高三二轮复习生物：生物技术与工程课件

专题八：生物技术与工程考点1、传统发酵技术考点2、微生物的培养与应用考点3、植物细胞工程考点4、单克隆抗体（动物细胞工程）考点5、胚胎工程（动物细胞工程）考点6、基因工程2024届生物二轮复习考点1、传统发酵技术典例1（23全国乙卷）某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。回答下列问题：考点1、传统发酵技术（1）在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是_______。（1）菌T可以产生纤维素酶，纤维素酶可将纤维素分解。考点1、传统发酵技术（2）采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是_______（答出1点即可）。通常，可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项有_______（答出2点即可）。①用于合成蛋白质、核酸等含氮物质；②必须将锅内原有的冷空气充分排出；灭菌时要在一定的温度和压力下维持一定时间；灭菌完毕后，不可立即打开排气阀，待压力表的压力降到零时，才能打开；考点1、传统发酵技术（3）将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是_______。但是在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶盖，原因是_______。发酵液中的乙醇可用_______溶液检测。①创造无氧条件，利于酵母菌无氧呼吸产生乙醇；②酵母菌无氧呼吸（或酒精发酵）过程中，产生的CO2会导致发酵瓶内压强升高，拧松瓶盖及时排出CO2可防止发酵瓶破裂等危险。③酸性重铬酸钾；考点1、传统发酵技术（4）本实验收集的淋洗液中的_______可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是

。葡萄糖实现废物利用，提高了能量利用率；节约粮食考点1、传统发酵技术典例2（21全国乙卷）工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢将某些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下。回答下列问题：（1）米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的___________可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供___________。蛋白质碳源考点1、传统发酵技术（2）米曲霉发酵过程主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的

、

能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和__________。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，由此可以判断米曲霉属于___________（填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”）微生物。脂肪酶蛋白酶氨基酸异养好氧考点1、传统发酵技术（3）在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于___________（填“真核生物”或“原核生物”）；添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是__________________。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是__________________（答出1点即可）。酒精和二氧化碳原核生物酒精、乳酸、食盐考点1、传统发酵技术典例3（23·山东）以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是（）A.①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死B.②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌C.③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入D.④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低C考点1、传统发酵技术典例4（23·山东）果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有（）（不定项）A.都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理 B.都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖C.发酵前都需要对原料进行灭菌 D.发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期AB考点1、传统发酵技术典例5（22·山东）青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是（）A.发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖B可用深层通气液体发酵技术提高产量C.选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中D.青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌D考点1、传统发酵技术典例6（2022·湖北）废水、废料经加工可变废为宝。某工厂利用果糖生产废水和沼气池废料生产蛋白质的技术路线如图所示。下列叙述正确的是（）A.该生产过程中，一定有气体生成B.微生物生长所需碳源主要来源于沼气池废料C.该生产工艺利用微生物厌氧发酵技术生产蛋白质D.沼气池废料和果糖生产废水在加入反应器之前需要灭菌处理A考点2、微生物的培养与应用典例1（2022·全国甲）某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。实验所用的培养基成分如下。培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。操作步骤：①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。回答下列问题。考点2、微生物的培养与应用培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。操作步骤：①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。回答下列问题。(1)实验所用培养基中作为碳源的成分是______。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成

（答出2种即可）等生物大分子。(2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是____________。石油DNA、RNA,蛋白质N0·2n考点2、微生物的培养与应用(3)为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“-”表示无透明圈），推测该同学的实验思路是

。在无萄条件下,将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处(2分,等量等浓度1分,甲、乙两处1分),平板Ⅱ也进行同样的操作(1分),在相同且适宜条件下培养一段时间,比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录,根据透明圈大降解能力强,透明圈小降解能力弱,进而比较A,B降解石油的能力考点2、微生物的培养与应用(4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是____________，理由是

。AA菌株降解石油的能力高于B菌株,并且在没有添加氮源的养基中也能生长考点2、微生物的培养与应用典例2（2022·全国乙）（2022·全国·高考真题）化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业、用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。回答下列问题。(1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有（答出2点即可）高压蒸汽灭菌、干热灭菌考点2、微生物的培养与应用(2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是______；用菌株C生产S的最适碳源是

。菌株C的生长除需要碳源外，还需要

（答出2点即可）等营养物质。(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是

。氮源、无机盐、水葡萄糖制糖废液缺少淀粉酶考点2、微生物的培养与应用(4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：

。(5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，其意义是

（答出1点即可）。分别配制―系列浓度梯度的以制糖废液为唯一碳源的培养基,培养菌株C(1分),其他条件相同且适宜,一段时间后,测定并比较不同浓度制糖废液中S的产量(1分)，S产量最高时对应的制糖废液浓度即为生产S的最适碳源浓度。减少污染,节省原料、降低生产成本考点2、微生物的培养与应用典例3（2023·北京高考）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。（1）用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供

和维生素等。（2）A菌通常被用作溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明

。A菌能在培养平板中生长繁殖氮源、碳源考点2、微生物的培养与应用（3）为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样

后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现

。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。（4）为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱）

。稀释假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂溶菌圈考点2、微生物的培养与应用典例4（2023·海南模拟）回答有关微生物培养的问题：（1）厨房中的厨余垃圾多为湿垃圾，湿垃圾处理的有效方法之一是用微生物对其进行降解。如图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。配制培养基后需进行灭菌处理，常用的灭菌方法是

。培养基中加入的碳源是

。据图，菌落①与菌落②周围产生了透明圈，产生透明圈的原因是

。淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法）淀粉考点2、微生物的培养与应用（2）某公司研发的一种培养大肠杆菌的培养基配方为蛋白胨10克、葡萄糖5克、蔗糖5克、KH2PO42克、显色剂（伊红—亚甲蓝）0.2克、琼脂12克，将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。根据用途划分，该培养基属于

培养基，若要分离能分解尿素的细菌，需对培养基作出的两项调整是

。（3）对同一浓度的脲酶生产菌稀释液，分别用血细胞计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验错误操作，则前者的数量多于后者，其原因是

。前者产脲酶菌是分散的或活菌和死菌一起计数，后者存在两个或多个产脲酶菌形成一个菌落的情况或只计数活菌将蛋白胨换为尿素，伊红—亚甲蓝换成酚红鉴别考点2、微生物的培养与应用典例5（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（）A．不含氮源的平板不能用于微生物培养B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物D考点2、微生物的培养与应用典例6（（2022·湖北高考）灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（）A.动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行B.微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染C.为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌D.可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌D考点2、微生物的培养与应用典例7（2023·广东高考）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（）A.a点时取样、尿素氮源培养基B.b点时取样、角蛋白氮源培养基C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基D.c点时取样、角蛋白氮源培养基D考点3、植物细胞工程典例1（2023·新课标卷）根瘤菌与豆科植物之间是互利共生关系，根瘤菌侵入豆科植物根内可引起根瘤的形成，根瘤中的根瘤菌具有固氮能力。为了寻找抗逆性强的根瘤菌，某研究小组做了如下实验：从盐碱地生长的野生草本豆科植物中分离根瘤菌；选取该植物的茎尖为材料，通过组织培养获得试管苗（生根试管苗）；在实验室中探究试管苗根瘤中所含根瘤菌的固氮能力。回答下列问题。（1）从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌进行培养，可以获得纯培养物，此实验中的纯培养物是

。由一个根瘤菌繁殖形成的单菌落考点3、植物细胞工程（2）取豆科植物的茎尖作为外植体，通过植物组织培养可以获得豆科植物的试管苗。外植体经诱导形成试管苗的流程是：其中①表示的过程是__________，②表示的过程是__________。由外植体最终获得完整的植株，这一过程说明植物细胞具有全能性。细胞的全能性是指

。细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性脱分化再分化考点3、植物细胞工程（3）研究小组用上述获得的纯培养物和试管苗为材料，研究接种到试管苗上的根瘤菌是否具有固氮能力，其做法是将生长在培养液中的试管苗分成甲、乙两组，甲组中滴加根瘤菌菌液，让试管苗长出根瘤。然后将甲、乙两组的试管苗分别转入_______的培养液中培养，观察两组试管苗的生长状况，若甲组的生长状况好于乙组，则说明

。（4）若实验获得一种具有良好固氮能力的根瘤菌，可通过发酵工程获得大量根瘤菌，用于生产根瘤菌肥。根瘤菌肥是一种微生物肥料，在农业生产中使用微生物肥料的作用是

（答出2点即可）。无氮源分离得到的根瘤菌具有固氮能力增进土壤肥力；减少化肥使用，改良土壤，减少污染，保护生态环境。考点3、植物细胞工程典例2（2023·海南）基因递送是植物遗传改良的重要技术之一，我国多个实验室合作开发了一种新型基因递送系统（切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，简称CDB法）。图1与图2分别是利用常规转化法和CDB法在某植物中递送基因的示意图。诱导叶绿素的形成；满足叶绿体利用光能制造有机物的需要回答下列问题。（1）图1中，从外植体转变成愈伤组织的过程属于

；从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素有生长素和

，该过程还需要光照，其作用是

。

脱分化细胞分裂素（2）图1中的愈伤组织，若不经过共培养环节，直接诱导培养得到的植株可以保持植株A的

。图1中，含有外源基因的转化植株A若用于生产种子，其包装需标注

。（3）图1与图2中，农杆菌侵染植物细胞时，可将外源基因递送到植物细胞中的原因是

。

考点3、植物细胞工程遗传特性转基因标识Ti质粒中的T-DNA能将外源基因递送到植物细胞中，并与植物细胞的染色体DNA整合到一起（4）已知某酶（PDS）缺失会导致植株白化。某团队构建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体（含有绿色荧光蛋白标记基因），利用图2中的CDB法将该重组载体导入植株B，长出毛状根，成功获得转化植株B．据此分析，从毛状根中获得阳性毛状根段的方法是

，图2中，鉴定导入幼苗中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是

，依据是

。

考点3、植物细胞工程PDS缺失会导致植株白化，白化苗的出现意味着通过基因编辑技术成功实现PDS基因的敲除荧光检测选择带有绿色荧光标记的毛状根观察幼苗是否表现出白化特征（5）与常规转化法相比，采用CDB法进行基因递送的优点是

（答出2点即可）。

考点3、植物细胞工程操作方法简单，不需要借助植物组织培养技术进行操作，且培养周期较短考点3、植物细胞工程典例3（2023·山东高考）利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是（）A.利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物B.植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产C.次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养D.该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量A考点3、植物细胞工程典例4（2022·重庆高考）植物体细胞通常被诱导为愈伤组织后才能表现全能性。研究发现，愈伤组织的中层细胞是根或芽再生的源头干细胞，其在不同条件下，通过基因的特异性表达调控生长素、细胞分裂素的作用，表现出不同的效应（见如表）。已知生长素的生理作用大于细胞分裂素时有利于根的再生；反之，有利于芽的再生。下列推论不合理的是（）A.WOX5失活后，中层细胞会丧失干细胞特性B.WOX5＋PLT可能有利于愈伤组织中生长素的积累C.ARR5促进细胞分裂素积累或提高细胞对细胞分裂素的敏感性D.体细胞中生长素和细胞分裂素的作用可能相互抑制C考点3、植物细胞工程典例5（2023江苏高考•13）研究者通过体细胞杂交技术，探索利用条斑紫菜和拟线紫菜培育杂种紫菜。下列相关叙述正确的是（）A.从食用紫菜的动物消化道内提取蛋白酶，用于去除细胞壁B.原生质体需在低渗溶液中长期保存，以防止过度失水而死亡C.检测原生质体活力时可用苯酚品红或甲紫溶液处理，活的原生质体被染色D.聚乙二醇促进原生质体融合后，以叶绿体颜色等差异为标志可识别杂种细胞D考点3、植物细胞工程典例6（2023广东高考）人参皂苷是人参的主要活性成分。科研人员分别诱导人参根与胡萝卜根产生愈伤组织并进行细胞融合，以提高人参皂苷的产率。下列叙述错误的是（）A.细胞融合前应去除细胞壁B.高Ca2+—高pH溶液可促进细胞融合C.融合的细胞即为杂交细胞D.杂交细胞可能具有生长快速的优势C典例1（2023·湖北）某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。回答下列问题：（1）与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞（含浆细胞）_______（填“需要”或“不需要”）通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是______。考点4、单克隆抗体使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。不需要（2）在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对_

__和__

___生长具有抑制作用。（3）单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是_______________。考点4、单克隆抗体通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞。未融合的亲本细胞融合的具有同种核的细胞考点4、单克隆抗体（4）构建重组质粒需要使用DNA连接酶。下列属于DNA连接酶底物的是_________。④考点4、单克隆抗体典例2（2023·北京高考）甲状旁腺激素（PTH）水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，有关制备过程的叙述不正确的是（）A.需要使用动物细胞培养技术B.需要制备用PTH免疫的小鼠C.利用抗原—抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞D.筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞D考点4、单克隆抗体典例3（2023·江苏盐城模拟）将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体。下列有关此项技术的说法中错误的是（）A.动物细胞融合和动物细胞培养技术是单克隆抗体技术的基础B.实验中培养杂交瘤细胞的培养基中需添加血清等一些天然成分C.将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞置于培养液中，加入仙台病毒诱导融合成杂交瘤细胞D.按照培养基的用途分类，实验中筛选杂交瘤细胞的培养基是选择培养基C考点5、胚胎工程典例1（2022全国甲）某牧场引进一只产肉性能优异的良种公羊，为了在短时间内获得具有该公羊优良性状的大量后代，该牧场利用胚胎工程技术进行了相关操作。回答下列问题，（1）为了实现体外受精需要采集良种公羊的精液，精液保存的方法是____________。在体外受精前要对精子进行获能处理，其原因是

；精子体外获能可采用化学诱导法，诱导精子获能的药物是

（答出1点即可）。利用该公羊的精子进行体外受精需要发育到一定时期的卵母细胞，因为卵母细胞达到

时才具备与精子受精的能力。减数分裂Ⅱ（或MⅡ）中期冷冻保存刚排出的精子必须在雌性生殖道内发生相应生理变化后才能受精肝素或钙离子载体考点5、胚胎工程（2）体外受精获得的受精卵发育成囊胚需要在特定的培养液中进行，该培养液的成分除无机盐、激素、血清外，还含的营养成分有

（答出3点即可）等。将培养好的良种囊胚保存备用。（3）请以保存的囊胚和相应数量的非繁殖期受体母羊为材料进行操作，以获得具有该公羊优良性状的后代。主要的操作步骤是

。维生素、氨基酸、核苷酸对受体母羊进行同期发情处理，将保存的囊胚进行胚胎移植，对受体母羊进行是否妊娠的检查，一段时间后受体母羊产下具有该公羊优良性状的后代考点5、胚胎工程典例2（2023·广东高考）科学家采用体外受精技术获得紫羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的种群数量。此过程不涉及的操作是（）A.超数排卵B.精子获能处理C.细胞核移植 D.胚胎培养C考点5、胚胎工程典例3（2023·天津高考）根据下图，正确的是（）

A.子代动物遗传性状和受体动物完全一致B.过程1需要MII期去核卵母细胞C.过程2可以大幅改良动物性状D.过程2为过程3提供了量产方式，过程3为过程1、2提供了改良性状的方式D考点5、胚胎工程典例4（2023·海南高考）某团队通过多代细胞培养，将小鼠胚胎干细胞的Y染色体去除，获得XO胚胎干细胞，再经过一系列处理，使之转变为有功能的卵母细胞。下列有关叙述错误的是（）A.营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制B.获得XO胚胎干细胞的过程发生了染色体数目变异C.XO胚胎干细胞转变为有功能的卵母细胞的过程发生了细胞分化D.若某濒危哺乳动物仅存雄性个体，可用该法获得有功能的卵母细胞用于繁育D考点6、基因工程典例1（（2023·全国甲）接种疫苗是预防传染病的一项重要措施，乙肝疫苗的使用可有效阻止乙肝病毒的传播，降低乙型肝炎发病率。乙肝病毒是一种DNA病毒。重组乙肝疫苗的主要成分是利用基因工程技术获得的乙肝病毒表面抗原（一种病毒蛋白）。回答下列问题。(1)接种上述重组乙肝疫苗不会在人体中产生乙肝病毒，原因是

。(2)制备重组乙肝疫苗时，需要利用重组表达载体将乙肝病毒表面抗原基因（目的基因）导入酵母细胞中表达。重组表达载体中通常含有抗生素抗性基因，抗生素抗性基因的作用是

。能识别载体中的启动子并驱动目的基因转录的酶是

。RNA聚合酶重组乙肝疫苗成分为蛋白质，不含乙肝病毒DNA，无法独立在宿主体内增殖利于筛选出含有重组DNA(或重组表达载体)的受体细胞考点6、基因工程(3)目的基因导入酵母细胞后，若要检测目的基因是否插入染色体中，需要从酵母细胞中提取

进行DNA分子杂交，DNA分子杂交时应使用的探针是

。（4）若要通过实验检测目的基因在酵母细胞中是否表达出目的蛋白，请简要写出实验思路

。从酵母细胞中提取蛋白质，再用相应抗体进行抗原-抗体杂交，检测是否出现杂交带。染色体DNA（或基因组DNA）一段被标记的、且与目的基因特异性互补的单链DNA片段考点6、基因工程典例2（2023·全国乙）GFP是水母体内存在的能发绿色荧光的一种蛋白。科研人员以GFP基因为材料，利用基因工程技术获得了能发其他颜色荧光的蛋白，丰富了荧光蛋白的颜色种类。回答下列问题。(1)构建突变基因文库，科研人员将GFP基因的不同突变基因分别插入载体，并转入大肠杆菌制备出GFP基因的突变基因文库。通常，基因文库是指

。将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因考点6、基因工程（2）构建目的基因表达载体。科研人员从构建的GFP突变基因文库中提取目的基因（均为突变基因）构建表达载体，其模式图如下所示（箭头为GFP突变基因的转录方向）。图中①为

；②为

，其作用是

；图中氨苄青霉素抗性基因是一种标记基因，其作用是

。利于筛选出含有重组DNA(或重组表达载体)的受体细胞终止子启动子RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动目的基因转录考点6、基因工程（3）目的基因的表达。科研人员将构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达，发现大肠杆菌有的发绿色荧光，有的发黄色荧光，有的不发荧光。请从密码子特点的角度分析，发绿色荧光的可能原因是

。（4）新蛋白与突变基因的关联性分析。将上述发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后，对其所含的GFP突变基因进行测序，发现其碱基序列与GFP基因的不同，将该GFP突变基因命名为YFP基因（黄色荧光蛋白基因）。若要通过基因工程的方法探究YFP基因能否在真核细胞中表达，实验思路是

。

由于密码子具有简并性，GFP基因突变前后所编码的氨基酸序列未改变将YFP基因插入表达达载体中，再将构建好的表达载体导入不能发黄色荧光的酵母菌中，观察酵母菌是否出现黄色荧光。考点6、基因工程典例3（2023·山东·高考真题）科研人员构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5。(1)与图甲中启动子结合的酶是

。除图甲中标出的结构外，作为载体，质粒还需具备的结构有

（答出2个结构即可）。RNA聚合酶限制酶切割位点、标记基因（或抗生素抗性基因/氨苄青霉素抗性基因）、复制原点（或复制起始位点）等考点6、基因工程（2）构建重组质粒后，为了确定J基因连接到质粒中且插入方向正确，需进行PCR检测，若仅用一对引物，应选择图甲中的引物

。已知J基因转录的模板链位于b链，由此可知引物F1与图甲中J基因的

（填“a链”或“b链”）相应部分的序列相同。a链F2和R1或F1与R2考点6、基因工程（3）重组质粒在受体细胞内正确表达后，用抗J蛋白抗体和抗V5抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表达水平，结果如图乙所示。其中，出现条带1证明细胞内表达了

，条带2所检出的蛋白（填“是”或“不是”）由重组质粒上的J基因表达的。J-V5融合蛋白（或融合蛋白/质粒上的J-V5融合蛋白/重组质粒上的J-V5融合蛋白）不是考点6、基因工程典例4（2023·广东）种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟南芥（2n=10）进行诱变筛选到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序，发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，据此推测突变体的表型与其有关，开展相关实验。回答下列问题：(1)拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株，若突变体表型确由该突变造成，则转基因植株的种子大小应与

植株的种子大小相近。(2)用PCR反应扩增DAI基因，用限制性核酸内切酶对PCR产物和

进行切割，用DNA连接酶将两者连接。为确保插入的DAI基因可以正常表达，其上下游序列需具备

。载体或Ti质粒或基因表达载体野生型启动子和终止子考点6、基因工程(3)转化后，T-DNA（其内部基因在减数分裂时不发生交换）可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下，选出单一位点插入的植株，并进一步获得目的基因稳定遗传的植株（如图），用于后续验证突变基因与表型的关系。①农杆菌转化T0代植株并自交，将T1代种子播种在选择培养基上，能够萌发并生长的阳性个体即表示其基因组中插入了

。

DAI基因和卡那霉素抗性基因考点6、基因工程②T1代阳性植株自交所得的T2代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择阳性率约

%的培养基中幼苗继续培养。

75考点6、基因工程③将②中选出的T2代阳性植株

（填“自交”、“与野生型杂交”或“与突变体杂交”）所得的T3代种子按单株收种并播种于选择培养基，阳性率达到

%的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。为便于在后续研究中检测该突变，研究者利用PCR扩增野生型和突变型基因片段，再使用限制性核酸内切酶X切割产物，通过核酸电泳即可进行突变检测，相关信息见下，在电泳图中将酶切结果对应位置的条带涂黑。自交100(1)分别进行PCR扩增片段F1与片段F2时，配制的两个反应体系中不同的有

，扩增程序中最主要的不同是

。考点6、基因工程典例5（2023·江苏）为了将某纳米抗体和绿色荧光蛋白基因融合表达，运用重组酶技术构建质粒，如图1所示。请回答下列问题：引物模板（片段F1、