传染病病例标本采集和运输课件

病原微生物标本的采集、保存及运输方法病原微生物标本的采集标本采集种类血液标本（抗凝血与非抗凝血）呼吸道标本上呼吸道标本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、痰液等）下呼吸道标本（呼吸道抽取物、支气管灌洗液、胸腔积液、肺组织活检标本等）。消化道标本（粪便和肛拭子）尿液标本其他人体标本（脑脊液、疱疹液、淋巴结穿刺液等）尸体解剖标本采集媒介和动物标本采集环境标本采集病原微生物标本的采集标本采集中的注意事项采样时生物安全的考虑采样时间及部位采样容器采样标本的标识各种标本的采样方法病原微生物标本的采集病原微生物标本的采集采样时间及部位时间:一般在怀疑细菌感染时应尽量在急性发病期和使用抗生素之前采集标本，进行细菌的分离培养，否则这种标本在分离培养时要加药物拮抗剂。作病毒分离和病毒抗原检测的标本，应在发病初期和急性期采样，因为此时病毒在体内大量繁殖，检出率高，病毒分类标本最好在发病1～2天内采取。部位：根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采集不同的标本。例如伤寒病人应在发病早期未使用抗生素之前采血培养，在2～3周时停用抗生素2天后采粪便培养。全病程可做骨髓培养。病原微生物标本的采集采样容器采集标本应使用无菌容器，一个标本一个容器。对容器基本要求是选耐用材料制成，容器包装好后可防渗漏。能承受空中地面运送过程中可能发生的温度和压力变化。病原微生物标本的采集各种标本的采样方法（4）肛拭子：用棉花拭子在3-5mlHank’s液中浸湿，插入肛门2-3cm处，自肛门周围皱襞处拭取，或在肛门口内轻轻旋转涂擦，然后插入盛有3-5mlHank’s液采样管内。

（6）疱疹液：可同时采集多个疱疹作为一份标本。先用75%酒精对疱疹周围的皮肤进行消毒，然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入盛有3-5mlHank’s液中、在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。如用于核酸检测的标本采集采集咽拭子或肛拭子等用于检测核酸时不能使用棉拭子和木质拭子棒，因为这类材料中含有核酸扩增抑制剂，而要使用灭菌人造纤维拭子和塑料棒。病原微生物标本的采集病原微生物标本的采集病原微生物标本的采集禽流感环境标本采集1、水标本禽类饮用水：在每个笼具旁的饮水槽采集一份饮用水标本,将水槽中的水样用无菌的、一次性的玻璃棒或棉签充分混匀后采集5-10ml置于15ml外螺旋盖的管内。水沟或水池:清洗禽类的污水:病原微生物标本的采集2、擦拭标本笼具表面擦拭标本：用蘸有采样液的带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭笼具表面禽类最常接触的3-5个不同部位（包括笼具底部），然后将擦拭过的拭子放入含5ml采样液的采样管中，尾部弃去。也可以用多个拭子充分擦拭笼具表面后放到一个采样管中宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本：如果宰杀或摆放禽肉使用不同的案板，可采集擦拭标本放到不同的采样管中。方法与采集笼具表面擦拭标本的方法相同，拭子要擦拭禽肉接触最多的部位病原微生物标本的采集3、粪便标本从禽舍或环境中采集新鲜禽类粪便样品5g左右，放入含5ml采样液的采样管中，充分混匀。同一地点多份粪便标本可置于同一采样管中。

4、其它标本笼具周围标本（笼具下地面，笼具垫草等）内脏拭子皮毛拭子等。病原微生物标本的保存总原则：根据标本种类及检测内容确定标本的保存方式。用于细菌检测的标本：常需无菌、无抗生素保存，从而能确保目标细菌的存活并抑制其他微生物的过度生长。一般在4˚C或室温保存。用于病毒检测的标本：一般应放在保温容器（0˚C～4˚C）里，不可放置超过2天，如不能立即分离病毒时，应将标本冻存保存。若长期储存，最好在－70˚C冻存。病原微生物标本的保存如怀疑是寄生虫，所取粪便中加入10%福尔马林和PVA防腐剂（充分混合）。用于检测抗原或抗体的标本可在4˚C～8˚C保存24～28h，在－20˚C保存时间更长。检测抗体的血清可在4˚C保存约一个星期，最长10天；超过一周必须在-20˚C下冷冻。病原微生物标本的保存实验室必须对所有标本建立追踪系统，此系统中必须严格注明标本基本信息，如标号，标本唯一识别码，采样日期，地点，采样人等；患者的基本信息、临床诊断检测结果，以及实验室检测信息，如检测项目、时间和结果。从而可随时了解标本涞源信息，追踪原始出处。病原微生物标本的包装任何感染性材料的包装和运输都必须遵循WHO对传染性物质和诊断性标本的安全运送指南（WHO，1997）。标准的包装方法和材料应能确保即使在运送中包装意外受损时也能保护人员的安全及标本的完整。因此运送标本时要进行三层包装。病原微生物标本的包装病原微生物标本的包装A类包装和B类包装区别1A类包装B类包装定义对人或动物致死或永久性致残不符合列入A类标准的感染性物质运输专用名称感染性物质，可感染人的诊断标本或临床标本或生命物质B类英文运输专用名InfectioussubstanceaffecinghumansBiologicalsubstane,categoryBUN编号UN2814UN3373运输对象《名录》中规定的第一类、第二类病原微生物及其样本；第三类中包装分类为A类的病原微生物《名录》中规定的第三类、第四类病原微生物及其样本UN专用标记需要不需要A类包装和B类包装区别2

A类包装B类包装主容器防水、防穿刺、防泄漏防破损、防泄漏次级容器防水、防穿刺、防泄漏防破损、防泄漏外包装最小边长≥100mm至少有一个表面≥100mm×100mm危险申报单需要不需要标识客机单包装主容器最大运输量液体50mL,固体50g液体1L,固体4KgUN3373A类感染性物质的包装材料B类感染性物质的包装材料A类感染物质的标识B类感染物质的标识UN3373Biologicalsubstance,

CategoryB（生物物质，B类）病原微生物标本的实验室间传递病原微生物标本的运输地面运送标本时注意将装有标本的箱子紧紧固定在交通工具上，车上还应备有吸水材料、消毒剂、手套、口罩、护目镜、密封防水的废弃物容器等防护用品。为避免路途颠簸引起标本溶血，可在运送前分离血清。在国际、国家、商业的有关规定允许下，诊断标本也可空运，应注意规范包装。

病原微生物标本的运输分离培养细菌、病毒的标本大多数要求冷藏运送。脑膜炎球菌等应在35˚C～37˚C保温运送。血液标本用于细菌、病毒或寄生虫分离时，需低温保存，不能冷冻。用冰块而不是干冰运送。做立克次体类微生物的全血标本要求干冰保存和冷冻运送。检测核酸样品的运送要求低温快速。从标本采集到检测的间隔时间要尽可能短，并尽可能将标本处于冷藏状态。检测前保存时间较长时则需冷冻标本防止核酸降解。我国对病原微生物菌（毒）种及样本运输的有关规定尽量陆路运输；报卫生主管部门批准（跨省报卫生部）包装、容器和标识符合要求二人护送，不能通过城市公交发生泄漏2小时内报告《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》《可感染人类的高致病性病原微生物（毒）种或样本运输管理规定》已于2005年11月24日经卫生部部务会议讨论通过，现予以发布，自2006年2月1日起施行。《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》运输以上范围内规定的菌（毒）种或样本（以下通称高致病性病原微生物菌（毒）种或样本），应当经省级以上卫生行政部门批准。未经批准，不得运输。申请单位：从事疾病预防控制、医疗、教学、科研、菌（毒）种保藏以及生物制品生产的单位，因工作需要，可以申请运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本。运输申请：申请运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的单位（以下简称申请单位），在运输前应当向省级卫生行政部门提出申请，并提交以下申请材料（原件一份，复印件三份）：1.可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）

种或样本运输申请表

（接收单位）具备从事高致病性病原微生物实验活动资格的实验室；（接收单位）取得有关政府主管部门核发的从事高致病性病原微生物实验活动、菌（毒）种或样本保藏、生物制品生产等的批准文件。

接收单位应当符合以下条件：

1.具有法人资格；

2.具备从事高致病性病原微生物实验活动资格的实验室；

3.取得有关政府主管部门核发的从事高致病性病原微生物实验活动、菌（毒）种或样本保藏、生物制品生产等的批准文件。在固定的申请单位和接收单位之间多次运输相同品种高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，可以申请多次运输。多次运输的有效期为6个月；期满后需要继续运输的，应当重新提出申请。省内运输审批：

申请在省、自治区、直辖市行政区域内运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，由省、自治区、直辖市卫生行政部门审批。省级卫生行政部门应当对申请单位提交的申请材料及时审查，对申请材料不齐全或者不符合法定形式的，应当即时出具申请材料补正通知书；对申请材料齐全或者符合法定形式的，应当即时受理，并在5个工作日内做出是否批准的决定；符合法定条件的，颁发《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书》；不符合法定条件的，应当出具不予批准的决定并说明理由。跨省运输审批：

申请跨省、自治区、直辖市运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，应当将申请材料提交运输出发地省级卫生行政部门进行初审；对符合要求的，省级卫生行政部门应当在3个工作日内出具初审意见，并将初审意见和申报材料上报卫生部审批。

卫生部应当自收到申报材料后3个工作日内做出是否批准的决定。符合法定条件的，颁发《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书》；不符合法定条件的，应当出具不予批准的决定并说明理由。根据疾病控制工作的需要，应当向中国疾病预防控制中心运送高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的，向中国疾病预防控制中心直接提出申请，由中国疾病预防控制中心审批；符合法定条件的，颁发《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书》；不符合法定条件的，应当出具不予批准的决定并说明理由。中国疾病预防控制中心应当将审批情况于3日内报卫生部备案。

运输申请单位卫生部科教司中国CDC(实验室管理处)出发地省级卫生行政部门初审（3个工作日）核发《准运证》或出具不予批准的决定及理由核准申请的单位，在运输任务结束后，书面报告运输情况3日内报卫生部备案审批陆路运输√水路运输√民用航空运输√镜检形态学观察细菌的分离培养细菌的鉴定病毒的分离培养直接涂片镜检形态学观察直接涂片染色后镜检适用于形态和染色上具有特征性的病原菌。例如痰中查见抗酸性细长杆菌，脓液中发现革兰氏阳性葡萄串状球菌，咽喉假膜中有异染颗粒的棒状杆菌及霍乱弧菌、艰难梭菌等。优点是方便快捷，缺点是适用范围小。细菌的分离培养细菌的鉴定生化鉴定生化代谢特征是鉴定病原菌的重要方法之一。如糖发酵试验等。现有多种微量、快速、半自动或全自动细菌生化反应试剂盒和检测仪器，极大地方便了菌株鉴定工作。血清鉴定与分型利用已知的特异抗体的诊断血清可以确定细菌的种和型。常用方法是玻片凝集实验，在数分钟内能可得出结果。4.、免疫学检测凝集反应包括直接凝集反应、间接凝集反应、间接凝集抑制反应和协同凝集反应。6、核酸检测聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）通常在支持膜上进行，又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交和RNA印迹杂交。DNA探针杂交在检测没有成熟可靠的培养方法的临床标本时具有突出的优点，如HPV、乙肝病毒（HBV）、和EB病毒的检测。与传统鉴定方法相比，针对荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌和新生隐球菌的检测探针具有独特的优点。芯片是一块方形的玻璃，上面铺了一层肉眼看不见的DNA探针。待测的样品基因被切成长短不一的片断，用荧光化学物质标记，然后作为一种溶液注射到嵌有芯片的胶片上。用装有激光设备的仪器来检测，通过激光光束激发后会发出荧光。荧光的强弱与DN