DB35-T 2132-2023 实验用秀丽隐杆线虫 饲育技术

35DB35/T2132—2023实验用秀丽隐杆线虫饲育技术ExperimentalCaenorhabditiselegans—Rearingtechnique2023-10-25发布2024-01-25实施福建省市场监督管理局发布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草1GB/T6682—2008分析实验室用水3.13.23.33.424.2管理人员4.3饲育人员5.1设施5.2设备及试剂耗材5.4环境34体中的比例为1‰～3‰。为获取足够的交配雄虫，宜将L4幼虫期线虫中的雌雄同体线虫置于30℃条件％～每只雌雄同体虫自交产250～300只后代，雄虫和雌雄同体虫杂交产950～158.2液体饲养8.3饲养的技术指标——生长温度在15℃~25℃之间，最常使用的培养温度是20℃;——相对湿度在40％～80%;6——固体饲养的线虫置于洁净的恒温培养箱中，液体饲养的线虫置于恒温摇床中，9.2微生物与寄生虫处理产生的生物废弃物和污水按照SN/T4835的规定进行无害化处理，其他实验室废弃物按照相关11.2标识11.3档案7A.1.1恒温培养箱A.1.2体视显微镜摇床材质无毒、无害、无放射性。配有温度控制系统，能够在10℃~60℃温度范围内调节箱内温A.1.5移液器A.1.6酒精灯A.1.7挑虫器A.1.8洁净工作台A.1.9-80℃冰箱A.1.10液氮罐A.2.1培养皿8无毒、无害、无放射性、耐腐蚀、无菌。常用规格有96A.2.4梯度降温盒A.2.5冻存管91g胰蛋白胨，0.5g酵母粉，1g氯化钠（NaCl），加入双蒸水定容至100mL，121°C、0.107MPa1g胰蛋白胨，0.5g酵母粉，1gNaCl，2g琼脂，加入双蒸水定容至100mL，用1M氢氧化钠（NaOH）2.5g酪蛋白胨，17g琼脂粉，3gNaCl，加入975mL的双蒸水，121°C、0.107MPa灭菌20min。冷却至55℃后，加入下列溶液（胆固醇溶液过滤除菌，其余溶液在121°C、0.107MPa灭菌20——25mL1M磷酸盐溶液（108.3g磷6g磷酸氢二钠（Na2HPO43gK2HPO4，5gNaCl，0.25g七水硫129mL0.05MK2HPO4，871m1.86g乙二胺四乙酸二钠（EDTA•Na2），0.69g七水硫酸亚铁（FeSO4•7H2O），0.2g四水氯化锰（MnCl2•4H2O0.29g七水硫酸锌（ZnSO4•7H2O0.分为4个阶段，分别为一龄、二龄、三龄及四龄幼虫（L1，L2、L3、L皮：L1发育至L2约需12h，L2发育至L3约需8h，L3发育至L4约需8h。当遇到群体密度很大且食物缺乏，成虫：L4最后一次蜕皮成为年轻的成虫约需10h，年轻的成虫最后发育成成熟的成虫约需8h。线虫是以OP50为食，OP50具有尿嘧啶缺陷，在NGM培养皿上不可无限生长。LB液较小的体型、生长缓慢、子代数明显减少、注：被感染的线虫在显微镜下会呈现出特定的表型，能以此来判断线虫是否被感染。微生物种属鉴定