生物科技遗传基因题库挑战卷

生物科技遗传基因题库挑战卷姓名_________________________地址_______________________________学号______________________-------------------------------密-------------------------封----------------------------线--------------------------1.请首先在试卷的标封处填写您的姓名，身份证号和地址名称。2.请仔细阅读各种题目，在规定的位置填写您的答案。一、选择题1.遗传基因的基本概念

1.1基因的遗传单位是指什么？

A.染色体

B.核苷酸

C.DNA分子

D.蛋白质

1.2基因的表达过程中，哪种酶负责将DNA信息转录成mRNA？

A.DNA聚合酶

B.RNA聚合酶

C.转录酶

D.核酸酶

1.3以下哪项不是基因的功能？

A.指导蛋白质合成

B.影响表型

C.控制生长发育

D.分子伴侣

2.DNA的双螺旋结构

2.1DNA的双螺旋结构是由哪两位科学家提出的？

A.Watson和Crick

B.Franklin和Cowan

C.Meselson和Stahl

D.Chargaff和Herrick

2.2DNA的碱基配对原则中，A与T配对，C与G配对，这种配对方式称为什么？

A.同源配对

B.反向配对

C.碱基互补配对

D.互补配对

2.3DNA双螺旋结构中，两条链之间的氢键数量大约是多少？

A.4个

B.6个

C.8个

D.10个

3.基因表达与调控

3.1基因表达是指什么？

A.基因从DNA转移到mRNA

B.mRNA从DNA转录

C.蛋白质从mRNA翻译

D.以上都是

3.2以下哪项不是基因调控的途径？

A.转录调控

B.翻译调控

C.翻译后修饰

D.基因突变

3.3在真核生物中，以下哪项不是基因表达的调控因子？

A.转录因子

B.RNA聚合酶

C.蛋白质激酶

D.热休克蛋白

4.基因突变与遗传病

4.1基因突变是指什么？

A.基因序列的改变

B.基因功能的丧失

C.基因表达的改变

D.以上都是

4.2基因突变的原因主要包括哪些？

A.电离辐射

B.化学物质

C.病毒感染

D.以上都是

4.3以下哪种遗传病与基因突变无关？

A.红细胞障碍性贫血

B.遗传性舞蹈病

C.遗传性高血压

D.遗传性高胆固醇血症

5.基因克隆与基因工程

5.1基因克隆是指什么？

A.基因在宿主细胞中的复制

B.基因序列的扩增

C.基因表达

D.基因编辑

5.2以下哪种方法常用于基因克隆？

A.聚合酶链反应（PCR）

B.转录

C.翻译

D.逆转录

5.3基因工程中的目的基因通常来源于以下哪种来源？

A.原核生物

B.真核生物

C.细菌

D.病毒

6.基因测序与生物信息学

6.1基因测序是指什么？

A.获取基因序列信息

B.获取蛋白质序列信息

C.获取基因组信息

D.以上都是

6.2基因测序的主要方法有哪些？

A.Sanger测序

B.测序芯片

C.测序通量

D.以上都是

6.3以下哪种生物信息学工具可以用于基因序列比对？

A.BLAST

B.ClustalOmega

C.EMBOSS

D.以上都是

7.基因治疗与基因编辑

7.1基因治疗是指什么？

A.通过改变基因序列来治疗疾病

B.通过基因转移来治疗疾病

C.通过基因敲除来治疗疾病

D.以上都是

7.2以下哪种基因编辑技术被广泛应用于基因治疗？

A.CRISPRCas9

B.ZFN

C.TALEN

D.以上都是

7.3基因治疗的主要目的是什么？

A.治疗遗传病

B.治疗癌症

C.治疗心血管疾病

D.以上都是

8.基因组学与生物多样性

8.1基因组学是指什么？

A.研究生物体的基因组

B.研究基因的遗传变异

C.研究基因表达

D.以上都是

8.2基因组学的研究方法主要包括哪些？

A.DNA测序

B.基因芯片

C.转录组学

D.以上都是

8.3生物多样性的保护主要包括哪些方面？

A.生物多样性调查

B.生物多样性保护

C.生物多样性监测

D.以上都是

答案及解题思路：

1.1答案：B。基因的遗传单位是核苷酸，它是构成DNA的基本单位。

1.2答案：B。RNA聚合酶负责将DNA信息转录成mRNA。

1.3答案：D。分子伴侣是指帮助蛋白质折叠和转运的蛋白质，与基因的功能无关。

2.1答案：A。Watson和Crick提出了DNA的双螺旋结构。

2.2答案：C。A与T配对，C与G配对，这种配对方式称为碱基互补配对。

2.3答案：C。DNA双螺旋结构中，两条链之间的氢键数量大约是8个。

3.1答案：D。基因表达是指基因在生物体内的转录和翻译过程。

3.2答案：D。基因突变是基因表达的一种调控方式。

3.3答案：D。热休克蛋白是参与蛋白质折叠和转运的蛋白质，与基因表达的调控无关。

4.1答案：A。基因突变是指基因序列的改变。

4.2答案：D。基因突变的原因主要包括电离辐射、化学物质、病毒感染等。

4.3答案：C。遗传性高血压与基因突变无关。

5.1答案：B。基因克隆是指基因序列的扩增。

5.2答案：A。聚合酶链反应（PCR）是常用于基因克隆的方法。

5.3答案：A。目的基因通常来源于原核生物。

6.1答案：A。基因测序是指获取基因序列信息。

6.2答案：D。Sanger测序、测序芯片、测序通量等是基因测序的主要方法。

6.3答案：A。BLAST是用于基因序列比对的生物信息学工具。

7.1答案：B。基因治疗是指通过基因转移来治疗疾病。

7.2答案：A。CRISPRCas9是广泛应用于基因治疗的技术。

7.3答案：A。基因治疗的主要目的是治疗遗传病。

8.1答案：A。基因组学是指研究生物体的基因组。

8.2答案：D。DNA测序、基因芯片、转录组学等是基因组学的研究方法。

8.3答案：D。生物多样性的保护包括生物多样性调查、生物多样性保护和生物多样性监测。二、填空题1.遗传基因的基本单位是__________。

答案：基因

解题思路：遗传基因是遗传信息的载体，基因是构成遗传信息的基本单位。

2.DNA分子的双螺旋结构是由两条__________反向平行排列而成的。

答案：脱氧核苷酸链

解题思路：DNA分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链构成，这两条链通过碱基配对形成双螺旋结构。

3.基因表达调控过程中，转录因子在__________阶段起关键作用。

答案：转录

解题思路：转录因子是一类调控基因表达的蛋白质，它们在RNA聚合酶结合到DNA模板上之前或过程中发挥作用，因此主要在转录阶段起关键作用。

4.基因突变可能导致__________和__________。

答案：生物性状的改变、进化

解题思路：基因突变是遗传变异的一种形式，它可能导致生物的性状发生改变，并在自然界中为进化提供原材料。

5.基因克隆技术包括__________、__________和__________。

答案：构建重组DNA分子、转化、选择和扩增

解题思路：基因克隆技术是指将目的基因从生物体中提取出来，通过特定的技术手段进行扩增和复制，包括构建重组DNA分子、转化受体细胞以及选择和扩增含目的基因的细胞。

6.基因测序技术包括__________和__________。

答案：Sanger测序、二代测序

解题思路：基因测序技术是指确定生物体中DNA序列的方法，包括经典的Sanger测序和基于PCR扩增的二代测序技术。

7.基因治疗是指将__________导入人体细胞，以治疗__________。

答案：正常基因、遗传病

解题思路：基因治疗是一种通过向患者细胞中导入正常基因来纠正或补偿缺陷基因的治疗方法，主要用于治疗遗传病。

8.基因编辑技术包括__________和__________。

答案：CRISPR/Cas9、ZFN（锌指核酸酶）

解题思路：基因编辑技术是指精确地修改或修复生物体基因的技术，CRISPR/Cas9和ZFN（锌指核酸酶）是目前应用较为广泛的两种基因编辑技术。三、判断题1.遗传基因是生物体遗传信息的载体。

答案：正确

解题思路：遗传基因是DNA上的特定序列，负责携带生物体的遗传信息，因此遗传基因是生物体遗传信息的载体。

2.DNA分子的双螺旋结构是由两条DNA链组成的。

答案：正确

解题思路：DNA分子的双螺旋结构由两条反向平行的DNA链组成，这两条链通过氢键连接，形成DNA的基本结构。

3.基因表达调控过程中，转录因子在转录阶段起关键作用。

答案：正确

解题思路：转录因子是一类蛋白质，它们在基因表达调控过程中起关键作用，特别是它们在转录阶段与DNA结合，调控基因的转录。

4.基因突变可能导致遗传病和变异。

答案：正确

解题思路：基因突变是指DNA序列的改变，这种改变可能导致遗传信息的错误表达，进而引起遗传病或生物体的表型变异。

5.基因克隆技术包括质粒载体、噬菌体载体和病毒载体。

答案：正确

解题思路：基因克隆技术是利用载体将目的基因插入宿主细胞中复制，常用的载体包括质粒、噬菌体和病毒，它们都能有效地携带和复制目的基因。

6.基因测序技术包括Sanger测序和NGS测序。

答案：正确

解题思路：基因测序技术是用来确定DNA序列的方法，Sanger测序和下一代测序（NGS）是目前最常用的两种测序技术。

7.基因治疗是指将正常基因导入人体细胞，以治疗遗传病。

答案：正确

解题思路：基因治疗是一种治疗方法，通过将正常基因导入有缺陷的细胞中，以修复或替换缺陷基因，达到治疗遗传病的目的。

8.基因编辑技术包括CRISPRCas9和TALEN。

答案：正确

解题思路：基因编辑技术是一种在基因组水平上修改基因的技术，CRISPRCas9和TALEN是目前最常用的两种基因编辑工具，它们可以高效、精确地编辑目标基因。四、简答题1.简述遗传基因的基本概念。

答案：

遗传基因是指生物体中携带遗传信息的分子，主要存在于DNA分子中。遗传基因通过编码蛋白质或RNA分子，决定生物体的遗传特征和生物体的生理功能。

解题思路：

定义遗传基因的基本概念。

指出遗传基因存在的主要分子。

说明遗传基因的功能。

2.简述DNA分子的双螺旋结构。

答案：

DNA分子的双螺旋结构是由两条反向平行的脱氧核糖核苷酸链组成的。每条链由磷酸骨架和碱基对组成，碱基对通过氢键连接，两条链之间的碱基配对遵循AT和CG的互补原则。

解题思路：

描述DNA分子的组成。

解释双螺旋结构的特征。

指出碱基配对的规律。

3.简述基因表达调控过程。

答案：

基因表达调控过程包括转录和翻译两个阶段。转录是指在细胞核内，DNA模板指导合成互补的RNA分子；翻译是指在细胞质中，mRNA分子指导合成蛋白质。调控过程包括启动子、增强子、沉默子等调控元件的作用，以及转录因子、RNA聚合酶等分子的参与。

解题思路：

描述基因表达调控的两个主要阶段。

解释转录和翻译的基本过程。

概述调控元件和关键分子的作用。

4.简述基因突变的原因和类型。

答案：

基因突变的原因包括物理因素（如辐射）、化学因素（如化学物质）、生物因素（如病毒）等。基因突变的类型包括点突变、插入突变、缺失突变等，这些突变可能导致基因功能的改变。

解题思路：

列举导致基因突变的原因。

描述基因突变的类型。

说明突变对基因功能可能产生的影响。

5.简述基因克隆技术的原理和步骤。

答案：

基因克隆技术是基于DNA重组原理，通过将目的基因插入载体（如质粒、噬菌体）中，在宿主细胞中进行复制和表达。步骤包括：目的基因的获取、载体的选择和改造、目的基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选和鉴定克隆。

解题思路：

解释基因克隆技术的原理。

列出基因克隆的基本步骤。

说明每一步骤的关键点。

6.简述基因测序技术的原理和意义。

答案：

基因测序技术通过测定DNA或RNA序列来确定基因的排列顺序。原理包括Sanger测序法、高通量测序法等。基因测序的意义在于揭示遗传疾病的致病基因、研究基因功能、进行个性化医疗等。

解题思路：

描述基因测序的基本原理。

列举常见的基因测序方法。

说明基因测序的应用领域。

7.简述基因治疗的原理和临床应用。

答案：

基因治疗是将正常基因或功能基因导入患者的细胞中，以纠正或补偿缺陷基因的治疗方法。临床应用包括治疗遗传性疾病、癌症、心血管疾病等。

解题思路：

解释基因治疗的原理。

列出基因治疗的临床应用领域。

说明基因治疗的优势和挑战。

8.简述基因编辑技术的原理和应用。

答案：

基因编辑技术利用CRISPR/Cas9等系统，通过DNA切割和修复机制，实现对特定基因的精确编辑。应用包括基因治疗、研究基因功能、培育转基因生物等。

解题思路：

描述基因编辑技术的原理。

列出基因编辑技术的应用领域。

说明基因编辑技术的优势和局限性。五、论述题1.论述遗传基因在生物进化中的作用。

解答：

遗传基因在生物进化中起着的作用。遗传基因的变异是生物进化的根本原因，通过自然选择、基因漂变、基因流动和突变等机制，使得生物种群中的基因频率发生改变，从而产生新的物种。具体来说，遗传基因在生物进化中的作用包括：

（1）提供生物变异的基础：遗传基因的变异是生物进化的基础，变异为自然选择提供了选择材料。

（2）促进生物适应环境：通过自然选择，适应环境的个体得以生存和繁衍，而适应力较弱的个体则被淘汰，从而使种群适应环境。

（3）形成物种多样性：遗传基因的变异使得生物种群在进化过程中产生多样性，有利于生物的生存和发展。

（4）推动生物进化：遗传基因的变异是生物进化的驱动力，使生物种群在长期进化过程中形成新的物种。

2.论述基因表达调控的机制及其意义。

解答：

基因表达调控是生物体内基因产物合成过程中的重要环节，对生物生长发育、适应环境、维持生命活动等方面具有重要意义。基因表达调控的机制主要包括：

（1）转录调控：通过调控RNA聚合酶的结合、启动子区域的甲基化等途径，实现对基因转录的调控。

（2）转录后调控：通过RNA剪接、mRNA稳定性调控等途径，实现对转录后mRNA的调控。

（3）翻译调控：通过调控核糖体组装、mRNA结合蛋白等途径，实现对蛋白质翻译的调控。

（4）蛋白质后修饰调控：通过蛋白质磷酸化、乙酰化等途径，实现对蛋白质功能的调控。

基因表达调控的意义包括：

（1）保证生物体内基因产物合成的时间、空间和数量上的协调。

（2）使生物适应环境，提高生存竞争力。

（3）维持生物体内稳态，保障生命活动的正常进行。

3.论述基因突变与遗传病的关系。

解答：

基因突变是指基因序列发生改变，包括点突变、插入、缺失、倒位等。基因突变与遗传病密切相关，它们之间的关系：

（1）基因突变是遗传病发生的根本原因：基因突变导致蛋白质结构或功能异常，进而引发遗传病。

（2）基因突变与遗传病类型：基因突变可导致单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病。

（3）基因突变与遗传病发病率：基因突变是遗传病发病率升高的主要原因。

4.论述基因克隆技术在生物研究中的应用。

解答：

基因克隆技术是将目的基因片段从生物体内提取、复制、扩增并插入载体中，使其在宿主细胞中稳定表达的技术。基因克隆技术在生物研究中的应用主要包括：

（1）基因克隆：用于获取目的基因片段，为后续研究提供材料。

（2）基因表达：通过基因克隆，在宿主细胞中表达目的蛋白，研究其结构和功能。

（3）基因功能分析：通过基因克隆，构建基因敲除、过表达等细胞模型，研究基因的功能。

（4）基因治疗：利用基因克隆技术，将正常基因导入患者体内，治疗遗传病。

5.论述基因测序技术在生物研究中的应用。

解答：

基因测序技术是测定生物体内基因序列的方法，广泛应用于生物研究领域。基因测序技术在生物研究中的应用：

（1）基因组学研究：通过基因测序，解析生物体的基因组结构、功能和进化历史。

（2）疾病基因研究：通过基因测序，发觉与疾病相关的基因突变，为疾病诊断和治疗提供依据。

（3）进化生物学研究：通过基因测序，研究生物进化关系和基因流动。

（4）药物研发：通过基因测序，发觉与药物作用相关的基因，为药物设计和筛选提供依据。

6.论述基因治疗在医学领域的应用前景。

解答：

基因治疗是将正常基因导入患者体内，纠正或修复缺陷基因，以达到治疗遗传病的目的。基因治疗在医学领域的应用前景

（1）治疗遗传病：基因治疗有望治愈或缓解许多遗传病，如囊性纤维化、血红蛋白病等。

（2）治疗癌症：基因治疗可以抑制肿瘤生长、转移和复发，提高患者生存率。

（3）治疗心血管疾病：基因治疗可以改善心血管功能，降低心血管疾病的发生率。

（4）治疗神经系统疾病：基因治疗可以修复神经细胞损伤，治疗帕金森病、阿尔茨海默病等。

7.论述基因编辑技术在生物研究中的应用。

解答：

基因编辑技术是利用CRISPR/Cas9等工具对生物体内基因进行精确编辑的技术。基因编辑技术在生物研究中的应用包括：

（1）基因功能研究：通过基因编辑，构建基因敲除、过表达等细胞模型，研究基因的功能。

（2）疾病模型构建：通过基因编辑，构建疾病动物模型，研究疾病的发病机制和治疗方法。

（3）基因治疗：利用基因编辑技术，将正常基因导入患者体内，治疗遗传病。

（4）生物育种：通过基因编辑，培育具有优良性状的作物和动物品种。

8.论述基因组学与生物多样性的关系。

解答：

基因组学是研究生物体基因组的结构和功能的一门学科，与生物多样性密切相关。基因组学与生物多样性的关系：

（1）基因组多样性：生物多样性的一个重要组成部分，表现为不同物种之间、同一物种不同个体之间基因组的差异。

（2）进化关系：基因组学研究揭示了生物进化过程中的遗传关系，有助于理解生物多样性的形成。

（3）基因流与隔离：基因组学研究揭示了基因流和隔离对生物多样性的影响。

（4）生物资源保护：基因组学研究有助于了解生物资源的遗传多样性，为生物资源保护提供依据。

答案及解题思路：

1.遗传基因在生物进化中的作用：

答案：遗传基因在生物进化中起着的作用，包括提供生物变异的基础、促进生物适应环境、形成物种多样性和推动生物进化。

解题思路：分析遗传基因变异、自然选择、基因漂变、基因流动和突变等机制对生物进化的影响。

2.基因表达调控的机制及其意义：

答案：基因表达调控的机制包括转录调控、转录后调控、翻译调控和蛋白质后修饰调控，其意义在于保证生物体内基因产物合成的时间、空间和数量上的协调，使生物适应环境，提高生存竞争力，维持生物体内稳态，保障生命活动的正常进行。

解题思路：阐述基因表达调控的四种机制及其生物学意义。

3.基因突变与遗传病的关系：

答案：基因突变是遗传病发生的根本原因，与遗传病类型和发病率密切相关。

解题思路：分析基因突变在遗传病发生、发展和传播中的作用。

4.基因克隆技术在生物研究中的应用：

答案：基因克隆技术在生物研究中的应用包括基因克隆、基因表达、基因功能分析和基因治疗等。

解题思路：列举基因克隆技术在各个领域的应用实例。

5.基因测序技术在生物研究中的应用：

答案：基因测序技术在生物研究中的应用包括基因组学研究、疾病基因研究、进化生物学研究和药物研发等。

解题思路：分析基因测序技术在各个领域的应用价值和意义。

6.基因治疗在医学领域的应用前景：

答案：基因治疗在医学领域的应用前景包括治疗遗传病、治疗癌症、治疗心血管疾病和治疗神经系统疾病等。

解题思路：列举基因治疗在各个领域的应用前景和潜在优势。

7.基因编辑技术在生物研究中的应用：

答案：基因编辑技术在生物研究中的应用包括基因功能研究、疾病模型构建、基因治疗和生物育种等。

解题思路：阐述基因编辑技术在各个领域的应用实例和优势。

8.基因组学与生物多样性的关系：

答案：基因组学揭示了生物进化过程中的遗传关系，有助于理解生物多样性的形成，包括基因组多样性、进化关系、基因流与隔离以及生物资源保护等方面。

解题思路：分析基因组学在研究生物多样性方面的作用和贡献。六、计算题1.计算DNA分子中碱基对的数目。

假设一个DNA分子含有1.5×10^9个碱基，其中A、T、C、G各占一半。

每个碱基对由两个碱基组成，因此碱基对数目是碱基数目的一半。

2.计算基因序列中碱基对的数目。

假设一个基因序列长度为1500碱基，已知该基因序列的GC含量为40%。

根据GC含量，计算AT的含量，然后根据总碱基数计算碱基对数目。

3.计算基因表达过程中转录和翻译的效率。

假设一个基因的长度为1500碱基，其中编码序列（外显子）长度为1000碱基。

转录效率=外显子长度/基因总长度。

翻译效率=蛋白质氨基酸数目/编码序列长度。

4.计算基因突变导致的遗传病发病率。

假设某种遗传病的突变频率为1/10000，人群中该基因的携带者频率为1/100。

发病率=突变频率×携带者频率。

5.计算基因克隆过程中所需的DNA分子量。

假设需要克隆一个长度为3000碱基的基因，已知DNA的分子量为650g/mol，每个碱基的分子量为650/（4×10^9）g。

所需DNA分子量=基因长度×每个碱基的分子量。

6.计算基因测序过程中所需的测序深度。

假设基因长度为1000碱基，测序目标是每个碱基的覆盖率至少为5倍。

所需测序深度=基因长度×覆盖率。

7.计算基因治疗过程中所需的治疗剂量。

假设治疗一个患者需要1000万个治疗基因拷贝，每个拷贝的分子量为2000g/mol。

所需治疗剂量=治疗基因拷贝数×每个拷贝的分子量。

8.计算基因编辑过程中所需的编辑效率。

假设编辑一个基因需要编辑位点被成功编辑的概率为90%。

编辑效率=成功编辑的位点数/总编辑位点数。

答案及解题思路：

1.答案：7.5×10^8个碱基对。

解题思路：1.5×10^9个碱基/2=7.5×10^8个碱基对。

2.答案：600个碱基对。

解题思路：AT=100%，因此GC=40%，AT=60%。碱基对数目=1500×60%/2=600。

3.答案：0.67和0.8。

解题思路：转录效率=1000/1500=0.67，翻译效率=300/1000=0.3。

4.答案：0.0001。

解题思路：突变频率×携带者频率=1/10000×1/100=0.0001。

5.答案：6g。

解题思路：3000×(650/（4×10^9）)=6g。

6.答案：5000碱基。

解题思路：1000×5=5000。

7.答案：2g。

解题思路：1000万×2000g/mol=2g。

8.答案：0.9。

解题思路：成功编辑的位点数/总编辑位点数=0.9。七、应用题1.根据遗传基因的基本概念，解释遗传病的遗传方式。

解答：

遗传病是指由遗传物质（DNA）的异常引起的疾病。遗传病的遗传方式主要有以下几种：

1.遗传方式：常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、性染色体连锁遗传、X连锁隐性遗传、Y连锁遗传等。

2.遗传方式的具体解释：例如常染色体显性遗传病是指一个显性等位基因就能导致疾病的表现，而常染色体隐性遗传病则需要两个隐性等位基因才能表现出疾病。

2.根据DNA的双螺旋结构，解释基因突变的原因。

解答：

DNA的双螺旋结构由两条互补的链通过氢键连接形成，基因突变的原因可能包括：

1.碱基对的替换：一个碱基被另一个碱基取代。

2.碱基对的插入或缺失：一个碱基对被插入或从DNA链中缺失。

3.碱基对倒位：DNA链上的一段碱基顺序颠倒。

这些变化可能导致基因序列的改变，进而影响基因的功能。

3.根据基因表达调控的机制，解释基因突变对生物体的影响。

解答：

基因表达调控包括转录和翻译两个阶段，基因突变可能通过以下方式影响生物体：

1.影响转录：突变可能改变启动子或增强子区域，影响RNA聚合酶的结合，导致基因表达水平改变。

2.影响翻译：突变可能改变密码子的阅读框，导致蛋白质合成错误。

3.影响蛋白质功能：突变可能改变蛋白质的结构，影响其功能或稳定性。

4.根据基因克隆技术的原理，设计一个基因克隆实验方案。

解答：

基因克隆实验方案：

1.设计引物：根据目标基因序列设计特异性引物。

2.DNA提取：从细胞或组织中提取DNA。

3.PCR扩增：使用特异性引物进行PCR扩增目标基因。

4.限制酶切割：使用合适的限制酶切割扩增的DNA片段。

5.连接：将目的基因片段与载体DNA连接。