3.2 基因工程的基本操作程序（第一课时） 课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

第3章

基因工程第2节

基因工程的基本操作程序

重组DNA分子

从社会中来转基因抗虫棉培育转基因抗虫棉的简要过程苏云金杆菌普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入与载体拼接1.目的基因的筛选与获取（前提）2.基因表达载体的构建（核心）3.将目的基因导入受体细胞（关键）4.目的基因的检测与鉴定（保证）Bt基因导入新课自主学习深度学习迁移应用

目的基因的筛选与获取一目录

基因表达载体的构建二

目的基因的检测与鉴定四

将目的基因导入受体细胞三深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一1.举例说明什么是目的基因；3.获取目的基因的方法有哪些？阅读教材P76-77，回答下列问题：2.怎样筛选合适的目的基因？一

目的基因的筛选与获取一1.目的基因在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。。（1）概念：（2）实例：主要是编码特定蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子。与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。深度学习自主学习导入新课迁移应用转基因番木瓜，它可以抵御番木瓜环斑病毒转基因抗除草剂植物一

目的基因的筛选与获取一1.目的基因在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。。（1）概念：（2）实例：主要是编码特定蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子。与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。深度学习自主学习导入新课迁移应用转基因芥属能多吸收土壤中5.3倍的有毒金属硒，而自身却不会死亡。重组人胰岛素注射液一

目的基因的筛选与获取一1.目的基因在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。。（1）概念：（2）实例：主要是编码特定蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子。与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因那么，如何筛选目的基因呢？深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一

2.筛选合适的目的基因深度学习自主学习导入新课迁移应用（2）实例：用苏云金杆菌制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害（P27）对Bt基因的表达产物Bt抗虫蛋白有了较为深入的了解苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因功能清晰已知结构（3）认识基因结构和功能的技术方法测序技术→序列数据库（如GenBank）→序列对比工具（如BLAST）（1）方法：Bt抗虫蛋白基因（Bt基因）的筛选过程从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。问题：筛选出来的目的基因，该怎么获得它呢？前提：方法：基因比较小、核苷酸序列已知通过DNA合成仪用化学方法直接合成DNA合成仪

蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成（1）人工合成目的基因（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用

将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。（了解）基因文库基因组文库cDNA文库（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用

将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。（了解）①基因组文库

将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，将DNA切成一定范围大小的DNA片段，然后，将这些DNA片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，每个受体菌都含有了一段不同的DNA片段。也就是说，这个群体包含了这种生物的所有基因，叫做这种生物的基因组文库。（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用①基因组文库某种生物体内的全部DNA适当的不同限制酶切割与质粒连接（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用①基因组文库某种生物体内的全部DNA适当的不同限制酶切割与质粒连接导入受体菌受体菌

每个受体菌都含有了一段不同的DNA片段。这个群体包含了这种生物的所有基因，叫做这种生物的基因组文库。（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用②cDNA文库如果用某种生物发育的某个时期的mRNA

反转录产生的多种互补DNA(也叫cDNA)片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，那么，这个受体菌群体就叫做这种生物的cDNA文库。某种生物体内的全部DNA某个时期基因选择性表达转录转录转录转录mRNA翻译翻译翻译翻译蛋白质CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---某原核细胞基因非编码区非编码区编码区不编码mRNA不编码mRNA(编码mRNA)启动子终止子启动子：启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列终止子：给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列RNA聚合酶（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子启动子：启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列终止子：给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG转录mRNA某原核细胞基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG转录mRNA翻译蛋白质某原核细胞基因如果该基因为真核细胞基因有什么不同？一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---某真核细胞基因非编码区非编码区编码区不编码mRNA不编码mRNA(编码mRNA)启动子终止子RNA聚合酶外显子内含子外显子内含子外显子外显子：编码蛋白质的序列称为外显子。内含子：外显子之间不能编码蛋白质的序列称为内含子。一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG转录初始mRNA某真核细胞基因外显子内含子外显子内含子外显子外显子：编码蛋白质的序列称为外显子内含子：外显子之间不能编码蛋白质的序列称为内含子

外显子和内含子均会被转录成RNA，再经过切去内含子对应部位、连接外显子对应部位等RNA加工过程，形成可以直接用于翻译的mRNA。一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG转录某真核细胞基因外显子内含子外显子内含子外显子RNA加工CA……UAGGAUCCAGAUG翻译蛋白质外显子和内含子均会被转录成RNA，再经过切去内含子对应部位、连接外显子对应部位等RNA加工过程，形成可以直接用于翻译的mRNA初始mRNA成熟mRNA一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用②

cDNA文库如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA(也叫cDNA)片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，那么，这个受体菌群体就叫做这种生物的cDNA文库。一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用（2）通过构建基因文库来获取目的基因--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG转录mRNA翻译蛋白质某原核细胞基因CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUGmRNA翻译蛋白质反转录GT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTACCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……GT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……cDNA复制双链DNA受体菌无启动子、终止子等非编码区--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子转录某原核细胞基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用②

cDNA文库--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG转录某真核细胞基因外显子内含子外显子内含子外显子RNA加工CA……UAGGAUCCAGAUG翻译蛋白质初始mRNA成熟mRNA--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非编码区非编码区编码区(编码mRNA)启动子终止子CA

……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG转录某真核细胞基因外显子内含子外显子内含子外显子RNA加工CA……UAGGAUCCAGAUG翻译蛋白质初始mRNA成熟mRNA反转录GT……ATCCTAGGTCTACGT……ATCCTAGGTCTACCA……TAGGATCCAGATG复制受体菌无启动子、终止子等非编码区及无内含子文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子（具有启动作用的DNA片段）基因中内含子（位于编码蛋白质序列内的非编码DNA片段）基因多少小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用（2）通过构建基因文库来获取目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用（2）通过构建基因文库来获取目的基因

将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。（了解）基因组文库cDNA文库一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用（2）通过构建基因文库来获取目的基因基因组文库cDNA文库怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢？一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用（2）通过构建基因文库来获取目的基因基因组文库cDNA文库怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢？这还是一件比较复杂的事情，简单地说就是根据目的基因的有关信息，例如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA以及基因翻译产物蛋白质等特性来获取目的基因。从DNA文库中获取并扩增目的基因通常采用PCR。前提：方法：基因比较小、核苷酸序列已知通过DNA合成仪用化学方法直接合成DNA合成仪

蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成（1）人工合成目的基因（2）通过构建基因文库来获取目的基因（3）用PCR特异性地快速扩增目的基因一

目的基因的筛选与获取一3.获取目的基因的方法深度学习自主学习导入新课迁移应用基因组文库cDNA文库1.(2023·山西太原高二诊断)下列有关获取目的基因的叙述，错误的是（

）

A.目的基因就是编码蛋白质的基因B.获取目的基因是基因工程的第一步C.来自苏云金杆菌的Bt抗虫蛋白基因可作为转基因抗虫棉的目的基因D.序列比对工具的应用为科学家找到合适的目的基因提供了更多的机会A目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。课堂练习迁移应用自主学习深度学习导入新课深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一1.PCR的概念和原理；3.PCR的过程和结果。阅读教材P77-79，回答下列问题：2.PCR需要哪些条件？解旋合成子链复旋深度学习自主学习导入新课迁移应用PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。DNA的半保留复制穆里斯（1）概念：（2）原理：一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（3）基本条件：复习：

DNA在细胞内复制所需要的条件条件名称模板DNA的两条母链原料4种脱氧核苷酸能量ATP酶解旋酶DNA聚合酶PCR所需要的条件条件名称模板DNA的两条母链原料4种脱氧核苷酸能量加热、ATP酶DNA聚合酶推测深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（3）基本条件：耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）四种脱氧核苷三磷酸（dNTP））DNA模板引物稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（3）基本条件：dNTP的作用：既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。4种脱氧核苷酸(实质是4种脱氧核苷三磷酸dNTP)①原料：dATPdGTPdCTPdTTP深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（3）基本条件：②引物一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。长度通常为20~30个核苷酸。若引物长度过短，则：引物与模板链结合的特异性较差。DNA聚合酶不具有从头合成子链的功能，引物为DNA聚合酶提供了游离的3′端，

使DNA聚合酶从3′端延伸子链。3’5’DNA母链13’5’DNA母链23’5’引物13’5’引物2由于DNA两条链是反向平行的，序列不同，所以需要2种引物。深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（3）基本条件：一定量的模板DNA引物4种脱氧核苷酸（或dNTP）耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）缓冲液Mg2+作为DNA复制的模板使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸作为合成DNA子链的原料（并为DNA合成提供能量）提供相对稳定的pH环境催化合成DNA子链真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（4）扩增过程：①变性②复性③延伸冷却加热深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（4）扩增过程：第1步：变性当温度>90℃时，双链DNA解旋为单链。（断氢键）5’3’3’5’5’3’3’5’①变性②复性③延伸冷却加热深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（4）扩增过程：①变性②复性③延伸冷却加热当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。5’3’3’5’第2步：复性5’3’3’5’深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（4）扩增过程：①变性②复性③延伸冷却加热当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则，加到引物的3’端，合成新的DNA链。DNA新链延伸的方向：

5’端→3’端

5’3’3’5’5’3’3’5’3’5’5’3’第3步：延伸深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（5）结果：成指数形式扩增（约为2n，其中n为扩增循环的次数）（6）PCR扩增产物的鉴定：琼脂糖凝胶电泳100bp200bp300bp400bp500bp600bp700bp800bp1,200bp1,000bp900bp标准样品1样品2样品3

较小的DNA片段在凝胶中移动相对容易，较大的DNA片段移动难。当电泳结束时，比较DNA样品所在的位置和一系列已知大小的DNA片段的位置（标准），这些已知大小的片段称为DNA分子量标准样。原因：一个循环得到的产物可以作为下一个循环的模板，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一倍。深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因①用PCR可以扩增mRNA吗？②PCR扩增的是完整的模板DNA分子吗？并说明理由。③利用PCR技术扩增目的基因，在第几次循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段（即出现完整的目的基因）？此时，这种DNA占多少比例？④如果已知某目的基因的序列和结构，利用PCR筛选和扩增出该目的基因的关键是什么？⑤引物设计的原则有哪些？⑥要保证目的基因能与载体相连接，还要对引物进行什么操作？（7）进一步探究：分析PCR扩增技术深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因①用PCR可以扩增mRNA吗？mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录为cDNA再进行扩增。由mRNA逆转录形成cDNA的过程是：第一步，逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子；第二步，核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA；第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。单链RNARNA-DNA杂交双链单链DNA双链DNA逆转录酶核酸酶HDNA聚合酶（7）进一步探究：分析PCR扩增技术深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因②PCR扩增的是完整的模板DNA分子吗？并说明理由。不是完整的模板DNA分子；PCR扩增的仅仅是两种引物之间所对应的特定DNA片段。（7）进一步探究：分析PCR扩增技术深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因③利用PCR技术扩增目的基因，在第几次循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段（即出现完整的目的基因）？此时，这种DNA占多少比例？5’3’5’5’第一次循环第二次循环3’5’第三次循环3’3’目的基因目的基因第3轮；1/4（7）进一步探究：分析PCR扩增技术PCR相关计算长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个211引物A引物B扩增一次深度学习自主学习导入新课迁移应用中长链-短链DNA____个2长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个233扩增两次PCR相关计算深度学习自主学习导入新课迁移应用中长链-短链DNA____个4长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个277短链-短链DNA______个2出现完整的目的基因

扩增三次PCR相关计算中长链-短链DNA____个长链-中长链DNA____个含有引物A的DNA____个含有引物B的DNA____个短链-短链DNA______个扩增四次2815156PCR相关计算扩增次数1次2次3次4次n次DNA总数212223242n长链-中长链DNA中长链-短链DNA短链-短链DNA含引物A(或B)的DNA20022240226822n-22n-2n137152n-1PCR相关计算深度学习自主学习导入新课迁移应用长链条数：始终是最初DNA分子的两条链。中链条数：始终是最初DNA分子的两条长链为模板形成的，并且每复制一次，新形成的中链增加两条。短链条数：所有的DNA分子中，除长链和中链外，余下的即为短链。复制过程中共需引物_______对2n-1深度学习自主学习导入新课迁移应用一

目的基因的筛选与获取一4.利用PCR获取和扩增目的基因（7）进一步探究：分析PCR扩增技术④如果已知某目的基因的序列和结构，利用PCR筛选和扩增出该目的基因的关键是什么？根据目的基因两端的核苷酸序列设计引物。【例1】下图是某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)，都不合理，请分别说明理由。第1组：

；第2组：