行选择。（二）植物组织培养技术的过程1．选材

例如，在利用胡萝卜的根进行组织培养时，一般选取含有形成层的部分作为外植体。

形成层是位于木质部和韧皮部之间的一种分生组织。可不断产生新的木质部和韧皮部，使根茎不断加粗。（二）植物组织培养技术的过程

胡萝卜根部不含叶绿体，植物组织培养长出的植物叶片含有叶绿体吗？

含有。因为根部的细胞含有全套遗传物质，可以指导叶绿体的形成。2．消毒

为了避免微生物的污染，经常需要对外植体消毒，消毒时需要注意什么？

消毒过程中应避免消毒剂对外植体的生长、分化过程产生不良影响。因此消毒后要用无菌水充分冲洗。（二）植物组织培养技术的过程2．消毒

消毒过程经常使用哪些试剂？酒精、过氧化氢溶液、次氯酸钠溶液。

消毒是除去外植体表面还是内部的微生物？除去外植体表面的微生物。3．接种

将外植体置于适宜的培养基上的操作称为接种。（二）植物组织培养技术的过程3．接种

接种用的培养基需要含有哪些物质来保证细胞生长所需的营养条件？含有适量的水分、无机盐、碳源、氮源、维生素以及植物激素等。

培养基中一般提供的碳源是什么？蔗糖或葡萄糖。4．诱导脱分化和再分化

阅读教材47~48页中“诱导脱分化”和“诱导再分化”中的内容，思考下列问题：（1）什么是植物细胞脱分化？（2）脱分化后形成的愈伤组织具有什么特点？哪些细胞更易被诱导成愈伤组织？（3）什么是愈伤组织再分化？再分化的产物有哪些？学生活动

将已有特定结构和功能的植物组织，在一定的条件下，诱导其细胞改变发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的细胞，这一过程称为植物细胞脱分化。细胞脱分化

愈伤组织是一团没有特定形态、结构和功能的薄壁细胞，一般处于旺盛分裂状态。具有分生能力的植物组织或细胞更容易被诱导形成愈伤组织。愈伤组织

愈伤组织生长一段时间，将其移植到新的培养基上继续培养，经诱导分化，形成芽和根等器官，或进一步发育成完整植株，这一过程称为再分化。

再分化后可以发育成新植株，也可以形成胚状体。细胞再分化生芽生根

根据来源不同，胚状体分为体细胞胚和生殖细胞胚两种。体细胞胚（假如基因型为AaBb）一般来源于植物二倍体的体细胞，如根、茎、叶的组织，这些可以发育为正常的二倍体植株。

推理一下，生殖细胞来源的胚状体怎样才能发育成正常可育的植株？基因型和原植株是否相同？

生殖细胞胚发育的幼苗为单倍体，可以在幼苗期用秋水仙素处理，恢复为二倍体植株。基因型可能会发生改变，用秋水仙素处理后的基因型可能为AABB、AAbb、aaBB或aabb。问题与讨论

外植体种类和培养目的的不同，对培养基的成分有不同的要求。培养基中生长素和细胞分裂素的相对浓度会影响愈伤组织再分化为根和芽的过程。以烟草为例：生长素浓度/细胞分裂素浓度结果比值高比值低比值适中有利于根的形成有利于芽的形成促进愈伤组织的形成培养基的pH等对再分化过程也有影响。易错辨析

脱分化在黑暗中进行，再分化需要光照条件。

愈伤组织形成过程中，为何需要避光培养？

因为植物组织培养中脱分化的目的是培养出愈伤组织，一旦被光照射后会促进组织分化，无法达到实验目的。

再分化形成的植株幼苗可以直接移栽到大田里吗？

对分化形成的幼小植株需要进行炼苗，使之逐渐适应自然环境，以保证幼苗移栽到大田能顺利成活。炼苗成功后，才能将植株移栽到大田，用于生产。5．炼苗移植

结合植物组织培养技术的过程和图2-1-3的示意图，用箭头和文字描述的形式自己绘制植物组织培养过程的流程图。优良母体分离茎尖消毒愈伤组织生芽转入生芽培养基接种脱分化转入生根培养基芽分化大田生根炼苗生根后移栽学生活动课堂小结1．植物组织培养技术植物组织培养技术原理植物细胞的全能性过程选材消毒接种诱导脱分化诱导再分化炼苗移植2．脱分化与再分化的比较内容脱分化再分化过程形成物的特点需要条件外植体→愈伤组织愈伤组织→幼苗排列疏松、高度液泡化的薄壁组织有根、有芽离体、适宜的营养、生长素与细胞分裂素比例适中、一般不需要光离体、适宜的营养、生长素与细胞分裂素的比例高或低分别诱导生根或生芽、光照1．下列关于植物细胞全能性的叙述，不正确的是（

）A．同一个体不同细胞的遗传物质相同，全能性高低也相同B．具有某种生物全部遗传信息的细胞都具有全能性的特点C．植物体内的细胞因基因的选择性表达不能表现出全能性D．植物组织培养的全过程可证明分化的植物细胞具有全能性A2．用高度分化的植物细胞、组织或器官进行组织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误的是（

）A．该愈伤组织是细胞经过脱分化形成的B．该愈伤组织的细胞没有全能性C．该愈伤组织是由一团没有特定形态、结构和功能的薄壁细胞组成的D．该愈伤组织可以再分化形成胚状体或芽B第二章细胞工程第一节植物细胞工程（第2课时）

一株花卉用分株法繁殖后代，一般一年只能繁殖出几株到几十株新植株；采用植物组织培养技术，一年则可以繁殖出几万甚至数百万株新植株。

以天竺葵为例，如何进行植物组织培养呢？一、实验目的1．学会配制植物组织培养的培养基（如MS培养基），学会外植体的制备、接种、消毒、灭菌等多项技术。2．掌握植物激素在愈伤组织再分化等过程中的作用，学会合理使用植物激素。3．尝试进行植物组织培养，关注植物组织培养技术在生产中的应用。二、实验原理1．植物体的每个体细胞都携带了来自受精卵的完整的基因组。

当植物细胞脱离了原来植物体的组织、器官而处于离体状态时，经过适当处理后，它们在适宜的培养基上，经过脱分化、再分化，可发育成完整的植株。2．组织培养得到的试管苗是非常幼嫩的植株。

它们生长在试管或培养瓶内，在恒温、高湿、弱光、无菌和有完全营养供给的条件下，植物表面蜡质和角质层等保护组织不发达，气孔数目少，有叶绿体但光合作用能力差。这样的试管苗一般要经过炼苗，以逐渐适应自然环境下的生长条件。三、实验器材和试剂1．天竺葵幼嫩叶片。2．高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、光照培养箱、冰箱、烘箱、摇床、显微镜、镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、定时器、温度控制器、培养架、锥形瓶、天平、酸度计、电炉等。高压蒸汽灭菌锅光照培养箱烘箱超净工作台摇床3．MS母液、酒精、氯化汞、氢氧化钠、吲哚丁酸（简称IBA，内源生长素）、萘乙酸（简称NAA，生长素类生产调节剂）和6-苄氨基嘌呤（简称6-BA，细胞分裂素类生产调节剂）等。（一）培养基的配制与灭菌

植物组织培养中常用的培养基是MS培养基。MS培养基含有20多种营养成分，包括大量元素如N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素如B、I、Cu、Mn、Zn、Mo、Co、Fe，还包括甘氨酸、维生素、肌醇、烟酸等有机物。四、实验步骤（一）培养基的配制与灭菌

实验室通常先配制MS培养基母液并置于4℃的环境下保存。实验时再根据需要，用MS培养基母液制备MS培养基。C、H、O、N、P、S、K、Ca、MgFe、Mn、Zn、Cu、Co、Mo（一）培养基的配制与灭菌配制各种母液（1）无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。（2）激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/mL的质量浓度单独配制成母液。（3）用母液配制培养基时，需要根据母液的浓缩倍数计算用量。拓展1．配制MS培养基母液Ⅰ50mL烧杯中混合均匀母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各5mL蔗糖30g琼脂9g加蒸馏水800mL边加热边搅拌使液体呈半透明状加入适当加入植物激素加蒸馏水定容至1L

培养基应冷却后再分装还是趁热分装，为什么？

趁热分装，冷却后琼脂凝固，无法分装。2．分装与灭菌（1）分装

趁热将培养基进行分装，通常将培养基倒入500mL的烧杯中，再倒入50mL或100mL的锥形瓶中。倒入培养基的量一般为锥形瓶容量的1/5～1/4，倒入时不要让培养基粘到瓶口或瓶壁上。

分装完毕后，及时用牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎好。（2）灭菌

将分装好的培养基连同剪刀、镊子等器具一起放入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃下灭菌20min。培养基通常在10℃的环境下储藏备用。

（1）配置好MS培养基应先调节pH值还是先灭菌？为什么？先调节pH值，如果灭菌后再调节pH容易污染培养基。

（2）为了彻底灭菌，灭菌时间越长越好？若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。

（3）如何检验是否灭菌彻底？等灭菌的培养基自然冷却后，置于30℃的培养室中观察3d，若无菌落产生，说明灭菌彻底。易错辨析（二）外植体的选择与制备

植物组织培养的各项操作均需要在无菌室中或超净工作台上进行。工作台消毒后摆放好解剖刀、镊子、酒精灯等器具以及经过消毒处理过的外植体、用于接种的无菌培养基等。

阅读教材50页“外植体的选择与制备”中的内容，思考：应选用天竺葵的哪些部位作为外植体，原因是什么？如何给外植体消毒？流程是怎样的？学生活动（二）外植体的选择与制备1．外植体的选择

选用天竺葵的茎尖、芽、幼叶、根尖、幼嫩的种子作为外植体。

因为这些外植体分裂能力强容易形成愈伤组织。最好在植物生长开始的时期取材，若在植物生长末期或已经进入休眠期取材，则外植体会对诱导反应迟钝或无反应，愈伤组织不易形成。（二）外植体的选择与制备2．外植体的消毒幼嫩叶片流水冲洗70%酒精浸泡30s无菌水冲洗2~3次无菌滤纸吸干水分0.1%氯化汞浸泡5min无菌水漂洗4~6次无菌滤纸吸干水分氯化汞有毒，消毒后及时回收氯化汞溶液以保护环境。（二）外植体的选择与制备3．外植体的制备

在无菌条件下，切去天竺葵叶柄，将叶片从叶脉处剪开，再切成1cm×1cm小片作为外植体，并放入无菌培养皿中备用。（三）接种

将外植体放入已经制备好的诱导愈伤组织形成的无菌培养基上（一般将天竺葵叶背面接触培养基），做好标记放在适宜条件下培养。（三）接种

1．接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上灼烧（防止交叉污染），冷却后再接种。2．外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体的数量根据锥形瓶的大小确定，一般每瓶接种6～8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件。注意事项（三）接种

3．插入外植体时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分。4．接种时酒精灯的火焰不要调高，接种时应靠近酒精灯火焰操作，接种速度要快。每次打开锥形瓶时瓶口需旋转通过火焰。5．接种后应及时盖好瓶盖，做好标记，写明组织培养的材料名称、接种日期和接种人姓名或小组序号。注意事项（四）诱导脱分化与再分化1．脱分化

将接种了天竺葵叶组织块的锥形瓶置于培养箱或培养室中，在15～25℃等条件下培养。培养2周左右，逐渐脱分化长出瘤状的愈伤组织。当愈伤组织长到1.0～1.5cm时，进行试管苗的培养，转入生芽培养基中。（四）诱导脱分化与再分化2．再分化

愈伤组织在分化芽的培养基上培养4-6周，长出芽；转接到生根的培养基上，在温度约为25℃、光照强度为2000~3000lx的光照培养箱内继续培养，每天光照14~16h。大约培养1~2周可见幼根。生芽转移到生根培养基（四）诱导脱分化与再分化3．激素比例

分化芽的培养基和分化根的培养基是分别在MS培养基的基础上，根据需要添加生长素类和细胞分裂素类生长调节剂如NAA、6-BA配制而成的。

例如，马蹄纹天竺葵分化芽的培养基主要成分为MS、质量浓度为1.0mg/L的6-BA和质量浓度为0.5mg/L的NAA。（五）炼苗与移植

分阶段揭开锥形瓶的瓶盖，再培养几天后，用流水清洗试管苗，除去根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间后，再移到大田土中。五、结果与分析1．外植体在培养过程中可能会被污染的原因？

外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种过程无菌操作不规范，被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。拓展外植体被污染的类型（1）细菌污染：可能是由操作人员造成的，如未戴口罩、接种时说话、手未消毒或器械灭菌不彻底等。（2）真菌污染：可能是植物材料消毒不当引起的。

2．在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌燥作：

避免杂菌在上面迅速生长耗营养，且有些杂菌会危害培养物的生长。

3．在组织培养过程中，诱导愈伤组织的培养基、诱导生芽的培养基和诱导生根的培养基的成分有什么不同？

三种培养基成分的主要不同是生长素和细胞分裂素的比例。4．诱导愈伤组织期间一般不需要光，后续培养过程中，为什么每日要给予适当时间和强度的光照？

后续培养过程中，给予适当时间和强度的光照的目的是诱导叶绿素形成，进一步形成叶绿体进行光合作用。配制MS培养基分装与灭菌选择合适的外植体外植体的消毒和剪切接种外植体诱导脱分化诱导再分化炼苗与移植课堂小结天竺葵的组织培养：1．关于天竺葵组织培养的操作，下列说法不正确的是（

）A．培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌B．幼苗要先移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，再移栽到大田土壤中C．嫩叶消毒后要用自来水多次冲洗D．用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的长，一旦感染杂菌则前功尽弃C2．下列有关天竺葵组织培养的叙述，正确的是（

）A．整个培养过程应在密闭条件下进行，以免造成杂菌的污染B．为了充分利用培养条件，每个锥形瓶可接种16~18块外植体C．培养形成的愈伤组织可直接移栽到大田再分化形成植株D．外植体制备包括流水冲洗、酒精处理、消毒液处理等操作D3．某科研小组拟培育天竺葵，其技术路线为“选材→消毒→接种→诱导脱分化→诱导再分化→炼苗移植”相关叙述错误的是（

）A．选材部位应选择植物顶端分生区附近，因其分裂旺盛且病毒少B．消毒后的外植体需要用无菌水充分冲洗C．外植体接种—培养—移栽的过程中不需要更换培养基D．与生芽相比，生根时应调整培养基中植物激素的含量和比例C第二章细胞工程第一节植物细胞工程（第3课时）（1）20世纪60年代，大量制备原生质体技术建立。（2）1972年，科学家研究出第一个体细胞杂种植物——烟草。（3）1978年，科学家首次将番茄和马铃薯体细胞杂交，获得属间杂种细胞。烟草一、植物体细胞杂交技术1．概念

植物体细胞杂交技术主要是指将自发或人工融合的杂种细胞培育成新品种植物体的技术。

植物体细胞融合的障碍是什么？

植物细胞壁的成分是什么？

细胞壁。纤维素和果胶。中胶层主细胞壁质膜果胶交联多糖微纤维植物细胞壁结构2．原生质体的制备

阅读教材53页前三段的内容，思考：（1）酶具有专一性，如何根据细胞壁的成分，去除细胞壁呢？（2）什么是原生质体？（3）原生质体的来源有哪些？

用酶解法如纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，用低速离心等方法分离纯化得到的就是原生质体。

原生质体的来源：叶肉细胞、根尖细胞或组织培养产生的愈伤组织。学生活动2．原生质体的制备

（1）得到的原生质体都可以用于植物体细胞杂交吗？

原生质体经过活性鉴定后，才能用于体细胞杂交。

（2）原生质体具有全能性吗？

获得原生质体过程没有破坏遗传物质，因此具有全能性。

（3）原生质体对于生物学研究有哪些好的用途？

能在促融剂的作用下融合，在一定条件下还能摄入DNA片段、质粒、病毒、细菌、细胞器等外源物质或结构，是植物细胞工程进行遗传操作的良好材料。3．原生质体融合的诱导

通过酶解法得到的原生质体可以自发融合吗？如果不能，如何诱导原生质体融合？

可以自发融合，但是效率比较低，一般采用外力诱导融合。

在诱导原生质体融合的方法，需要满足什么条件？

效率高，对原生质体伤害小。

（1）化学融合法：聚乙二醇法（PEG）。

（2）物理融合法：电融合法。4．杂种细胞的筛选和培养

融合成功的标志是什么？这个过程与哪些细胞器有关？

融合成功的标志是形成新的细胞壁。此过程与高尔基体有关，同时还需要线粒体供能。

融合的细胞都是需要的细胞吗？是否需要筛选？

假设用于两种植物细胞分别为A、B，则诱导融合后的培养液中有三类细胞：4．杂种细胞的筛选和培养

（1）未融合的细胞（A和B）；

（2）两两融合的细胞（AA、BB和AB）；

（3）多细胞融合体。

两两融合的细胞中，只有AB型细胞是需要的细胞，所以需要筛选。

杂种细胞的染色体数如何变化？

经植物体细胞杂交形成的杂种细胞，染色体数、染色体组数都是两个细胞之和。5．杂种细胞的植物组织培养杂种细胞愈伤组织杂种植株脱分化再分化学以致用

若一植物细胞含有2m条染色体，2个染色体组，基因型为Aabb；另一植物细胞含有2n条染色体，2个染色体组，基因型为ccDd。则新植株应该为几倍体？体细胞中的染色体为多少条？染色体组是多少？基因型是什么？

四倍体；体细胞中染色体数为2m+2n；染色体组数为4；基因型为AabbccDd。A细胞B细胞A原生质体B原生质体融合的原生质体AB杂种细胞AB愈伤组织杂种植株去除细胞壁人工诱导筛选再生出细胞壁脱分化再分化酶解法纤维素酶果胶酶人工诱导方法电融合法PEG融合法植物细胞融合植物组织培养构建模型

根据植物体细胞杂交的过程、原理、去壁、融合等知识，通过箭头和文字的形式构建植物体细胞杂交的流程图。拓展1．植物体细胞杂交过程中杂种细胞的检测方法：对诱导产物中的细胞进行植物组织培养，然后根据得到的植物的性状进行判断。

（1）若只表现出一种植物的性状，说明是由未融合的细胞形成的。

（2）若得到的是具有两种亲本性状的植物，说明是杂种植株。

（3）若得到的是具有两种亲本性状的植物，且一种植物的性状表现得到加强，则可能是由多细胞融合的细胞形成的。拓展

（4）若得到的植株只表现出一种植物的性状且效果得到加强，则是由同种细胞融合的细胞形成的。2．植物体细胞杂交后代的育性

植物体细胞杂交后，其染色体是两个物种染色体的总和，形成的是异源多倍体，因为细胞内每条染色体仍然有其同源染色体，因此从理论上讲后代是可育的，但是育性会降低。小结1．植物体细胞杂交的原理：质膜的流动性和细胞的全能性。2．植物体细胞杂交的结果：产生新的植株。3．植物体细胞杂交的生殖方式：无性繁殖。二、植物体细胞杂交技术在植物育种上的意义

不同植物的花粉落在同一植物的柱头可以完成受精作用吗？

不可以。存在生殖隔离。1．植物体细胞杂交技术应用于植物育种，可以克服不同种植物之间杂交不亲和的障碍，打破生殖隔离，实现远缘物种之间的核质融合，再通过植物组织培养便可获得新品种植株。

实例，利用该技术已经培育出多种具有优良性状的新品种，如“白菜—甘蓝”。与普通白菜相比，“白菜—甘蓝”具有生长周期短、耐热性强、易贮藏等优点。2．通过植物体细胞杂交可以逾越种间、属间的杂交屏障，这是培育新品种的一条有效途径。

实例：已经获得的属间体细胞杂交的组合还有萝卜和甘蓝、烟草和番茄、马铃薯和番茄、水稻和稻稗等。（1）植物体细胞杂交技术是否存在一些问题？

杂种后代遗传性状不够稳定、再生植株寿命较短等问题还有待进一步去研究与突破。

（2）“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所想象的那样，地上长番茄、地下结马铃薯的原因可能是什么？

生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，所以“番茄—马铃薯”杂种植株的细胞虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，因此杂种植株不能地上长番茄、地下结马铃薯。三、月季花药的组织培养

我国在利用花药进行组织培养方面的研究发展迅速，并被广泛应用到农业、林业生产中。用花药进行组织培养，形成的幼苗中既有二倍体植株，又有单倍体植株，因此，需要对培养出的幼苗进行选择。1．提出问题

如何采用某种月季的花药来培育月季？2．实验器材和试剂

某种月季的花药；剪刀，接种环，镊子，盖玻片，载玻片，无菌培养皿，无菌滤纸，光学显微镜，超净工作台；体积分数为70%的酒精，质量分数为0.1%的氯化汞溶液，用于消毒的酒精棉，无菌水，醋酸洋红溶液，体积分数为40%的醋酸溶液，MS培养基，IAA，2，4-D，KT（激动素）等。3．作出假设

在月季的初花期（5月初），选择适合的花药，用MS培养基并添加适量的生长素等激素来培育花药。4．设计实验学生活动

以小组为单位，考虑选用哪些器材和采用何种方法进行实验。5．实验实施

（1）试剂配制

醋酸洋红溶液的配制：将100mL体积分数为45%的醋酸溶液放入烧瓶中，加热至沸腾后，慢慢加入1g洋红，继续加热，待洋红溶解后冷却过滤备用。5．实验实施

（1）试剂配制

培养基的配制：用MS培养基，并在100mL培养基中添加0.4mg2，4-D、0.2mgKT和4mgIAA，调节pH至5.8。