T-SXSF 12-2025 沙棘叶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法

ICS65.020.01CCSX04SXSF2024-12-30发布T/SXSF12－2025前言 II 12规范性引用文件 3术语和定义 4仪器和设备 5材料和试剂 6标准曲线绘制 27试样及待测溶液制备 28测定 29计算 210精密度 3T/SXSF12－2025本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由山西省林学会提出并监督管理。本文件由山西省林学会团体标准化技术委员会归口。本文件起草单位：山西省林业和草原科学研究院。本文件主要起草人：刘英翠、马倩、张春媛、田建华、魏璐、史鹏、梁爱军、张娜、陈春。1T/SXSF12－2025沙棘叶中总黄酮含量的测定方法分光光度比色法本文件规定了沙棘叶总黄酮含量的测定方法的材料和试剂、仪器和设备、标准曲线绘制、试样及待测溶液制备、测定、计算和精密度等要求。本文件适用于采用分光光度比色法测定沙棘叶总黄酮含量。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4仪器和设备可见分光光度计、分析天平（精度0.0001g）、超声波清洗机、电热恒温鼓风干燥箱、植物粉碎机。5材料和试剂5.1通用材料采用沙棘干叶或湿叶为试验材料，干叶不少于100g，湿叶不少于500g。5.2试剂无水乙醇（C2H5OH，分析纯）、亚硝酸钠(NaNO2，分析纯)、硝酸铝(AL(NO3)3，分析纯)、氢氧化钠(NaOH，分析纯)、芦丁标准品(UV≥98%)、水。水质达到GB/T6682规定的三级及以上。5.3试剂5.3.1亚硝酸钠溶液（50g/L）：用分析天平称取5g亚硝酸钠加水溶解稀释至100mL。5.3.2硝酸铝溶液（100g/L）：用分析天平称取10g硝酸铝加水溶解稀释至100mL。5.3.3氢氧化钠溶液（40g/L）：用分析天平称取4g氢氧化钠加水溶解稀释至100mL。5.3.460%乙醇溶液：60mL无水乙醇用水稀释至100mL。5.3.530%乙醇溶液：30mL无水乙醇用水稀释至100mL。5.3.6芦丁标准溶液（0.2mg/mL）配制：用分析天平称取芦丁标准品20mg，加60%乙醇溶液适量，置水浴上微热使溶解，冷却后转移置50mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，2T/SXSF12－2025摇匀。量取25mL，置50mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，配置成浓度0.2mg/mL的芦丁标准溶液。6标准曲线绘制吸取0.3mL、0.6mL、1mL、1.5mL、2mL、3mL芦丁标准溶液，分别置25mL容量瓶中，各加30%乙醇溶液至6.0mL，分别加5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6min；再加10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6min；后加入4%氢氧化钠试液4mL，用30%乙醇溶液定容至100mL，摇匀，放置15min，以30%乙醇溶液为空白，配制成浓度为0.0024、0.0048、0.008、0.012、0.016、0.024mg/mL的芦丁标准系列工作液。用可见分光光度计在500nm波长处测定工作液吸光度值。以工作液浓度为横坐标，工作液吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并采用最小二乘法求得直线回归方程，参数（R2≥0.999）。7试样及待测溶液制备7.1试样处理将沙棘叶放入60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎，过60目筛。7.2待测溶液制备用分析天平称取沙棘叶粉测试样品1.0000g(±0.01g），共3份，分别加入60%乙醇溶液20mL于三角瓶中，用超声波清洗机处理20min,超声温度40℃,静置过滤，收集滤液于100mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，得提取液。量取25mL提取液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得3份待测溶液。8测定量取待测溶液0.5mL，置25mL容量瓶中，加30%乙醇溶液至6mL，分别加5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6min；再加入4%氢氧化钠溶液4mL，用30%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置15min，放入比色皿中，作为待测溶液。吸取待测溶液0.5mL，加30%乙醇溶液定容到25mL容量瓶中，放入比色皿中作为空白溶液。将待测溶液和空白溶液同时置于可见分光光度计中，在500nm波长处测定吸光度值。9计算沙棘叶中总黄酮含量按式（1）计算。X=C×V×dW×100%…………(1)式中：X——总黄酮的含量，单位为百分率（%）；C——由直线回归方程求出待测溶液中芦丁浓度，单位为毫克/毫升（mg/mLV——待测溶液定容体积，单位为毫升（mL若使用7.2步骤时，即为100d——样品定容