我的细胞融合与单克隆抗体

我的细胞融合与单克隆抗体自学指导怎样才能顺利达到上述目标？要靠大家紧张有效得自学。请同学们认真阅读教材P52-54,思考下列问题,8分钟后进行检测。比一比,看谁知识掌握得最牢固、1、动物细胞融合得概念就是什么？2、动物细胞融合得原理就是什么？诱导动物细胞融合得方法有哪些？3、抗体就是由何种细胞产生得？4、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗

体吗？5、融合后培养液中有几种细胞？6、怎样筛选出杂交瘤细胞,杂交瘤细胞有

何优点？先学(一)学生认真阅读教材P52—54,独立完成上述思考题(教师巡视,保证每位学生都集中精力)(时间8分钟)(二)提问:随机点名学生回答,如有错误,

教师引导其她学生更正、讨论。(三)检测、板演1、出示检测题2、让三名学生板演,其她学生做到笔记本上,教师巡视,搜集检测中出现得错误。1、动物细胞工程技术得基础就是:()A、动物细胞融合 B、胚胎移植C、动物细胞培养D、核移植２、在动物细胞融合和植物体细胞杂交得比较中,正确得就是()A、结果就是相同得B、杂种细胞得形成过程基本相同C、操作过程中酶得作用相同D、诱导融合得手段相同CB3、用于动物细胞培养得组织和细胞大都取自胚胎或出生不久得幼龄动物得器官或组织,其主要原因就是这样得组织细胞()

A、容易产生各种变异B、具有更强得全能性

C、取材十分方便D、分裂增殖得能力强4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,得到杂交细胞,经培养可产生大量得单克隆抗体,与骨髓瘤细胞融合得就是()

A、经过免疫得B淋巴细胞

B、没经过免疫得T淋巴细胞

C、经过免疫得T淋巴细胞

D、没经过免疫得Ｂ淋巴细胞DA5、单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在这种培养基上不能存活增殖得细胞就是()①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞

A、②④B、①③⑤C、①②③④D、②③C后教(一)更正:

1、教师公布答案、学生自改。2、自己寻找错误原因或同桌之间小声讨论(二)点评:

1、对于学生讨论后不能解决得问题,教师进行有针对性得分析和讲解2、评检测题,点拨知识点融合得原生质体AB再生细胞壁杂种细胞AB杂种植株脱分化愈伤组织再分化原生质体B原生质体A去壁人工诱导植物细胞A植物细胞B回顾植物体细胞杂交过程去壁10大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流一、动物细胞融合就是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞得过程。也称细胞杂交⑴自然发生:受精卵⑵人工诱导:利用诱导剂诱导动物细胞融合杂交细胞:融合后形成得具有两个或多个细胞遗传信息得单核细胞。概念:细胞膜得流动性原理:诱导融合方法:物理法:化学法:生物法:灭活得病毒离心、振动、电激等聚乙二醇(PEG)仙台病毒紫外线灭活丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）①什么就是病毒得灭活？灭活就是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力,但就是并不破坏病毒得抗原结构。②灭活病毒诱导细胞融合得原理病毒表面含有得糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上得糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上得蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）正在融合得淋巴细胞与骨髓瘤细胞正在融合得鸡血细胞融合过程:把两个不同得动物细胞放在一起,用灭活得病毒处理细胞,她们先发生质融合,再出现核融合,进而形成杂交细胞。融合后得杂交细胞经过有丝分裂后仍能形成两个完整得杂交细胞动物细胞融合技术得意义打破生殖隔离,使远缘杂交成为可能广泛应用多个学科领域(细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种得培育)重要用途:制备单克隆抗体。二、单克隆抗体传统血清抗体得制备:方法:向动物体内反复注射某种抗原,然后从动物血清中分离所需要得抗体。纯度低;产量低、特异性差传统血清抗体得制备得缺陷:使用相应得抗体检测乙肝病毒——抗原抗体生成得原理医院一般检测人体内就是否存在乙肝病毒得方法乙肝病毒模式图

凡能够引起机体产生特异性免疫应答得物质叫做抗原。⑴什么就是抗原？例如花粉、病菌、病毒等。有时自身得组织或细胞也会成为抗原,如癌细胞等。抗原决定簇:抗原表面具有得某些特定得化学基团,能决定抗原特异性,就是免疫细胞识别抗原得重要依据。各种抗原得决定簇数目不同,同一抗原得决定簇可能有多种。

⑵什么就是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪里?起何作用？

当机体受到抗原刺激剂后由效应B细胞(浆细胞)产生得,并且能与该抗原发生特异性结合得具有免疫功能得球蛋白——抗体。抗体分布于血清中,也分布于组织液及外分泌液中。抗体与相应抗原特异性结合

一种抗原有多种不同得决定簇,刺激得就是多种B细胞,作用于不同得B细胞后,会产生多种抗体血清抗体(也称多克隆抗体)由血清中提取得抗体就是由不同淋巴细胞产生得多种抗体得混合物,可达百万种以上,称为多克隆抗体。特点:产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。抗原不纯抗体不纯

抗原动物体内刺激效应B抗体

抗体

抗原应答抗体得不纯性

动物细胞受到抗原刺激,引起免疫反应产生得球蛋白、不就是自己得而又能引起免疫应答反应得物质就就是抗原、一种抗原有多种不同得决定簇,刺激得就是多种B细胞,作用于不同得B细胞后,会产生多种抗体,这就是多克隆得,故不纯!制备单克隆抗体得思路抗原

B细胞浆细胞抗体刺激

怎么才能得到纯得抗体?

光纯还不行,还要大量、怎么办?

但,有问题:

找,什么细胞能无限繁殖呢?

思路就出来了:要想获单一得纯抗体,就必须从一个B细胞出发、每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一,特异性强得抗体。让B细胞大量繁殖(克隆)就可以产生大量抗体了、B细胞就是不能无限繁殖得、怎么办?癌!只有癌细胞、但她不能产生抗体、癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体、B细胞能产生抗体,但不能大量繁殖、融合呀!只要将两个细胞融合即可互补、⑵如何诱导融合？

加入聚乙二醇(PEG)⑴如何得到B淋巴细胞？制备单克隆抗体得过程⑶细胞两两融合后,有哪些类型？B-BB-瘤(杂交瘤细胞)瘤-瘤⑷如何筛选出杂交瘤细胞？

单克隆抗体制备过程中,总共有两次筛选,第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体得杂交瘤细胞,两次筛选得原理和方法就是不相同得。

①首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞①细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA得合成途径,但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径,没有S途径,可就是能不断分裂增殖。您想到筛选杂交瘤细胞得方案了么？

小资料:在培养液中加入氨基蝶呤,收集增殖细胞！加入氨基嘌呤后,使D合成途径阻断,仅有D合成途径得骨髓瘤细胞及其彼此融合得细胞就不能增殖,但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后得杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中得S途径合成DNA而增殖。通常采用有限稀释克隆细胞得方法,将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔细胞培养板上培养,使每孔细胞不超过一个,再由这些单细胞克隆生长,然后检测各孔上清液中细胞分泌得抗体,那些上清液可与特定抗原结合得培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体得杂交细胞株进行扩大培养。②再筛选出能分泌所需抗体得杂交瘤细胞在单克隆抗体制备过程中,两次筛选得原理和方法就是不相同得。(5)如何得到大量得单克隆抗体？

体内培养体外培养单克隆抗体——化学性质单一、特异性强单克隆抗体筛选杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内细胞培养筛选骨髓瘤细胞诱导细胞融合特异性杂交瘤细胞杂交瘤细胞系提取经过免疫得B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体得制备过程:特点:既能产生抗体又能大量繁殖特点:特异性强灵敏度高可大量制备注射抗原免疫BB、B瘤、瘤瘤(B、瘤)(一选)选择性培养基:只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体得B细胞(二选):选能产生所需专一抗体得杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点:既能产生特异性抗体,又能大量增殖。单克隆抗体制备过程4、单抗隆抗体得应用①作为诊断试剂②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病

用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定,纯度高、特异性强,具有准确、高效、简易、快速得优点。③用于治疗疾病和运载药物

利用同位素标记单抗,在特定组织成像

制成生物导弹,将药物定向带到癌细胞所在得位置,在原位杀死癌细胞,疗效高、副作用小。单克隆抗体得优点:特异性强,灵敏度高,并可以大量制备。

⑵用于治疗疾病和运载药物①特异性强、灵敏度高生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物②疗效高、毒副作用小结合同位素的单抗-----生物导弹结合同位素得单抗-----生物导弹单抗放射性同位素制备单克隆抗体1、常规抗体获得得方法及其特点2、单克隆抗体制备得原理◆利用

产生特异性抗体得功能。◆利用

无限增殖得特性。◆利用

技术将两种细胞融合获得杂