2022放射工作人员健康检查染色体畸变和微核检测质量控制规范

放射工作人员健康检查染色体畸变和微核检测质量控制规范目 次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1基本要求 1实验室及仪器设备要求 3染色体畸变检测质量控制 3微核检测质量控制 7附录A（资料性）人外周血淋巴细胞微核检测规程 8附录B（资料性）人外周血淋巴细胞微核检测原始记录 10附录C（资料性）人外周血淋巴细胞微核检测报告 12I放射工作人员健康检查染色体畸变和微核检测质量控制规范1范围本文件适用于放射工作人员健康检査中外周血淋巴细胞染色体畸变和微核检测的质量控制。2规范性引用文件（GB/T28236WS/T187GBZ98GBZ112职业性放射性疾病诊断总则GBZ/T248放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞染色体畸变检测与评价WS/T187界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1染色体畸变chromosomalaberration人员或细胞受到一定剂量电离辐射作用后，细胞中染色体发生的数量或结构上的改变。3.2微核细胞micronucleuscell胞质中含有微核的双核淋巴细胞。（），2128236、《职业性放射性疾（GBZ112）（GBZ98）（GBZ/T248）WS/T等；80%以上，染色体畸变和微核识别准确率需达到90%以上，全部考核合格后方可上岗。2615职业健康检查档案保存时间应当自放射工作人员最后一次职业健康检查结束之日起不少于15年。2实验室20m2等设备，宜选配细胞自动收获仪、自动制片机、自动染片机、自动接种仪等。仪器设备及技术指标符合表1要求。表1仪器设备及技术指标要求仪器设备技术指标要求必备/选配生物安全柜或超净工作台超净工作台首选双人双面、垂直送风必备恒温培养箱应选择隔水式恒温培养箱，二氧化碳培养箱更佳必备离心机应选择可放置15mL离心管的水平式离心机必备光学显微镜自带电源和坐标尺，油镜清晰（63倍或100倍），配备高分辨率数码摄像装置必备冰箱4℃普通冰箱和-20℃低温冰箱必备电子天平可读性1mg必备负压移液装置或真空吸液泵/必备排风装置通风橱、排风罩等，使工作场所有毒物质浓度符合《工作场所有害因素职业接触限值第1部分：化学有害因素》（GBZ2.1）要求必备便携式培养箱温度可控制在18-24℃选配灭菌设备电热箱（有空气强制对流装置）、热压蒸汽灭菌器或环氧乙烷灭菌器等选配涡旋混合器/选配水浴锅（箱）/选配全自动染色体扫描分析系统、细胞自动收获仪、自动制片机、自动染片机、自动接种仪/选配染色体畸变检测操作宜参照《放射工作人员职业健康检查外周血淋巴细胞染色体畸变检测与评价》（GBZ/T248）的规定。应采用培养开始加秋水仙素的方法。318℃～2472h。4℃～20更换厂家或批次的培养基均应对至少两个血液样本进行比对实验，并有实验记录。血液标本应在37℃培养箱中培养48h～52h，培养箱内应放置温度计进行温度监测。中老年人血液样本宜接种多份平行样或适当延长培养时间。染色体数目为46±1；染色体分散良好，长短粗细适中，背景干净，各条染色体可清楚辨认。见示例图1、图2和图3（1000×）。图1常色体 图2双丝和无丝断片 图3着丝环无丝断片4547200243表2染色体畸变类型及表示符号符号染色体畸变符号染色单体畸变含义含义dic双着丝粒体ctb单体断裂tri三着丝粒体ctg单体裂隙r着丝粒环ctd单体缺失ace无着丝粒体cte单体互换ar无着丝粒环tr三射体f无着丝粒断片qr四射体min微小体t相互易位inv倒位del缺失csb染色体断裂csg染色体裂隙roguecell恶棍细胞rob罗伯逊易位表3细胞染色体畸变及表示方法细胞染色体畸变表示方法1个dic/r和1个acedic(1)/r(1)1个dic/r，无acedic(0)/r(0)2个dic/r和1个acedic(1)+dic(0)/r(1)+r(0)2个dic/r和3个ace2dic(1)+ace/2r(1)+ace1个dic，1个r，1个acedic(1)+r(0)/dic(0)+r(1)1个tri，2个acetri(2)号、畸变细胞坐标、畸变类型和数目；1～4到显微镜下并调整微调旋钮进行人工镜检，仔细辨认予以鉴定，并通过核型分析软件确认。如果使用双5着丝粒自动扫描分析系统识别双着丝粒体，仍需经人工分析判定，不应仅通过软件识别。1003100200（GBZ/T248）90（GBZ/T248）25应采用胞质分裂阻滞法（CB微核法）进行微核检测，操作规程宜参照WS/T187和附录A。6.2.1和6.2.26.3-B松胞素-B配制、保存和加入培养体系时均需避光。如更换试剂厂家应对至少两个血液样本进行比对实验，并有实验记录。1/4；10006456（400×）1/161/3；图4正双淋细胞 图51个含1微核 图61个含3微核坐标；20B。90。257附录A（资料性）人外周血淋巴细胞微核检测规程-B将5mg-B2.5mL（DMSO）2g/L20℃避光冻存。0.3mL1.7mL300mg/L（KCl）5.59g1000mL0.075mol/L常温保存备用。取甲醇、冰乙酸，配成体积比3:1的固定液。固定液需在用前新鲜配制。体检时静脉血的采集应在所有放射性检查前进行。用肝素抗凝采血管采集受检者静脉血约2mL。0.3mL～0.5mL到含5mLRPMI-1640培养液中，轻轻摇匀，37℃±0.5℃恒温培养箱内培养。培养40h～44-B6mg/L66h～72。低渗1000r/min～1500r/min200g～250g)离心8min～10min8mL37℃0.075mol/LKCl，预固定8低渗完毕，立即每管加入1mL新配制的固定液，用吸管吹打混匀，以1000r/min～1500r/min(约200g～250g)离心8min～10min。取出离心管，用吸管吸去上清液，每管中加入8mL固定液，用吸管快速吹打细胞团块并充分吹打混匀，常温下固定20min～30min，以1000r/min～1500r/min(约200～250g)离心8min～10min。取出离心管，重复第一次固定的操作。制片取出离心管，吸去上清液，根据细胞团块的大小每离心管中留3滴～5滴固定液以调节细胞浓度，混匀。然后将细胞悬液滴到4℃冰箱预冷的洁净载玻片上，室温空气自然干燥。编号对每一张微核标本片进行编号，并按照编号做好记录。染色pH6.810%（Giemsa)8min～10min，（约45°阅片在显微镜（400×）下阅片，根据7.4.1和7.5.1选择双核淋巴细胞和微核进行分析。对微核细胞拍照，并将坐标记到原始记录上。共分析1000个双核淋巴细胞。计算微核率，按本实验室正常值范围进行评价。9附录B（资料性）人外周血淋巴细胞微核检测原始记录XXXXX（）XXXXX人淋巴细胞微核检测原始记录样品名称肝素抗凝血 收样日期 检验项目外周血淋巴细胞微核检测(CB微核法)检验编号 检验日期 环境条件 ℃%RH科室名称 仪器状态 仪器型号及编号:显微镜:□ □离心机:□ □培养箱:□ □检验依据 实验过程：分析人： 复核人：年 月 日 年 月 日第 页 共 页10表B.1外周血淋巴细胞微核检测记录表分析双核淋巴细胞数： 个/人检验编号微核细胞坐标位置（X/Y）细胞率(‰)微核率（‰）