DB15T 3717-2024枣组织培养育苗技术规程

15CodeofpracticeforseedlingcultivationbytissuecultureinziziphusjujubaI本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古蒙枣科技有1枣组织培养育苗技术规程5.1.1药品与母液保存5.1.2大量元素母液配制2将FeSO₄·7H₂O和Na₂EDTA分别溶于450mL蒸馏水中定容至1000mL,冷却后置于棕色瓶中，贴上标签。配制1L培养基，烧杯中先加蒸馏水700mL,再加入琼脂，加热搅拌。琼脂融化后，加入蔗糖，剂。搅拌后加蒸馏水定容至1L。用1mol/LNaOH或1moL/LHCl溶液来调节pH值至6.1,pH值测定使用pH计或pH试纸。压力为102.9kPa,温度为121℃,灭菌时间为15min~20min。培养基灭菌后冷却凝固后放入超净工作台备用。贮存时间不应超过7d。外植体为幼嫩叶片。选择无病虫害、生长健壮的枣树，4～6月取当年生未木质化枣头枝顶端萌发的嫩叶；12月至次年3月，采集一年生休眠枣头枝，实验室内水培，取萌发的嫩叶。用2%次氯酸钠(NaC10)浸泡15min,用蒸馏水清洗至少5次。在超净工作台上用75%(体积分数)酒精浸泡30s,无菌水冲洗3~4次，用灭菌滤纸吸干残留的水分，将叶片切成0.5cm²~1cm²小块用于3初代培养采用MS培养基，添加蔗糖25g/L、琼脂6.0g/L,调节pH至6.1。初代培养基组合为MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.5mg/L。将制备好的外植体接种于初代培养基上，每瓶接种3~5个，接种后将瓶口迅速在酒精灯火焰上灼烧2s,盖紧瓶盖。暗培养约14d形成白色愈伤组织后，转至光下培养7d。继代培养采用MS培养基，添加蔗糖25g/L、琼脂6.0g/L,调节pH至6.1。继代培养基组合为MS于继代培养基上，每瓶接种3~5个，接种后将瓶口迅速在酒精灯火焰上灼烧2s,盖紧瓶盖。25d~30d继代1次。分化培养采用MS培养基，添加蔗糖25g/L、琼脂6.0g/L,调节pH至6.1。分化培养基组合为MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L+TDZ0.01mg/L。将继代培养获得的愈伤组织切割成0.3cm³~0.5cm³的小块，接种于分化培养基上，接种后将瓶口迅速在酒精灯火焰上灼烧2s,盖紧瓶盖。愈伤组织分化的不定芽高度达到2.0cm~3.0cm,具2～3片小叶时，可用于生根培养。生根培养采用1/2MS培养基，添加蔗糖15g/L、琼脂6.0g/L,调节pH至6.1。生根培养基组合为1/2MS+IBA0.5mg/L+TDZ0.6mg/L。剪取长势健壮，叶片平展无卷曲，高度2.0cm~3.0cm定芽，接种在生根培养基上，接种深度为0.3cm~0.5cm,每瓶接种3~5株。接种后将瓶口迅速在酒精灯火焰上灼烧2s,盖紧瓶盖。培养25d左右，不定芽正常生根，叶色深绿、根系粗壮。用12%百菌清烟雾剂熏蒸炼苗室3~4次。选择具3~5片正常绿叶、苗高4.0cm~5.0cm、根数3条以上，根长>1.0cm的组培苗，连同组培瓶一起置于温室内，控制温度25℃~28℃,湿度80%以上，光照强度1500Lx~2000Lx。半开瓶盖1d,然后揭去瓶盖3d,组培苗无污染、正常生长，可用于移栽。基质为草炭：蛭石：珍珠岩=3:2:1,用多菌灵800倍液浸湿基质，塑料布覆盖灭菌24h。穴盘取出炼好的组培苗，用手托住组培苗根部，20℃左右温水冲去残留培养基，水流宜小，以免损伤根系与茎叶，植入穴盘基质，饱和喷淋1次。每天雾化喷水，保持环境相对湿度70%～80%,温度20℃~25℃。7d后，湿度降至60%。每隔7d喷施800倍液多菌灵，或400～700倍代森锰锌，或甲基托布49.3.1水管理9.3.2肥管理